Vaccimonitor

Phenotypical and Serological Characterizations of Pseudomonas aeruginosa Clinical Isolates

Generalmente, Pseudomona. aeruginosa es considerada un patógeno oportunista. Bajo ciertas condiciones esta bacteria puede infectar diferentes tipos de heridas, particularmente quemaduras, pero también el tracto urinario y respiratorio. Esta bacteria se asocia con neumonía, endocarditis, meningitis y algunas cepas producen grandes cantidades de polisacárido extracelular, las que se asocian a casos de fibrosis quística. El objetivo de este estudio fue caracterizar cepas clínicas aisladas de pacientes con diferentes patologías con el fin de seleccionar cepas a partir de las cuales obtener antígenos candidatos a una vacuna por subunidades. Los serotipos de mayor frecuencia encontrados fueron el O1, O4, O6, O9 y O11 y se halló una relación entre el serotipo O9 y los casos de fibrosis quística. También se evaluó la virulencia de las mismas mediante el ensayo de siembra en rojo congo. El 72% de las 18 cepas evaluadas produjeron colonias blancas en más del 50% del total de colonias, lo que indica que la mayoría de nuestras cepas son virulentas, ya que este ensayo es una medida indirecta de la capacidad de producir alginato, el cual es considerado un importante factor de virulencia.

The aim of this study was to characterize P. aeruginosa clinical strains isolated from patients with different pathologies in order to select the strains for obtaining candidate antigens for subunit vaccines. The most common serotypes found were O1, O4, O6, O9 and O11. We found a relation between O9 serotype and cystic fibrosis patients. The ability to produce white colonies was also studied by Congo red assay. Seventy two percent of 18 evaluated strains produced white colonies in more than 50% of the total of colonies, which indicates the most of our strains are virulent because this assay is an indirect measurement of the capacity to produce alginate, considered an important virulence factor.

Tetanus and Diphtheria Immunity in at-risk labor force of Finlay Institute

El Instituto Finlay es un centro rector en la producción e investigación de vacunas, en él laboran técnicos e investigadores encargados del desarrollo y la producción de la vacuna múltiple DPT, los cuales, al estar en contacto directo con los microorganismos necesarios para su producción, constituyen un personal con riesgo de contraer una de estas enfermedades infecciosas. Es importante disponer de vacunas eficaces que minimicen los riesgos por la exposición a agentes biológicos patógenos durante el trabajo, las cuales deben ser aplicadas siguiendo un esquema de inmunización que garanticen una adecuada protección. Debido a la carencia en nuestro país de datos sobre el estado de inmunidad de trabajadores expuestos laboralmente contra estas enfermedades y dada la importancia de esta información para la aplicación de un esquema de inmunización que cumpla con un criterio real de protección, nos propusimos realizar este trabajo. Para el desarrollo del mismo se suministró una dosis de refuerzo de una vacuna combinada de toxoide tetánico y diftérico a un grupo de trabajadores expuestos; los títulos fueron determinados antes y después de la vacunación por métodos inmunoenzimáticos. La mayor parte de los trabajadores presentaban al inicio del estudio un nivel adecuado de antitoxina tetánica, sin embargo se demostró una inadecuada protección para el caso de la difteria antes de la inmunización, por otra parte el empleo de una dosis de DT no parece que sea suficiente para inducir una respuesta antidiftérica duradera, por lo que se propuso modificar el esquema actual de vacunación de los trabajadores.

Finlay Institute is a leading center in vaccine production and research. This center has a highly qualified staff of technicians and researchers in charge of the development and production of the multiple DPT vaccine. All these people are at risk of acquiring anyone of these infectious diseases, while being in direct contact with the microorganisms needed for its production. It is quite important to have an efficient vaccine that minimizes the risks of exposure to infectious biological agents during research,which should be applied following an immunization schedule that guarantees adequate protection. Because of the lack of data in our country about the immunization status of exposed workers, and due to the importance of this information, we decided to carry out this project. For its development, a reinforced dose of a combined vaccine of tetanus and diphtheria toxoid, was applied to a group of exposed workers; the titers were determined before and after vaccination by immunoenzymatic methods. Most of these workers at the beginning of the study had an adequate level of tetanus antitoxin, however an inadequate protection for diphtheria was demonstrated before immunization. On the other hand, the application of a DT dose doesn't seem to be sufficient to induce a lasting antidiphteric response. We recommend a modification in the current vaccination schedule.

Determination of the optimal assay conditions for an ELISA to detect serum IgG antibodies against Pseudomonas aeruginosa O11 lipopolysaccharide

La selección de sueros de donantes sanos para la obtención de una gamma hiperinmune contra la infección por Pseudomona aeruginosa, así como la evaluación de la respuesta inmunológica de cualquier candidato vacunal contra este microorganismo necesita contar en el laboratorio con técnicas estandarizadas. En este trabajo se realizaron los ensayos necesarios para el montaje y la optimización de un ELISA indirecto para la determinación de anticuerpos séricos de clase IgG anti- LPS de P. aeruginosa O11. Se evaluaron la concentración de recubrimiento, condiciones de bloqueo, dilución de trabajo de las muestras a evaluar y del conjugado con el fin de seleccionar en cada caso las mejores respuestas para el control positivo, el control negativo y el blanco del ensayo. Una concentración de 1,5 μg/mL de LPS O11 en PBS toda la noche a 4 °C como recubrimiento, la necesidad de no incluir un paso adicional de bloqueo y el conjugado humano anti IgG-HRP diluido 1:3000, 1 h a 37 °C resultaron las variables óptimas para el ensayo. Por otra parte, se estableció el rango lineal de la curva del control positivo y se seleccionó la dilución de trabajo 1:100 para las muestras de sueros a evaluar.

An indirect quantitative ELISA was developed for the evaluation of the immune response elicited by Pseudomona aeruginosa vaccine candidates, and for obtaining hyperimmune immunoglobulins to be used in the medical treatment. Standard and control sera were made, and the optimal LPS coating dilution of the polystyrene plates, and the sample and conjugate dilutions were established. A 1.5 μg/mL concentration of O11 LPS in PBS, incubated for 16-20 h at 4°C were found to be the best coating conditions. The blocking step was unnecessary. A 1:100 dilution for the serum samples and 1:3000 for the anti-human IgG:HRP conjugate were selected. Accurate quantitative determinations were possible in the lineal range of the standard curve.