Vaccimonitor

Epidemiological and microbiological features of 86 confirmed meningococcal disease cases in Cuba, 1998-2007

En la presente investigación se describió el comportamiento de la enfermedad meningocócica en 86 casos notificados con aislamiento de Neisseria meningitidis en Cuba, entre 1998-2007, a través de la distribución espacial y temporal de los casos, la caracterización fenotípica de las cepas aisladas y la identificación de algunos factores de riesgo del hospedero que pudieran incidir en su cambio fenotípico. Se calcularon los porcentajes y el índice de cambio de la estructura fenotípica del meningococo con diferentes criterios. Predominó el grupo de pacientes menores de un año (30,2%) y la forma clínica meningítica (76,7%). La letalidad fue de 15,1%. Enfermó con el mismo fenotipo de la cepa vacunal (B:4:P1.19,15) el 58,1% de los casos. Se detectaron cambios fenotípicos en el 41,9% de las cepas aisladas, principalmente en niños entre 5-9 años (2001 y 2007), residentes en la región occidental y central del país. Los que enfermaron en julio, septiembre, diciembre y abril y residían en las provincias de Matanzas, La Habana y Villa Clara, se asociaron con el cambio fenotípico de las cepas.

The present study describes the behavior of meningococcal disease in 86 cases notified with isolation of Neisseria meningitidis in Cuba from 1998-2007, through spatial and temporal distribution of cases, phenotypic characterization of isolated strains and identification of some host risk factors that may affect phenotypic switching of strains. Percentages and the rate of changes of the strain phenotypic structure with different criteria were calculated. Children under one year old (30.2%) and meningitis (76.7%) were predominant. Case-fatality rate was 15.1%. The 58.1% of cases were ill with the same vaccine strain phenotype (B:4:P1.19,15). Phenotypic changes were detected in 41.9% of the isolates, mainly in children of 5-9 years old who live in western and central regions. Children that fell ill in July, September, December and April and live in Matanzas, Havana and Villa Clara provinces were associated to phenotypic switching of strains.

Skin test with allergen extracts from pollens and relation to clinical signs of allergic rhinitis and bronchial asthma in Camagüey, Cuba

Los pólenes inciden sobre las mucosas provocando sensibilización alérgica, sin embargo, en Cuba son insuficientes los estudios sobre estos alergenos. Con el objetivo de conocer el comportamiento de Ambrosía psilostachya, Amaranthus leucocarpus, Helianthus annuus, Rumex acetosella, Lolium perenne, Cupressus lindley y Cocos nucifera, se realizó un estudio observacional analítico en el Servicio de Alergia del policlínico Previsora, Camagüey. La muestra fue de 529 individuos con rinitis o asma, con pruebas cutáneas por punción (prick test) positivas a los ácaros, hongos y pólenes; el 40% de la misma estaba sensibilizada a pólenes con prueba de provocación nasal a estos alergenos. Se compararon según gravedad de los síntomas y los valores del habón de 3, 4 y 5 mm. Los grupos etarios con valores más altos de sensibilización fueron los de 6 a 12 y 19 a 44 años. No hubo diferencias significativas de sensibilización a los pólenes según sexo. Ambrosía y Lolium presentaron los porcentajes más altos de respuesta cutánea, con habones de 3 mm en un 49,98% y 40,09%, respectivamente. Tampoco se detectaron diferencias significativas. El 89,6% de los pacientes sensibilizados reaccionaron clínicamente a la provocación nasal. En los asintomáticos predominaron los habones de 3 mm y en los graves los de 5 mm. Los pólenes constituyeron una causa importante de sensibilización alérgica. Existió relación entre las pruebas cutáneas y la prueba de provocación nasal. El diámetro del habón de la respuesta cutánea a prick test se relacionó con la severidad de los síntomas clínicos.

Although different types of pollens affect mucosal surfaces to trigger allergic sensitization, there are not enough studies on these allergens in Cuba. The objective of our research was to elucidate the behavior of Ambrosía psilostachya, Amaranthus leucocarpus, Helianthus annuus, Rumex acetosella, Lolium perenne, Cupressus lindley y Cocos nucifera. An analytical-observational study was conducted at the Allergy Service of the Previsora Clinic, Camagüey. The sample consisted of 529 patients with Rhinitis or Asthma and a positive skin test to mites, fungi and pollens. Forty percent of the sample showed sensitivity to pollens after a nasal challenge test. The cases were compared according to symptoms severity and wheal diameter: 3, 4 and 5 mm. The age groups with the highest degree of sensitization were 6-12 and 19-44 years of age, respectively. There were no significant differences of sensitization to pollens according to sex. Ambrosia y Lolium showed the highest percentages of skin response with wheals of 3 mm in 49.98% and 40.09%, respectively. However no significant differences were detected. The 89.6% of sensitized patients react clinically to nasal challenge test. Wheels of 3 mm were predominant in asymptomatic subjects while wheels of 5 mm in serious ones. Pollens were the most important cause of allergic sensitization. There was relation between skin and nasal challenge tests. The wheel diameter of skin response to the prick test was correlated to the severity of clinical symptoms

Validation of the technique of determination of total proteins by microcoomassie method to double wave longitude for the sample of Finished Product of hepatitis C core antigen

En el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología se obtuvo una formulación para un candidato vacunal del virus de la hepatitis C (VHC). Es un plásmido para la inmunización con ADN que contiene los genes de los tres antígenos estructurales del virus, mezclado con una variante truncada recombinante de la nucleocápsida del VHC como adyuvante molecular. Ambos compuestos se formularon en bulbos separados y se mezclaron en el momento de la inmunización. En el laboratorio de Desarrollo Analítica se validó la técnica de determinación de proteínas totales por el método de microcoomassie para la muestra de producto terminado (PT) del antígeno de la nucleocápsida del virus de la hepatitis C (HCcAg). Los parámetros validados fueron: especificidad, linealidad, rango, exactitud, precisión y estabilidad de la muestra de PT, bajo dos condiciones diferentes de almacenamiento. El método resultó ser específico para la cuantificación del HCcAg, sin interferencias del placebo de la muestra, a diluciones superiores a 1:8. La curva del microcoomasie fue lineal en el rango de trabajo de 5-40 µg/mL. Se demostró la exactitud del método (recuperación 100 ± 10%). En la evaluación del sistema se cumplieron los criterios de aceptación establecidos para la precisión: repetibilidad (CV £ 5%) y precisión intermedia (CV £ 10%). El PT es estable a (4 ºC y 22-25 ºC) durante los tiempos estudiados sin alteración en la concentración del HCcAg. La validación fue satisfactoria y el método fue adecuado para cuantificar proteínas en la muestra de PT. Este resultado permite dar cumplimiento a las especificaciones establecidas para este producto.

A formulation was obtained for a vaccinal candidate of hepatitis C virus (VHC) in the CIGB. It is a plasmid for the immunization with DNA contianing the genes of the three structural antigens of the virus, blended with a recombinant truncated variant of the protein of the core of the VHC, as molecular adjuvant. Both compounds were formulated in separate vials and were mixed at the moment of the immunization. In the laboratory of Development-analytic the technique of determination of total proteins was validated by the microcoomassie method for the sample of Finished Product (FP) of Hepatitis C core antigen (HCVcoreAg). The validated parameters were: Specificity, Linearity and Range, Accuracy, Precision, Stability of the FP sample under two different conditions of storage. The method was specific for the quantification of the HCcAg without interferences of sample placebo of FP to superior dilutions at 1:8. The curve of the microcoomassie for the FP was lineal in the range of work of 5-40 µg/mL. It demonstrated the accuracy of the method (100±10% recovery). In the evaluation of the system, the established acceptance criteria were completed for Precision: Repeatability (CV £ 5%) and Intermediate Precision (CV £ 10%). Temperatures studied in stability did not cause alteration in HCcAg concentration, and the FP can be stored for 15 days. Validation was satisfactory. The method is adequate to quantify the sample of the FP. This result allows us to comply with the specifications established for this product.

Risk assessment tools in the preparation of the solutions used in the production of Quimi-Hib^®

Entre las técnicas avanzadas de administración de riesgo se encuentran las herramientas de soporte estadístico, así como los histogramas y gráficos de frecuencia acumulada, los cuales sirven de base para la acumulación de datos. Se realizó un análisis de los mismos y se evaluó la influencia de diferentes parámetros sobre un proceso determinado para la toma de decisiones. Los resultados obtenidos demostraron que existe riesgo de contaminación de las soluciones en una cabina de flujo laminar. Todos los tampones evaluados cumplieron satisfactoriamente con los límites establecidos para el contenido de endotoxinas y límite microbiano. Los valores de carga microbiana, determinados por diferentes métodos en el ambiente de trabajo, estuvieron dentro de los límites, acorde con la clasificación de las áreas. La higienización de los tanques de preparación demostró que los procedimientos empleados garantizaron una adecuada remoción de los contaminantes. Se concluyó que los riesgos y escenarios evaluados fueron aceptables para alcanzar la calidad del producto.

Among the advanced techniques of risk management are the tools of statistical support, such as histograms and cumulative frequency plots, which are the basis for the accumulation of data. An analysis of these and evaluated the influe.nce of different parameters on a particular process for making decisions. The results showed that a risk contamination of the solutions named in a laminar flow cabinet in which filtered. All buffers tested satisfactorily complied with the limits for the content of endotoxin and microbial limit. The microbial load values determined by different methods in the workplace gave values within the limits, according to the classification of areas. The sanitizing preparation tanks showed that the procedures ensured adequate removal of contaminants. It was concluded that the risks and scenarios evaluated to achieve acceptable product quality.

**Sensitivity and Specificity of Skin Prick Test with standardized allergen extracts of Dermatophagoides pteronyssinus in adults**

La prueba cutánea por punción (PCP), que utiliza extractos alergénicos estandarizados de ácaros, es una herramienta diagnóstica sensible y confiable. La sensibilización IgE a los ácaros domésticos es una de las principales causas de enfermedades alérgicas respiratorias. En Cuba las especies de ácaros más relevantes son: Dermatophagoides pteronyssinus (Dp), D. siboney y Blomia tropicalis. El objetivo de este trabajo fue determinar la eficacia diagnóstica de la PCP, utilizando un extracto alergénico estandarizado de Dp de producción nacional (VALERGEN-DP, BIOCEN) y otros dos estándares comerciales foráneos (A: ALK, Holanda y B: Stallergenes, Francia). Se realizó un estudio analítico, conducido en 50 pacientes con antecedentes de alergia al polvo doméstico y IgE sérica positiva al Dp y 50 con iguales antecedentes, pero con IgE sérica negativa. Se realizaron réplicas de las punturas en ambos brazos, con una concentración de 20 000 UB/mL. En esta prueba con VALERGEN-DP el promedio del habón fue de 43,5 mm², un valor superior estadísticamente significativo con respecto el producto A (p=0,002). La coincidencia diagnóstica entre los tres productos fue de 98-99%. La PCP con VALERGEN-DP mostró un 98% de especificidad y 82% de sensibilidad. No fueron detectadas diferencias significativas (p>0,05) entre los productos para estos parámetros. La eficacia diagnóstica de la PCP con el VALERGEN-DP fue similar a la que se obtuvo utilizando dos extractos estándar, lo que justifica su utilización para el diagnóstico de la sensibilización a Dp en pacientes con síntomas de alergia frente al polvo doméstico.

Skin Prick Test (SPT) using standardized mite allergen extracts is a sensitive and reliable diagnostic tool. IgE sensitization to domestic mites has been identified worldwide as a major cause of respiratory allergic diseases. In Cuba, the most relevant species are: Dermatophagoides pteronyssinus (Dp), D. siboney and Blomia tropicalis. The aim of this work was to determine the diagnostic efficacy of SPT, using an standardized allergen extract of Dp, of national production (VALERGEN-DP, BIOCEN) and two other well known foreign commercial products (A: ALK, Netherlands and B: Stallergenes, France). An analytical study involving 50 patients with allergic antecedents to domestic dust and positive serum IgE and 50 with identical antecedents, but negative serum IgE was conducted. Replicate punctures were performed in both arms of patients using a concentration of 20 000 BU/mL. SPT with VALERGEN-DP produced a wheal mean of 43.5 mm², superior value statistically significant with respect to A product (p = 0.002). Diagnostic coincidence among the three products was 98-99 %. SPT with VALERGEN-DP showed 98% of specificity and 82% of sensibility and significant differences were not detected (p>0.05) between products for these parameters. Diagnostic efficacy of SPT using a validated allergenic extract of national production (VALERGEN-DP) was similar to SPT with the other standard extracts, what supports its use for the diagnosis from the sensitization to Dermatophagoides pteronyssinus in patients with allergic symptoms to domestic dust.

Strategies to obtain recombinant proteins in Escherichia coli

La expresión de proteínas recombinantes se ha favorecido con el uso de Escherichia coli debido a su relativo bajo costo, alta densidad de cultivo, su fácil manipulación genética y a las diversas herramientas biotecnológicas disponibles que son compatibles. En este artículo se presentan algunas estrategias para la expresión de Escherichia coli; se destacan factores genéticos y fisiológicos que incluyen: número de copias del vector de expresión, características del gen, estabilidad del ácido ribonucleico mensajero, promotor empleado, cepa utilizada, composición del medio de cultivo, parámetros de operación en el fermentador y también se abordan la conservación de cepas y la estrategia de cultivo y purificación.

Recombinant protein expression has been favored by the use of Escherichia coli due to its relatively low costs, high-density culture, easy genetic manipulation and also to compatible biotechnological tools. Strategies for recombinant expression in E. coli are presented in this paper. Genetic and physiologic factors are presented: number of copies of the expression vector, characteristic of the gene, ribonucleic acid (messenger) stability, promoter, host strain, clone stability, composition of the cultivation media, operation parameters in the bioreactor and cultivation and purification strategies.

Improvements in the potency assay of Bordetella pertussis

La potencia del componente pertussis, presente en la vacuna DPT-vax, se evalúa mediante el ensayo de Kendrick. La cepa recomendada por OMS para este ensayo es Bordetella pertussis 18 323, la cual debe ser conservada de manera que se asegure su viabilidad, pureza y virulencia. Como parte de dicho ensayo debe calcularse la concentración de una suspensión de la cepa, cuya opacidad se compara a simple vista con la 5ta Preparación Internacional de Referencia de Opacidad. Este método es muy inexacto y con frecuencia conduce a errores. En este trabajo se elaboró y caracterizó un lote de siembra de Bordetella. pertussis 18 323; se calculó la concentración de dicha cepa empleando una curva de calibración. El lote se empleó en ocho ensayos de potencia y en los mismos se cumplieron los criterios de validez establecidos.

Potency of pertussis component, present in DPT-vax, is evaluated by Kendrick assay. Strain Bordetella pertussis 18323 is recommended by WHO, which should be stored in a way that ensures its viability, purity and virulence. As part of the assay, the concentration of a strain suspension should be calculated, which opacity is compared at first sight with the Fifth Reference International Preparation of Opacity. This method is very inexact and frequently leads to errors. A seed lot from Bordetella. pertussis 18323 was elaborated and characterized in this study and the concentration of the strain using a calibration curve was calculated. The lot was used in eight potency assays and they complied with established validity criterion