Vaccimonitor

Caracterización proteómica de vesículas de membrana externa extraídas de Shigella sonnei

Las vacunas compuestas por vesículas de membrana externa (VMEs) previenen de manera exitosa la enfermedad meningocócica del serogrupo B. Esta plataforma tecnológica de obtención puede ser aplicada para otros patógenos bacterianos Gram negativos. Una vacuna de VMEs desarrollada contra Shigella sonnei fue obtenida a través de una extracción de componentes celulares y su caracterización por electroforesis en geles de poliacrilamida unidimensional (1D). Se estudiaron las mejores condiciones de solubilización de las muestras, separación electroforética e identificación a través de espectrometría de masas acoplada a cromatografía de alta presión después del corte de las bandas y su tratamiento enzimático con tripsina. En esta etapa se identificaron un total de 57 proteínas en 23 bandas (2,5 proteínas por banda escindida), 47 de las proteínas no repetidas. Las proteínas inmunogénicas presentes en VMEs de S. sonnei fueron cuantificadas en cuanto a masa molecular por 1D-Western blotting en membranas de nitrocelulosa con anticuerpos obtenidos a partir de ratones inmunizados con las VMEs. Como que las bandas electroforéticas 1D contenían más de una proteína, se estudiaron las mejores condiciones de separación por el método de electroforesis bidimensional (2D) para el establecimiento del mapa proteico; tal que el incremento del tamaño de las tiras, el tiempo de focalización y la aplicación catódica garantizaron la mayor resolución.

Outer membrane vesicles (OMVs) vaccines successfully prevent Group B meningococcal disease. This platform technology may be applied against other Gram negative bacterial pathogens. An OMV vaccine against Shigella sonnei was prepared by detergent extraction of cells and characterised by one-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (1D). The protein components were quantified by staining and scanning and the composition of bands were defined by coupled high-performance low chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry after band excision and in-gel trypsin digestion. 57 proteins contained in 23 bands (2.5 proteins/split band) were detected, 47 of them were not repeated. The S. sonnei OMVs immunogenic proteins were identified by 1D-immunoblotting, after transfer of proteins to a nitrocellulose membrane and treatment with antibodies generated by immunisation of mice with the OMVs. The bands detected by 1D had more than a single proteins, that is why we studied the best conditions for molecular separation by two-dimension electrophoresis (2D) for establishing the protein map; such that the increase of strips size, time of isoelectric focusing (IEF) and cup-cathodic loading guaranteed the highest resolution.

**Evaluación de un antígeno de Brucella abortus para aglutinación en placa como prueba tamiz en el diagnóstico de la brucelosis bovina**

Este trabajo tuvo como objetivo obtener y validar un antígeno buferado de Brucella abortus para la prueba de aglutinación en placa como prueba diagnóstica de base de la brucelosis bovina. Se formularon tres lotes de antígeno a partir de la multiplicación de la cepa 99 de Brucella abortus. Se realizaron los controles de calidad correspondientes (determinación de pH, volumen celular, esterilidad, capacidad buferante) y las pruebas serológicas para la evaluación del desempeño. Se emplearon 1070 muestras de suero bovino (350 positivas y 720 negativas) previamente controladas con las pruebas de diagnóstico establecidas. Se determinó la sensibilidad y especificidad diagnóstica y relativa, los valores predictivos positivos y negativos, la eficacia y la concordancia. En los tres lotes todas las características evaluadas resultaron estar dentro de los parámetros establecidos para este tipo de producto. La especificidad y sensibilidad diagnósticas fueron de 99,5% y 100% respectivamente. El valor predictivo positivo fue de 99,1%, el valor predictivo negativo fue de 100% y la eficacia de un 99,7%. El antígeno mostró una sensibilidad y especificidad relativas de un 100% y la concordancia resultó ser clasificada como muy buena. La evaluación del desempeño arrojó resultados satisfactorios, demostrando que el método de producción empleado es factible para la obtención de un producto con adecuada eficacia

The objective of this work was to obtain and validate a buffered Brucella abortus antigen for plaque agglutination test as the basic diagnostic test for bovine brucellosis. Three batches of antigen were formulated from the multiplication of strain 99 of Brucella abortus. Quality controls (determination of pH, cell volume, sterility, buffering capacity) and serological tests for performance evaluation were performed. 1070 bovine serum samples (350 positive and 720 negative) previously tested with the established diagnostic tests were used. Diagnostic and relative sensitivity and specificity, positive predictive values and negative predictive values, efficacy and concordance were determined. In all lots the evaluated characteristics proved to be within the parameters established for this type of product. Diagnostic specificity and sensitivity were 99.5% and 100%, respectively. The positive predictive values was 99.1%, the negative predictive values was 100% and the efficacy was 99.7%. The antigen showed a relative sensitivity and specificity of 100% and the concordance was classified as very good. The performance evaluation showed satisfactory results, demonstrating that the production method used is feasible to obtain a product with adequate efficiency

Influencia de la procedencia de los componentes del medio de cultivo en la calidad de los ensayos microbiológicos para la determinación de bacteriófagos

La contaminación por virus bacterianos es uno de los problemas más difíciles de evaluar en la industria biotecnológica moderna, sobre todo en las producciones de proteínas que están basadas en cepas recombinante de Escherichia coli. Para certificar que un banco de cepas está libre de bacteriófagos el método más recomendado sigue siendo la inducción de la fase del ciclo lítico sobre placas con medios semisólidos. En este trabajo nos propusimos evaluar medios de cultivos elaborados con bases de diferentes casas comerciales para la detección de bacteriófagos contaminantes. Para ello utilizamos un aislado de bacteriófago ambiental y la cepa sensible LE 392 y bases de las firmas OXOID, BioCen y Biolife. Después de estandarizar la metodología de ensayo se evaluó la habilidad de una preparación concentrada del aislado ambiental de formar placas de lisis en los medios elaborados con reactivos de las tres casas comerciales. La mayor cantidad de placas de lisis se obtuvo cuando se emplearon las bases provenientes del Centro Nacional de Biopreparados, el medio donde menos placas de lisis observamos fue empleando bases proveniente de la Casa comercial Biolife con dos órdenes de magnitud menos. El medio preparado con bases provenientes de la casa comercial OXOID fue el que mostró mejor consistencia entre lotes

Contamination by bacterial viruses is one of the most difficult problems to evaluate in the modern biotechnology industry, especially in the productions of recombinant proteins that are based on Escherichia coli strains. To certify that a strain bank is free of bacteriophage, the most recommended method is still the induction of the lytic cycle phase on plates with semisolid media. In this work we set out to evaluate means of cultures made with bases of different commercial houses for the detection of contaminating bacteriophages. For this purpose we used an environmental bacteriophage isolate and the LE392 sensitive strain and bases of the firms OXOID, BioCen and Biolife. After standardization of the test methodology, the ability of a concentrated preparation of the environmental isolate to form lysis plates in the media made with reagents from the three commercial houses was evaluated. The largest number of lysis plates was obtained when using the bases from the National Center of Biopreparates, the means where less lysis plates were observed was using bases from the Biolife Commercial House with two orders of magnitude less. The medium prepared with bases from the commercial house OXOID was the one that showed better lot to lot consistency

Evaluación de conformidad en la calibración del canal de medición de conductividad para aguas farmacéuticas

Entre los sistemas críticos para la producción de productos inyectables en el Centro de Inmunología Molecular se encuentra el canal de medición de la conductividad, tanto para agua purificada como para el agua para inyección. De acuerdo con el cumplimiento de las Buenas Prácticas de Producción, estos sistemas se someten regularmente a procesos de validación, donde la calibración del canal de conductividad es una práctica obligatoria para la calificación del desempeño. Un equipo o sistema de medición para ser fiable requiere una evaluación de la conformidad, con una probabilidad mayor o igual al 95%. Para dar cumplimiento a los requisitos regulatorios y directrices actuales se propone como criterio la evaluación de la conformidad en la calibración del sistema de agua farmacéutica. Se armoniza el procedimiento de calibración y las regulaciones farmacéuticas internacionales actuales para la medición de la conductividad del agua para productos inyectables. Se definieron las características metrológicas, las fuentes de incertidumbre se cuantifican y se determinan los intervalos de aceptación, para conseguir una probabilidad de la conformidad en la calibración igual al 95% a partir del conocimiento de la capacidad de medición, con el fin de responder a los requerimientos de las agencias regulatorias internacionales para la industria biofarmacéutica

Among critical systems at the Center of Molecular Immunology is the channel of conductivity measurement for both purified water (PW) as for water for injection (WFI). In accordance with the Good Manufacturing Practice compliance, these systems are regularly subjected to validation processes, where the calibration of conductivity channel is a mandatory practice for performance qualification. An equipment or system of measurement to be reliable requires a conformity assessment with a probability greater than or equal to 95%. The compliance in accordance with regulatory requirements and current guidelines conformity assessment in the calibration of PW and WFI system is proposed as a criterion. The calibration procedure and the current international pharmaceutical regulations for water conductivity measuring for injectable products are harmonized. The metrological characteristics are defined, sources of uncertainty are quantified and acceptance intervals are determined, to achieve a probability of the Conformity in the calibration equal to 95% from knowledge of measurement capability, in order to respond to requirements of international regulatory agencies for the biopharmaceutical industry

Eventos adversos supuestamente atribuidos a la vacunación o inmunización. Isla de la Juventud, Cuba, enero/2013-octubre/2016

Todo programa de inmunización tiene como meta alcanzar el más alto grado de protección contra las enfermedades inmunoprevenibles, con las más bajas tasas de reacciones adversas; constituyendo la vacunación un instrumento fundamental para la salud pública. El objetivo de este trabajo fue caracterizar los eventos adversos supuestamente atribuidos a la vacunación en la Isla de la Juventud, Cuba, entre enero/2013 y octubre/2016. Se realizó una investigación observacional descriptiva de corte transversal, puesta en práctica mediante la vigilancia pasiva. Se utilizó como fuente primaria para la recolección de datos la encuesta epidemiológica en los 507 pacientes que presentaron eventos adversos. Se comprobó que los años 2014 y 2015 superaron la tasa global para ese período: 34,6 por 10000 dosis administrada (DA), mientras que el área de salud Leonilda Tamayo Matos fue quien aportó la mayor tasa de eventos: 197 (39,7 por 10000 DA). Las vacunas con mayores notificaciones de reactogenicidad fueron: Pentavalente 280 (252,0 por 10000 DA), DPT 66 (168,4 por 10000 DA) y la Antimeningocócica-BC: 86 (92,6 por 10000 DA). Se evidenció la mayor tasa de eventos adversos en el año 2014, predominando el área de salud Leonilda Tamayo Matos. Los eventos adversos más comunes fueron la fiebre y las reacciones locales. Los resultados obtenidos demuestran las bajas tasas de eventos adversos graves. Se demostró una vez más la confiabilidad del sistema y seguridad de las vacunas en Cuba

The goal of any immunization program is to achieve the highest protection degree against diseases preventable by immunization, with the lowest rates of adverse reactions; vaccination constituting a fundamental instrument of public health. The objective of this work was to characterize the adverse events supposedly attributed to vaccination in the Isle of Youth, Cuba, from January 2013 to October 2016. A descriptive, observational and cross-sectional study was carried out by passive surveillance. The epidemiological questionnaire was used as a primary source for gathering data in the 507 patients with adverse events. It was demonstrated that the years 2014 and 2015 surpassed the global rate for that period (34.6 per 10000 administered doses), while the health area Leonilda Tamayo Matos contributed the highest rate of events: 197 (39.7 per 10000 administered doses). The vaccines with most reports were: Pentavalente 280 (252.0 in 10000 administered doses), DPT 66 (168.4 per 10000 administered doses) and the meningococcal-BC 86 (92.6 per 10000 administered doses). The highest rate of adverse events was observed in the year 2014, with predominance in the health area Leonilda Tamayo Matos. The results obtained demonstrate the low rate of serious adverse events. The most common manifestations were fever and severe local reactions. The reliability of the system and the vaccine safety were once again reaffirmed