Vaccimonitor

Estudio de inmunogenicidad de la vacuna antitifoídica cubana de polisacárido Vi vax-TyVi® en ratones

Salmonella enterica serovar Typhi es un microorganismo que provoca más de 16 millones de casos de fiebre tifoidea con aproximadamente 600 000 muertes al año en todo el mundo. Dentro de las vacunas antitifoídicas la de polisacárido capsular Vi ha encontrado, gracias a sus incuestionables ventajas, una gran aceptación entre productores y consumidores. El presente trabajo aborda el estudio de inmunogenicidad de la vacuna antitifoídica cubana de polisacárido Vi vax-TyViâ en ratones. El estudio estuvo conformado por un grupo control no inoculado y un segundo grupo que recibió 0,05 mL de la vacuna por vía intramuscular. Se tomaron muestras de sangre a los -3, 7, 14, 21, 28, 42, 56 y 84 días. La actividad de anticuerpos IgG antipolisacárido Vi de los sueros individuales fue determinada por ELISA. Los datos fueron analizados por grupo y por sexo y se calculó el porcentaje de seroconversión, considerándose respondedor aquel animal que al menos aumentara en cuatro veces su título inicial. La respuesta de anticuerpos inducida por la vacuna mostró un aumento notable de los títulos de IgG antipolisacárido Vi en el grupo vacunado (100% de seroconversión), mientras que el grupo control no incrementó sus niveles mínimos iniciales (0% de respondedores). Aunque más dispersa, la respuesta de anticuerpos antiVi fue significativamente mayor en las hembras que en los machos.

Salmonella enterica serovar Typhi is a microorganism causing more than 16 millions of typhoid fever cases with about 600 000 deaths per year around the world. Typhoid fever vaccines based on S. Typhi Vi capsular polysaccharide have been well received between producers and customers. The present work deals with the immunogenicity study in mice of the Cuban polysaccharide typhoid fever vaccine vax-TyVi. The experimental design included a control group and one group receiving 0.05 mL of Cuban vaccine by intramuscular route. Blood samples were taken at days -3, 7, 14, 21, 28, 42, 56 and 84, and the titers of IgG antibodies against Vi polysaccharide were measured by ELISA. Data were analyzed by group and sex. Seroconversion rates ( ≥ 4 fold increase of anti-Vi antibody titers over pre-immunization levels) were calculated. The antibody response induced after vaccination showed enhanced IgG titers against Vi polysaccharide in the vaccinated group (100% of seroconversion rates) while the control group kept its initial titers (0% of respondents). IgG response was significantly higher in females than in males.

Validación de un ELISA tipo inhibición para cuantificar polisacárido Vi en la vacuna antitifoídica cubana vax-TyViââ

Se describe la validación de un ELISA tipo inhibición, reportado por primera vez en la literatura científica para cuantificar un antígeno vacunal: el polisacárido Vi de Salmonella Typhi, para ser empleado en el control de la calidad de la vacuna antitifoídica cubana vax- TyViâ. El ensayo consta de seis pasos: 1) Recubrimiento de placa de reacción con poli-L-lisina y posteriormente polisacárido Vi; 2) Bloqueo con leche descremada; 3) Inhibición o neutralización en tubos de suero anti-Vi de conejo, respectivamente, con polisacárido Vi de Curva de Calibración (concentraciones desde 1-32 μg/mL), control positivo y muestras de vacuna (3 diluciones); 4) Neutralización de anticuerpos anti-Vi libres, presentes en las mezclas anteriores, por el Polisacárido de Recubrimiento; 5) Reconocimiento de anticuerpos anti-Vi unidos a la placa (conjugado anti-IgG de conejo-fosfatasa alcalina) y 6) Revelado por reacción enzima-sustrato. Los parámetros de validación estudiados y sus resultados fueron: 1) Precisión, expresada como coeficiente de variación a tres niveles de concentración de polisacárido, comprendidos en el rango de su especificación (35, 50 y 70 μg/mL) y evaluada en términos de repetibilidad; precisión intraensayos (cuatro analistas) y reproducibilidad (seis analistas): £ 20%; 2) Linealidad (100*R2): 99,68 %; 3) Límite de detección: 0,5 μg/mL; 4) Exactitud (recuperación para las tres diluciones de la muestra: entre 100 y 118%), y 5) Robustez: no influye 1,5 h de bloqueo (p = 0,52) ni ± 5 min para leer placa (p = 0,56); influye grandemente la calidad del agua (p = 0,026), a favor del agua para inyección. El ensayo es adecuado para los fines propuestos y es una medida de la inmunogenicidad in vitro del polisacárido Vi.

Validation of an inhibition-type ELISA intended for quantifying a vaccine antigen, Vi polysaccharide from Salmonella typhi, is reported here for the first time in a scientific paper. It is devoted to the quality control of the Cuban typhoid vaccine vax-TyViä. The test requires six steps: (1) Coating the plate with poly-L-lysine and then Vi polysaccharide; (2) Blocking with skimmed milk; (3) Inhibition (or neutralization) in tubes of rabbit Vi antiserum with Vi polysaccharide contained in the Standard Curve (concentrations from 1 - 32 μg/mL), Positive Control and vaccine samples (3 dilutions) respectively; (4) Neutralization of free Vi antibodies existing in the previous mixtures by the coating polysaccharide; (5) Recognition of Vi antibodies bonded to the plate (Anti-rabbit IgG-alkaline phosphatase) and (6) Revealing by means of the enzyme-substrate reaction. The studied validation parameters and their results were: (1) Precision, expressed as the coefficient of variation, at three different polysaccharide concentration levels comprising the vaccine specification range (35, 50 and 70 μg/mL) and evaluated in terms of Repeatability, Intermediate Precision (four analysts) and Reproducibility (six analysts): £ 20%; (2) Linearity (100*R2): 99.68%; (3) Detection Limit: 0.5 μg/mL;(4) Accuracy (recovery at three different sample dilutions): between 100 y 118%, and (5) Robustness: neither 1.5 h blocking nor ± 5 min for plate reading influences the test (p = 0.52 and 0.56 respectively); however, water quality greatly influences the results (p = 0.026); water for injection showed the best results. The test is appropriate for the purpose it was validated; it also allows evaluating in vitro immunogenicity of Vi polysaccharide.

Reactogenicidad e inmunogenicidad de una nueva vacuna de toxoide tetánico y diftérico con concentración reducida en adolescentes cubanos

Se realizó un estudio aleatorizado, controlado y a doble ciegas en 225 adolescentes cubanos entre 13 y 16 años de edad, con el objetivo de evaluar la reactogenicidad y la inmunogenicidad de una nueva vacuna de toxoide tetánico y toxoide diftérico con concentración reducida, producida en el Instituto Finlay, con respecto a su similar comercial IMOVAX dT adult de Aventis Pasteur. Se tomaron muestras de suero antes y 21 días después de la vacunación. La reactogenicidad de ambas vacunas fue similar. Los síntomas y signos, tanto locales como generales fueron moderados y aparecieron principalmente durante las primeras 72 h después de la vacunación. Todos los voluntarios vacunados alcanzaron niveles protectores (³0,1 UI/mL) de antitoxina contra el tétanos y la difteria. El 99,25% de los inmunizados con la vacuna experimental y el 98,36% de los voluntarios del grupo control presentaron niveles de antitoxina tetánica correspondientes a una protección de larga duración (³1,0 UI/mL); para la antitoxina diftérica se alcanzaron estos niveles en el 81,20% y 80,33% de los voluntarios en cada grupo. Los títulos medios geométricos de antitoxina tetánica (21,73 UI/mL) y antitoxina diftérica (2,55 UI/mL) inducidos por la nueva vacuna fueron superiores (p<0,05) a los del grupo control: 15,55 UI/mL y 1,84 UI/Ml respectivamente(p<0.05).

A randomized, controlled and double-blind trial was carried out in 225 Cuban teenagers aged 13-16 to evaluate the reactogenicity and immunogenicity of a new tetanus toxoid and reduced diphtheria toxoid vaccine (Finlay Institute) with respect to IMOVAX dT adult control vaccine (Aventis Pasteur). Serum samples were taken before and 21 days after immunization. The reactogenicity of both vaccines was similar. The general and local adverse events were mild and mainly detected in the first 72 hours after vaccination. All volunteers showed protective levels of tetanus antitoxin and diphtheria antitoxin (³0.1 IU/mL). 99.25% of subjects who received the experimental vaccine and 98.36% of control subjects showed long-term protective values of tetanus antitoxin (³1.0 IU/mL). These diphtheria antitoxin levels were respectively detected in 81.20% and 80.33% of volunteers.The geometric mean titer values for tetanus antitoxin and diphtheria antitoxin induced after vaccination were 21.73 IU/mL and 2.55 IU/mL respectively, higher than antitoxin levels of control group: 15.55 IU/mL and 1.84 IU/mL respectively (p<0.05).

Estudio de toxicidad por dosis única y tolerancia local de una vacuna antimeningocócica tipo B en ratas Sprague Dawley

La vacuna antimeningocócica tipo B, objetivo de este estudio, contiene vesículas purificadas de la membrana externa del meningococo del serogrupo B de la cepa (Cu- 385 - 83 ) B:4:P1.19,15. El esquema de vacunación propuesto en humanos consiste en tres dosis de 0,5 mL, separadas por un intervalo óptimo de ocho semanas. El objetivo de este estudio de toxicidad en ratas Sprague Dawley (SD) fue determinar la toxicidad potencial, letalidad, órganos, sistemas susceptibles y otros eventos adversos, así como la toxicidad en el sitio de inoculación después de la administración de una dosis de la vacuna en estudio. Los resultados indicaron que, bajo las condiciones del estudio y según los criterios establecidos para evaluar los resultados, la vacuna antimeningocócica tipo B, no produce efectos tóxicos en el modelo animal usado. Todo lo que se observó fueron formaciones granulomatosas a nivel del punto de inoculación. Estas formaciones han sido reportadas como pertenecientes a los adyuvantes de depósito, como el hidróxido de aluminio, usado en otras vacunas parenterales. Se concluye que la vacuna antimeningocócica tipo B resultó satisfactoria en las pruebas de toxicidad por dosisúnica y tolerancia local realizadas en la especie rata.

The meningococcal B vaccine contains purified outer membrane vesicles of serogroup B meningococcus of strain (Cu- 385 - 83) B: 4:P1.19, 15. The vaccination scheme proposed for humans consists in three doses of 0.5 mL, separated by an optimal interval of eight weeks. The objective of this toxicity study in Sprague Dawley (SD) rats was to determine potential toxicity, lethality, sensitive organs and systems and other adverse events as well as toxicity at the inoculation site after administration of one dose of the vaccine under study. Results indicated that,under the study conditions and according to the criteria established to evaluate results, the meningococcal B vaccine does not produce toxic effects in the animal model used. Only granulomatous formations at the level of the inoculation site were observed. These formations have been reported tocharacteristic of deposit adjuvants like aluminium hydroxide used in other parenteral vaccines. It is concluded that the meningococcal B vaccine resulted to be satisfactory in the tests of toxicity by single dose and local tolerance carried out in rats.

Influenza. Vacunas clásicas y novedosas a las puertas de otra pandemia

Los virus de la influenza A, además del hombre, infectan otros mamíferos y una gran variedad de especies de aves. Desde 1997 se sabe que cepas aviares son capaces de infectar al hombre provocando una enfermedad generalmente leve. El brote actual de gripe aviar H5N1 en humanos ha puesto en alerta a la comunidad científica internacional, no solo por su elevada mortalidad sino por su potencialidad en la generación de una nueva pandemia. Las autoridades sanitarias han puesto en marcha un amplio programa para la preparación ante esta contingencia, que abarca diferentes campos, desde el diagnóstico y la detección precoz de los brotes tanto en animales como en humanos, la caracterización sistemática de las cepas circulantes, el sacrificio de aves infectadas, la producción masiva de antivirales y por supuesto el desarrollo y producción a gran escala de vacunas eficaces. En este último tema se trabaja intensamente tanto en el mejoramiento de las vacunas ya existentes como en la búsqueda de alternativas basadas en tecnologías de nueva generación.

Influenza A viruses infect humans and other mammalian and bird species. Since 1997, it has been known that some avian strains were able to infect humans, generally causing a mild disease.The present H5N1 avian influenza outbreak has led to a heightened level of awareness of the scientific and public health officials, not only because of its high mortality, but also because of its potential to trigger a new pandemic. In response to this emerging threat, the international sanitary authorities are developing a wide preparation program, which involving different measures such as the accurate diagnosis of animal and human outbreaks; systematic characterization of circulating strains; elimination of infected birds; mass production of antiviral drugs,and research,development and large scale production of efficacious vaccines. In the last aspect, great effort is being carried out for the improvement of classic vaccines and in the search for alternatives based on new technologies.