Vaccimonitor

**Nasopharyngeal carriers of Neisseria meningitidis in workers with occupational risk**

Los portadores de Neisseria meningitidis constituyen la principal fuente de infección y transmisión de la enfermedad meningocócica. Conocer su prevalencia, las características de las cepas aisladas y los factores de riesgos asociados con el estado de portador, aportan datos valiosos al control y vigilancia epidemiológica de esta entidad clínica. Para cumplimentar los objetivos propuestos se realizó un estudio transversal descriptivo de portadores de N. meningitidis en 112 trabajadores de un centro de producción de biofarmacéuticos de La Habana, con edades comprendidas entre 18_60 años. Previo a su realización se cumplió con las exigencias bioéticas requeridas para este tipo de estudio. A todos se les realizó un exudado nasofaríngeo y una encuesta, donde se indagó sobre factores de riesgo (edad, sexo, hacinamiento, hábito de fumar, consumo de bebidas alcohólicas, amigdalectomía y antecedentes de infección respiratoria) que favorecen la condición del portador. La identificación de las cepas de N. meningitidis se realizó según métodos convencionales, la clasificación de los serogrupos se hizo por aglutinación en láminas portaobjetos con antisueros comerciales y para la identificación de los serotipos y subtipos se empleó un ensayo inmunoenzimático (ELISA) de células enteras con anticuerpos monoclonales. Se detectó un 8% de portadores de N. meningitidis con predominio del serogrupo B (77,8%) y el fenotipo más frecuente fue el B:4:P1.4 (33,3%). Al analizar el estado de portador y su asociación con los factores de riesgo, la edad (p = 0,05) y el sexo (p = 0,013) mostraron diferencias significativas. Se demostró la posibilidad del riesgo ocupacional en aquellos individuos que por su profesión están en contacto con microorganismos patógenos.

Neisseria meningitidis carriers are the main infection and transmission source of the meningococcal disease. To know their prevalence, the characteristics of isolated strains and the risk factors associated to carrier status, provide important information for epidemiological surveillance and control. A descriptive-transversal study on N. meningitidis carriers was performed. It involved 112 workers from a biopharmaceutical production center in Havana, from 18 to 60 years old. Bioethical requirements were complied before starting the study. A nasopharyngeal swab was performed to all subjects and they were surveyed to find out on risk factors (age, sex, overcrowding, smoking and drinking habit, amygdalectomy and background of respiratory infection) that may favor the condition of the carrier. The identification of N. meningitidis strains was carried out using conventional methods, the classification of the serogroups by slide agglutination with commercial antisera and the identification of serotypes and subtypes by an immunoenzymatic assay (ELISA) of whole cells with monoclonal antibodies. Eight percent of N. meningitidis carriers was detected, serogroup B (77.8%) was predominant and B:4:P1.4 (33.3%) was the most frequently observed phenotype. When analyzing the carrier status and its association to risk factors, statistically significant difference was only observed in age (p=0.05) and sex (p= 0.013). The possibility of occupational risk was demonstrated in those subjects, who due to their profession are involved with pathogenic microorganisms.

**Strategy to verify quality of Escherichia coli strains kept in the collection of the Center of Genetic Engineering and Biotechnology**

La colección de microorganismos de interés biotecnológico del Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología incluye diferentes cepas de bacterias y levaduras utilizables en la manipulación de genes mediante el empleo de la ingeniería genética y para la producción de proteínas recombinantes por métodos biotecnológicos. La colección de hospederos de Escherichia coli centraliza todas las cepas que se utilizan en los proyectos de investigación-desarrollo de la institución. Este microorganismo constituye una de las herramientas biológicas imprescindibles para el trabajo en ingeniería genética y la investigación molecular. La fidelidad de los resultados experimentales depende en parte de la calidad de los bancos de estas cepas, que está determinada por las condiciones de almacenamiento y las estrategias de evaluación de los mismos. La complejidad del manejo de esta colección está influida en gran medida por el hecho de que en los medios de propagación pueden crecer un gran número de contaminantes ambientales de difícil identificación. Mientras más similar es el contaminante a la cepa de interés, más difícil es lograr bancos puros con una estabilidad confiable para la conservación. En este trabajo se describe cómo se garantiza el control de calidad de los bancos de Escherichia coli. Los métodos y estrategias de verificación que se describen han sido desarrollados en nuestro laboratorio.

The Collection of Biotechnological-Interest Microorganisms of the CIGB includes several bacteria and yeast strains used in gene manipulation by means of genetic engineering and the production of recombinant proteins. The E. coli host collection contains all the strains used in the research projects of the institution. This microorganism is an important tool for genetic engineering and molecular research. Accuracy of results depends on the quality of the microorganism banks, which it is determined by the storage conditions and the evaluation strategies of these microorganisms. The complexity of the management of this collection is influenced by the fact that a great number of contaminants may grow in the propagation media and they are difficult to identify. The more similar is the pollutant to the strain of interest, the harder it is to obtain pure banks with reliable stability and conservation. This work describes how quality control is ensured in the E. coli banks. The verification methods and strategies described here have been developed in our laboratory.

In vitro neutralization assay to evaluate new hepatitis A vaccine candidates

La inmunidad contra el virus de la hepatitis A (VHA) se debe en primera instancia a la inducción de anticuerpos neutralizantes. Disponer de ensayos de neutralización es indispensable para evaluar nuevos candidatos vacunales contra este patógeno. En el presente trabajo se desarrolló un ensayo de neutralización in vitro que permitió evaluar la inmunogenicidad de mimotopos del VHA obtenidos mediante la tecnología de expresión en fagos al ser inmunizados ratones Balb/c. Diferentes diluciones de anticuerpos se incubaron con 10³ o 10² Dosis Infecciosas en Cultivo de Tejidos 50% (DICT50) del clon citopático HM175/18f de VHA, y se inocularon en placas con células FRhK4. Después de 7 días de incubación el título neutralizante se determinó como el recíproco de la dilución del suero capaz de reducir la multiplicación viral al 50%. Tanto 10³ como 10² DICT50 fueron neutralizadas por el anticuerpo monoclonal 7E7 y los sueros humanos (A12 y A31) positivos a anticuerpos anti-VHA. Los controles negativos del ensayo no neutralizaron al virus. Los títulos neutralizantes de los sueros de ratones inmunizados con fagos portadores de mimotopos de VHA oscilaron entre 4 y 16, mientras que los sueros preinmunes y los de ratones inmunizados con fago salvaje M13 no neutralizaron la infectividad viral. Este ensayo de neutralización resultó adecuado para la evaluación de los inmunógenos propuestos.

Immunity to hepatitis A virus (HAV) is in first instance due to neutralizing antibodies. Neutralization assays are essential to evaluate new candidate vaccines against this pathogen. In this paper, an in vitro neutralization assay to evaluate HAV vaccine candidates using phage-display technology is described. 10³ and 10² DICT50 of HAV were incubated with different antibodies preparations and were inoculated onto plates with FRhK4 cells. After seven days of incubation, the neutralizing titer was determined as reciprocal of the serum dilution reducing HAV growth (inhibition of CPE) by 50%. 10³ and 10² DICT50 were neutralized by 7E7 anti-HAV monoclonal antibody and anti-VHA positive human sera (A12 and A31). Negative controls of the assay did not neutralize viral infectivity. Sera from mice immunized with phages displaying VHA mimotopes had neutralizing titers from 4-16. Neither negative control nor pre-immune and sera from mice immunized with M13 wild type phage neutralized HAV. A simple and faster in vitro neutralization assay was developed to evaluate new HAV vaccine candidates.

**Evaluation of the potential of Mycobacterium smegmatis as vaccine Candidate against tuberculosis by in silico and in vivo studies**

In this study, we scanned multiple published databases of gene expression in vivo of M. tuberculosis at different phases of infection in animals and humans, to select 38 proteins that are highly expressed in the active, latent and reactivation phases. The selected proteins were predicted for T and B epitopes. For each proteins, the regions containing T and B epitopes were selected at the same time to look for identical epitopes on M. smegmatis based on sequence alignments. Preliminary studies of humoral immunogenicity and cross-reactivity with M. tuberculosis in mice using two M. smegmatis-derived experimental vaccines were carried out, demonstrating the immunogenicity of M. smegmatis proteoliposomes and the recognition of M. tuberculosis proteins by the sera of animals immunized with this vaccine candidate. The conjunction of in silico and in vivo studies suggested the potential for future evaluation of M. smegmatis as vaccine candidate against tuberculosis using different strategies.

En este estudio se revisaron múltiples bases de datos publicadas, relacionadas con experimentos de expresión de genes de M. tuberculosis in vivo en diferentes estadios de la infeccción en humanos y animales. Se identificaron 38 proteínas con elevada expresión en las fases activa, latente y de reactivación de la infección. Se llevó a cabo la predicción de epítopes T y B en dichas proteínas. Las regiones de cada proteína que contenían simultáneamente epítopes T y B se seleccionaron y utilizaron para identificar regiones idénticas en M. smegmatis mediante el alineamiento de secuencias. Se llevaron a cabo estudios de inmunogenicidad humoral y reactividad cruzada con M. tuberculosis en ratones inmunizados con dos vacunas experimentales obtenidas a partir de M. smegmatis, demostrándose la immunogenicidad de los proteoliposomas y el reconocimiento de proteínas de M. tuberculosis por el suero de ratones vacunados con este candidato vacunal. Los resultados obtenidos con los estudios in sílico e in vivo sugieren la potencialidad para evaluación futura de candidatos vacunales obtenidos a partir de M. smegmatis para la prevención de la tuberculosis.