Vaccimonitor

Lymphocytes Th1 are not exclusive of cellular immunity

Bibliometric study of the scientific production of Vaccimonitor (2000-2013)

Los estudios bibliométricos son importantes fuentes para el avance de las revistas científicas, su objeto es el tratamiento y análisis cuantitativo de las publicaciones científicas y forman parte de los estudios sociales de la ciencia; en ellos se utilizan indicadores cuantitativos de la actividad científica, por lo que constituyen medidas válidas para evaluar los niveles de producción científica de una publicación dada. En este trabajo se realizó un estudio bibliométrico de la producción científica de VacciMonitor, mediante diferentes indicadores cienciométricos valorados en el período del 2000-2013. A partir del año 2010 con la inserción de la revista en la base de datos Scielo se mantuvo homogéneo el número de artículos/número y un balance entre las diferentes tipologías de los artículos. Los trabajos originales fueron los de mayor representación en todos los números publicados. Los artículos nacionales son los más representativos, aunque se observa un creciente aumento en el envío de trabajos procedentes de Brasil. El mayor número de trabajos publicados corresponde al Instituto Finlay (136), el Instituto Pedro Kourí (11) y el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (9). Además en esta publicación también se incluyeron los autores más productivos.

Bibliometric studies are important sources to improve scientific journals. The treatment and the quantitative analysis of scientific journals is their objective, at the same time they are part of social studies of science. Since they use quantitative indicators of scientific activity they are considered valid measures to evaluate the levels of scientific production of a given journal. This paper presents a bibliographic study of the scientific production of Vaccimonitor that was carried out using different indicators from 2000 to 2013. Vaccimonitor was included in the database Scielo in 2000, keeping a homogeneous number of articles/number and adequate level among topics. The original papers were the most published. Although national articles are predominant, there has been an increase of articles from Brazil. The majority of published papers are from Finlay Institute (136), followed by Pedro Kourí Institute (11) and the Center of Genetic Engineering and Biotechnology (9). More productive authors are also included.

Evaluation of four Histoplasmacapsulatum DNA extraction methods and their use in PCR reactions

Histoplasmacapsulatum es un hongo endémico de Cuba y el agente causal de la histoplasmosis. Esta micosis se presenta en forma de brotes epidémicos, afecta a las personas, independiente de su estado inmunológico. Su diagnóstico se realiza mediante técnicas microbiológicas, serológicas e histológicas que tienen una sensibilidad moderada y son demoradas. Por lo que se hace necesario la estandarización de métodos moleculares rápidos y eficientes para el diagnóstico de esta micosis. Se evaluaron cuatro métodos de extracción del ADN (enzimático, mecánico y dos químicos: tiocianato de guanidinio y Tritón X-100) a partir de una cepa de H. capsulatum en fase filamentosa. Se determinó la concentración, la pureza, el rendimiento y la integridad del ADN mediante espectrofotometría y electroforesis en gel de agarosa. Se evaluaron dos técnicas de PCR con el ADN obtenido, con cebadores específicos de especie y otro con un cebador arbitrario. Los mejores resultados de concentración, pureza, rendimiento e integridad se obtuvieron con el método de extracción enzimático. Se logró la estandarización de las PCR con cebadores específicos, confirmándose así las 16 cepas estudiadas como H. capsulatum. Con el cebador arbitrario se amplificaron secuencias diferentes en las cepas ensayadas. Se demostró que el método de extracción enzimática brindó un ADN de buena calidad para su utilización en PCR. Este trabajo facilita el diagnóstico rápido y confiable de H. capsulatum en Cuba y brinda la posibilidad de identificar cepas con estructuras relacionadas genéticamente con los marcadores de patogenicidad y la virulencia, útiles para conformar un inmunógenovacunal.

Histoplasmacapsulatum is a fungus endemic from Cuba and it is the etiologic agent of histoplasmosis. This mycosis appears as epidemic outbreaks and affects people regardless their immunological status. Diagnosis of histoplasmosis is based on microbiological, histopathological and serological methods, which show moderated sensitivity or are time-consuming. Rapid and efficient molecular tools are highly demanding. Four DNA extraction methods (enzymatic, mechanic, and two chemistry: guanidine tiocianate and TX-100) were evaluated from a H. capsulatum strain in the mold phase. DNA concentration, purity, integrity and yield were estimated by spectrophotometry and agarose gel electrophoresis. Two PCR techniques were tested using specific and arbitrary primers. The best DNA extraction method results were obtained with the enzymatic procedure. Sixteen different Cuban H. capsulatum strains were confirmed by the PCR standardized with specific primers. Different sequences were amplified using the arbitrary primer. The enzymatic protocol is the best option for obtaining a good quality DNA for molecular analysis. This work has created a platform a faster and reliable diagnosis of H. capsulatum in Cuba, and provides the ability to identify strains with genetically related structure of pathogenicity and virulence markers useful as vaccine immunogen.

Implementation of a quantitative-polymerase chain reaction for the detection of Mycoplasma genitalium

El diagnóstico de las infecciones por Mycoplasmagenitalium mediante métodos bacteriológicos tradicionales resulta laborioso y poco práctico. Es por ello que los métodos moleculares basados en la amplificación del ADN se utilizan con fines diagnósticos de infecciones causadas por este microorganismo. En Cuba no existen informes de la implementación y utilización de los métodos de reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) para la detección y cuantificación de este patógeno. En este trabajo se implementó una qPCR para la detección y cuantificación de M. genitalium mediante la amplificación de un fragmento del gen mgpB que codifica para la proteína adhesina celular, mediante la tecnología LightCycler®(Roche), utilizando los métodos de qPCRSYBR Green I y TaqMan. Se evaluó la especificidad y sensibilidad de dicha PCR utilizando ADN de M. genitalium y de otros micoplasmas de origen humanos. Se logró la implementación de ambos métodos de qPCR con un límite de detección de 3,6 geq/µL, siendo la plataforma TaqManla que mostró mejor eficiencia. Ambos métodos mostraron una alta especificidad para la detección de M. genitalium y no se detectaron reacciones cruzadas con otros micoplasmas de origen humano. Se implementó por primera vez en Cuba una qPCR para la detección de M. genitalium. El método TaqMan mostró mejor desempeño parala futura aplicación de esta metodología en muestras clínicas. El presente trabajo permitirá realizar estudios de caracterización genética y antigénica de las cepas circulantes en Cuba, útiles para conformar un inmunógenovacunal.

The diagnosis of M. genitalium infections by bacteriological culture is not feasible due to slow growth and that is time-consuming. Consequently, molecular methods using DNA amplification are widely used in the infection diagnosis procedure. There are no reports in Cuba of the implementation and use of quantitative Polymerase Chain Reaction methods for the detection and quantification of this pathogen. The aim of this study was to implement a qPCR method for the detection of M. genitalium by the amplification of the mgpBadhesin gene using two LightCycler® (Roche) protocols, SYBR Green I and TaqMan. The specifity and sensitivity were evaluated by using DNA of M. genitalium as well as other mycoplasms of human origin. In both qPCR-protocols, a limit of detection of 3.6 genome equivalents per µL template (geq/µL) was reached. The TaqMan protocol showed better efficiency than the SYBR Green assay. Both protocols showed a high specificity for the detection of M. genitalium, without cross-reactions with other mycoplasmas of human origin. For the first time in Cuba, a qPCR for detection of M. genitalium was implemented. The TaqMan method showed a better performance than the SYBR method and should be used for future applications in clinical samples. The present work will allow performing future studies of genetic and antigenic characterization of the circulating strains in Cuba, useful as vaccine immunogen.

Using the caprylic acid in obtaining the horse immunoglobulin anti tetanus toxin

Las inmunoglobulinas de caballo antitoxina tetánica purificadas, con altas concentración de anticuerpos y actividad biológica, se utilizan como sueros heterólogosy sueros estándar para la producción de la vacuna correspondiente. No obstante, la selección de agentes precipitantes para la purificación de las mismas constituye un problema en términos de pureza, rendimiento y de economía, aún por resolver. En este estudio se describieron las condiciones para el fraccionamiento de plasma antitoxina tetánica de caballo mediante precipitación con ácido caprílico. A las muestras se les añadió solución de ácido acético/acetato de sodio para alcanzar fuerzas iónicas de 0,05 a 0,4 moles/L y ácido caprílico para obtener concentraciones de 1 al 7 % (v/v), con agitación vigorosa. Las proteínas no-inmunoglobulinas precipitaron en estas condiciones, mientras que las inmunoglobulinas permanecieron en el sobrenadante. Se seleccionaron las mejores condiciones de fraccionamiento y se comparó esta metodología con la precipitación con sulfato de amonio. Los mejores resultados se obtuvieron cuando se añadió el ácido caprílico al plasma hasta alcanzar una concentración final de 3%, a una fuerza iónica de 0,2 moles/L y un pH ajustado a 4,5. La IgG antitoxina fraccionada con ácido caprílico se obtuvo con una media de recuperación de proteína de 91-95%, la concentración de proteínas fue de 27,1-29,3 mg/mL y la relación albúmina/inmunoglobulina de 0,019-0,021. Se alcanzó una pureza entre 91-95% y la actividad de antitoxina osciló entre el 93-96%.

Purified horse anti tetanus toxin immunoglobulins with high antibody concentration and biological activity, are used as heterologous sera and standard serum for corresponding vaccine. However, the selection of precipitating agents for the purification of them is a problem in terms of purity, yield and economy, which still remains to be solved. In this study, a procedure to fractionation horse plasma anti tetanus toxin by Caprylic acid precipitation is described. A solution of acetic acid/sodium acetate was added to the samples to achieve different ionic strengths, 0.05-0.4 moles/L, and caprylic acid was added to each volume to reach final concentrations from 1 to 7% (v / v), with vigorous stirring for 60 min. Non-immunoglobulin proteins precipitated under these conditions, while immunoglobulins remained in the supernatant, which was then diafiltered to remove caprylic acid and concentrate inmunoglobulins. This methodology was compared to that based on ammonium sulfate fractionation. The best results were given when caprylic acid was added to plasma, until a final caprylic acid concentration of 3% was reached, at ionic strength 0.2 moles/L and pH adjusted to 4.5. The IgG recovery was 91-95% by using the caprylic acid method. It was achieved a protein concentration of 27.1-29.3 mg/mL and an albumin/immunoglobulins ratio of 0.019-0.021. The purity was 91-95% and the anti-tetanus toxin activity recovery of 93-96%.

Validation of Ellman's method for determining sulfhydryl group concentrationin samples of the synthetic vaccine against Haemophilus influenzae type b

Se validó el método de Ellman para la determinación de grupos sulfhidrilos de la producción del Ingrediente Farmacéutico Activo de la vacuna contra el Haemophilusinfluenzaetipo b (Hib). Se evaluaron los parámetros: linealidad, rango de trabajo, especificidad, exactitud y precisión. El método fue lineal en el rango de 0,25-4 mM/L. Se demostró que la técnica fue específica con una exactitud entre 95 y 105%. La repetibilidad y la precisión intermedia mostraron coeficientes de variación inferiores al 5% y 10% respectivamente, por debajo de los criterios de aceptación requeridos para estos parámetros. Se estableció el reactivo hidrocloruro de L-cisteína monohidratado como control positivo del método. Este ensayo por su precisión, especificidad y exactitud se convierte en una eficaz herramienta para el control del proceso de obtención de esta vacuna.

Ellman´s method for determining sulfhydryl groups in the Haemophilusinfluenzae type b vaccine was validated. The following parameters were evaluated: linearity and working range, specificity, accuracy and precision. The method has proven to be linear in the range from 4 to 0.25 mM/L, it also demonstrated to be specific with accuracy from 95 to 105%. Repeatability and intermediate precision showed coefficients of variation of less than 5% and 10% respectively, below the acceptance criteria required for these parameters. L-cysteine hydrochloride monohydrate reagent was established as a positive control. Taking into account its precision, specificity and accuracy; this method becomes a necessary tool for carrying out process control in order to obtain this vaccine