Vaccimonitor

Stability studies of shelflife and in stress conditions of Leptospirosis vaccine vax-SPIRAL^®

Los estudios de estabilidad constituyen requisito fundamental para avalar el Registro Médico Sanitario de un nuevo medicamento. Por tal motivo se diseñó y llevó a cabo un proyecto de estudio de estabilidad de vida de estante y en condiciones de estrés térmico a la vacuna antileptospirósica cubana vax-SPIRAL®, donde se evaluaron las propiedades físicoquímicas y biológicas fundamentales del producto (características organolépticas, pH, concentración de tiomersal, inocuidad inespecífica, potencia y esterilidad), con el objetivo de recomendar las condiciones de almacenamiento que garantizarán su calidad y se propone la fecha de vencimiento. Para esto, parte de las muestras se conservaron a temperatura de 2-8 ºC durante 30 meses (vida de estante), y las muestras restantes de cada uno de los lotes en estudio se incubaron a 37 ºC por 7 días; 25 ºC por 30 días y 45 ºC por 3 días (temperaturas de estrés). Se concluyó que la vacuna vax-SPIRAL® puede ser considerada un producto estable para los parámetros evaluados en el presente estudio, siempre que se mantenga a la temperatura de 2-8 ºC. Se propone un período de validez de 24 meses para esas condiciones.

Stability studies are mandatory for Registration Applications of a new drug substance. Shelf life and stress temperature stability studies were designed and carried out to the Cuban leptospirosis vaccine vax-SPIRAL®, in which main physico-chemical and biological properties of the product (organoleptic characteristics, pH, thiomersal concentration, unspecific innocuity, potency and sterility) were evaluated in order to recommend storage conditions and expiration date. For this purpose, part of the samples were stored between 2-8 ºC for 30 months (shelflife), and the remaining samples from each lot under study were incubated at 37 ºC for 7 days; 25 ºC for 30 days and 45 ºC for 3 days (stress temperatures). It was concluded that vax-SPIRAL® vaccine can be considered a stable product in terms of the parameters evaluated in the present study, provided that it is stored at 2-8 ºC. Under those conditions, a validity period of 24 months is proposed.

Evaluación de la respuesta de anticuerpos hacia antígenos de Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa es un patógeno extracelular que genera una respuesta de anticuerpos específicos con utilidad para el diagnóstico y vacunas. En el presente estudio nos propusimos evaluar en suero humano los niveles de anticuerpos contra antígenos relevantes de P. aeruginosa. Realizamos la determinación de anticuerpos IgG contra tres exoenzimas, consideradas como factores de virulencia de mayor importancia en infecciones. Este resultado dio paso a la evaluación del reconocimiento de IgG e IgA hacia antígenos de la envoltura celular bacteriana por ELISA de células enteras. Todos los sueros evaluados mostraron títulos de IgG e IgA superiores a los individuos sanos, con excepción de dos muestras de pacientes que no mostraron alto título. Este ensayo permitió analizar el nivel de reconocimiento hacia los antígenos más expuestos de la bacteria que incluyen principalmente LPS y proteínas de membrana externa. Se encontró diferencias entre los valores de densidad óptica a 450 nm de individuos sanos y enfermos. El método usado permitió seleccionar dos sueros de pacientes de diferentes tipos de infecciones que fueron comparados por Western blot. Se observó que aunque los sueros tenían reacción hacia distintos serotipos de P. aeruginosa, la intensidad del reconocimiento variaba según el tipo de infección.

Pseudomonas aeruginosa is an extracellular pathogen which elicits a specific antibody response useful for diagnosis and vaccines. The aim of the present study was to evaluate in human serum the levels of antibodies against relevant antigens of P. aeruginosa. Determination of IgG antibodies against three exoenzymes, considered as virulence factors of great importance in infections, was carried out. Then, evaluation of IgG and IgA recognition towards antigens of the outer membrane was performed by ELISA of whole cells. All the evaluated sera showed IgG and IgA titers higher than those of the healthy individuals, with exception of two patients' samples that did not show high titers. This assay allowed the analysis of the recognition level towards the most exposed antigens of the bacterium mainly including LPS and outer membrane proteins. . Differences were found among optical density values at 450 nm of healthy and sick individuals. The method used allowed to select two patients' serum of different types of infections which were compared by Western blot. It was observed that although the sera reacted against different serotypes of P. aeruginosa, the recognition intensity varied according to the type of infection

**Evaluación en animales del efecto protector de una inmunoglobulina anti Pseudomonas aeruginosa para uso terapéutico**

Pseudomonas aeruginosa constituye uno de los agentes patógenos oportunistas de mayor frecuencia de aislamiento en los diversos procesos infecciosos, por lo que es reconocido como un gran problema de salud a nivel mundial. Al no existir un fármaco de alta efectividad ni vacunas disponibles contra esta bacteria, se emplea una terapia con inmunoglobulinas polivalentes comerciales que de forma combinada con los antibióticos contribuyen a eliminar la infección, aunque los preparados disponibles en el mercado no contienen concentraciones suficientemente elevadas de anticuerpos específicos contra este microorganismo. En este trabajo se llevó a cabo la evaluación en un modelo animal de una inmunoglobulina anti- Pseudomonas aeruginosa para uso terapéutico mediante un ensayo de reto con una cepa virulenta. Se evaluó dosis y vía de administración de la misma, así como el valor profiláctico o terapéutico de los anticuerpos. Esta gammaglobulina resultó ser protectora en animales mostrando una sobreviviencia cercana a un 75% en comparación con el grupo control no protegido y además se logra eliminar el estado de portador en los individuos infectados.

Evaluation in animals of the protective effect of an anti Pseudomonas aeruginosa immunoglobulin for therapeutic use Abstract Pseudomonas aeruginosa constitutes one of the opportunistic pathogenic agents with higher frequency of isolation in the different infectious processes; so it is recognized as a great health problem worldwide. As neither a high-effective medicine nor available vaccines exist against this bacterium, a therapy with commercial polyvalent immunoglobulins is used which combined with antibiotics help to eliminate the infection, although preparations available at the market do not contain concentrations of specific antibodies sufficiently high against a certain microorganism. In this work, evaluation of an anti Pseudomonas aeruginosa immunoglobulin for therapeutic use was carried out in an animal model by a challenge assay with a virulent strain. Dose and administration route as well as the prophylactic or therapeutic value of the antibodies were evaluated. This gammaglobulin turned out to be protective in animals showing a survival of about 75%% compared to the non- protected control group. The carrier state can be also eliminated in infected individuals

**Cuantificación de lipopolisacárido en un proteoliposoma obtenido a partir de la superficie externa de Vibrio cholerae O1**

El lipopolisacárido (LPS) de Vibrio cholerae O1, a diferencia de la mayoría de las bacterias gramnegativas, no es reactivo en el ensayo del KDO, un método ampliamente utilizado para la cuantificación de LPS. Este LPS puede ser cuantificado por peso seco cuando se trata del antígeno en estado puro, pero cuando se necesita cuantificarlo, por ejemplo en un proteoliposoma, se requieren métodos de hidrólisis fuerte para que la molécula de KDO se exponga y sea reactiva en el ensayo antes mencionado. En este trabajo describimos un método rápido, sencillo y reproducible que nos permite cuantificar el LPS en un proteoliposoma obtenido a partir de la superficie externa de V. cholerae O1, El Tor Ogawa, mediante el uso de un anticuerpo monoclonal anti-LPS Ogawa en Western blot y la posterior evaluación del perfil reactivo en un densitómetro, utilizando LPS Ogawa purificado y cuantificado por peso seco como patrón de referencia. Este método puede ser aplicado a cualquier otra preparación que contenga LPS y que no pueda ser evaluada por KDO

Unlike most of the Gram-negative bacteria, Vibrio cholerae O1 lipopolysacharide (LPS), does not react in KDO assay, a widely used method for the quantification of these molecules. Vibrio cholerae O1 LPS can be quantified by dry weight when it is in pure state, but when it is part of a more complex structure as proteoliposomes, other methods such as strong hydrolysis are required for exposition of KDO molecule. In this paper, a rapid, simple and reproducible method for the quantification of LPS in a proteoliposome obtained from the external surface of Vibrio cholerae O1 El Tor Ogawa is described. The method consists in a Western blot assay using an anti- Ogawa LPS monoclonal antibody followed by the evaluation of the reactive profile by densitometry using a dry weight purified and quantified Ogawa LPS as reference pattern. This method can be applied to any other preparation containing LPS in which KDO method is not applicable

**Cuantificación de lipopolisacárido en un proteoliposoma obtenido a partir de la superficie externa de Vibrio cholerae O1**

Presente y futuro de la farmacovigilancia en la Industria Farmacéutica

Se realizó un estudio sobre los problemas de la vigilancia poscomercialización desde la industria farmacéutica. Las reacciones adversas a medicamentos y vacunas causan un aumento significativo en los costos de la atención sanitaria; las vacunas en particular tienen un beneficio diferido y desconocido y un riesgo inmediato, por lo cual se requiere de mayores estándares de vigilancia. La farmacovigilancia por sí misma tiene obstáculos que pueden ser mayores cuando se enfocan desde la industria farmacéutica. El acompañamiento o apadrinamiento como estrategia permite vencer esos obstáculos y establecer el sistema de vigilancia poscomercialización, lo cual ha sido práctica sistemática del Instituto Finlay y es la concreción de cómo se debe asumir un mayor nivel de responsabilidad en los productos con el ciclo completo. La experiencia en nuestro Instituto con relación al enfoque poscomercialización, donde se observan todos los factores y condiciones que inciden en efectos deseados o no de los productos, es un adelanto para que con la aplicación de herramientas epidemiológicas y farmacoeconómicas, obtener una mejor evaluación del impacto sanitario y económico en la aplicación de nuestras vacunas. La implementación y puesta en marcha de la farmacovigilancia en la industria de medicamentos es un desafío y una necesidad para completar el desarrollo de la industria farmacéutica

A study about problems of post-commercialization surveillance in the pharmaceutical industry was carried out. Adverse reactions to medicines and vaccines cause a significant increase in the costs of sanitary assistance; vaccines in particular have a deferred and unknown benefit and an immediate risk. This is the reason why higher surveillance standards are required. Pharmaco-surveillance by itself presents obstacles which can be greater when they are focused on from the pharmaceutical industry. Company or sponsorship as strategy allows overcoming these obstacles and establishing the post-commercialization surveillance system which has been systematic practice of Finlay Institute. The experience of our Institute where all factors and conditions influencing on products are observed is an advance to obtain a better evaluation of the sanitary and economic impact on the application of our vaccines. Implementation and starting of pharmaco-surveillance in the medicine industry is a challenge and a necessity to complete the development of the pharmaceutical industry.

Vaccimonitor

Stability studies of shelflife and in stress conditions of Leptospirosis vaccine vax-SPIRAL®

Evaluación de la respuesta de anticuerpos hacia antígenos de Pseudomonas aeruginosa

Evaluación en animales del efecto protector de una inmunoglobulina anti Pseudomonas aeruginosa para uso terapéutico

Cuantificación de lipopolisacárido en un proteoliposoma obtenido a partir de la superficie externa de Vibrio cholerae O1

Cuantificación de lipopolisacárido en un proteoliposoma obtenido a partir de la superficie externa de Vibrio cholerae O1

Presente y futuro de la farmacovigilancia en la Industria Farmacéutica

Stability studies of shelflife and in stress conditions of Leptospirosis vaccine vax-SPIRAL^®

**Evaluación en animales del efecto protector de una inmunoglobulina anti Pseudomonas aeruginosa para uso terapéutico**

**Cuantificación de lipopolisacárido en un proteoliposoma obtenido a partir de la superficie externa de Vibrio cholerae O1**

**Cuantificación de lipopolisacárido en un proteoliposoma obtenido a partir de la superficie externa de Vibrio cholerae O1**