Biotecnología Aplicada

An update on clinical surfactant preparations and respiratory disease

The pulmonary surfactant and respiratory disease are tightly linked. Adequate surfactant activity remains critical for optimal lung function throughout life, and secondary surfactant dysfunction may contribute to the process of many lung diseases, including Acute Respiratory Distress Syndrome, asthma, cystic fibrosis and pneumonia among others. Attempts to treat these lung diseases with exogenous surfactants have been only partially successful. The objective of this article is to carry out an update on clinical surfactant preparations and immunomodulatory properties, as well as all related to clinical trials of clinical surfactant preparations and respiratory diseases in the pharmaceutical market today. The results show the potential to extent the use of the exogenous surfactant preparations to other respiratory disease different than Neonatal Respiratory Disease Syndrome. The importance of immunomodulatory functions of lung surfactant and the aim to evaluate the effectiveness of including different drugs as ingredient of a surfactant preparation represent the research's active field on surfactant topic.

El surfactante pulmonar y las enfermedades respiratorias están estrechamente relacionados. La actividad adecuada del surfactante es esencial para la función óptima del pulmón en los seres humanos. Una disfunción secundaria del surfactante pulmonar puede contribuir al proceso de enfermedades pulmonares como el síndrome de insuficiencia respiratoria aguda, el asma, la fibrosis cística y las neumonías, entre otras. Los intentos de tratar estas enfermedades con surfactantes exógenos han sido parcialmente exitosos. Esta es una actualización referente a las preparaciones clínicas de surfactantes y sus funciones inmunomoduladoras, y lo que acontece en el mercado en relación con los ensayos clínicos que emplean estas preparaciones para mitigar enfermedades pulmonares. Los resultados de un análisis informacional muestran el potencial para extender tales preparaciones en el tratamiento de enfermedades respiratorias diferentes al síndrome de insuficiencia respiratoria aguda del neonato. La relevancia de las funciones inmunomoduladoras del surfactante pulmonar y la evaluación de su potencial formulación de conjunto con otros medicamentos, son un campo de investigación activo.

Growth Hormone Releasing Peptide 6 (GHRP6) reduces liver fibrosis in CCl4 chronically intoxicated rats

Tissue fibrosis is a leading cause of morbidity and mortality. Current treatments for conditions such as hepatic fibrosis have been unsuccessful. The growth hormone relasing peptide 6 (GHRP6) is endowed with cardioprotective actions but its antifibrotic effect had not been anticipated. We examined the GHRP6 ability to prevent and revert liver cirrhosis after induction in Wistar rats by a subcutaneous administration of CCl4. GHRP6 effects were examined after concomitant and delayed administration to toxic respectively. The percentages of hepatic fat, fibrosis, nodularity and septae thickness were histologically and morphometrically determined. Ascitis and portal dilation were judged by ultrasound and serum biochemical profile and oxidative stress parameters determined. Mechanistic involvement of selective gene/proteins was assessed by RT-PCR and immunohistochemistry. Microarrays showed gene expression profiles of GHRP6-treated liver samples on CapitalBio Rat Genome Oligo Array. GHRP6 concomitant intervention prevented in more than 85% parenchymal fibrotic induration (p < 0.0001) and therapeutic administration for only 15 days allowed for 37% fibrotic clearance (p = 0.0004) with more than 30% reduction of septae thickness (p = 0.0011). The 60 days GHRP6 administration scheme produced a 75% reduction of the fibrotic area with more than 60% reduction of nodularity. GHRP6 reduced oxidative damage enhancing the activity of antioxidant enzymes. Vimentin and alpha smooth muscle actin immunodetection profile indicated GHRP6 reduced the number of activated stellate cells. GHRP6 administration reduced fibrogenic factors as TGF-ß and CTGF on Kupffer cells. Differentially expressed genes in the microarray experiment indicated GHRP6 modulate the redox balance and parenchymal cells response to injury. These evidences suggest GHRP6 may control the liver's fibroplastic response.

La fibrosis es causa fundamental de morbilidad y mortalidad. Los tratamientos actuales han fracasado. El péptido liberador de la hormona de crecimiento-6 (GHRP6) ejerce efectos cardioprotectores, pero no se ha descrito su acción antifibrótica. Se examinó la propiedad del GHRP6 para prevenir y revertir la cirrosis hepática, luego de su inducción en ratas mediante la administración de CCl4. Se evaluó el porcentaje de grasa hepática, fibrosis, nodularidad y grosor septal mediante estudios histomorfométricos y la ascitis o dilatación portal por ultrasonido. Se determinó el perfil bioquímico y los parámetros de estrés oxidativo en suero, así como la participación de genes y proteínas, mediante reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa e inmunohistoquímica. Se utilizó un microarreglo de oligonucleótidos del genoma de rata para estudiar el perfil de expresión de los genes inducidos por el GHRP6. La intervención concomitante con GHRP6 previno la induración fibrótica en más del 85% (p < 0.0001). La administración terapéutica durante 15 días permitió la remoción fibrótica del 37% (p = 0.0004), la reducción del grosor septal superó el 30% (p = 0.0011). La administración durante 60 días redujo las áreas fibróticas en 75%, y la reducción de la nodularidad fue de más del 60%. El GHRP6 redujo el daño oxidativo porque aumentó la actividad de las enzimas antioxidantes y las células estrelladas activadas positivas a vimentina y actina alfa de músculo liso. También redujo la expresión de factores fibrogénicos sobre las células Kupffer. El perfil de expresión de genes indicó que el GHRP6 modula el balance redox y la respuesta al daño tisular en las células parenquimales. Estas evidencias sugieren que el GHRP6 pudiera controlar la respuesta fibroplásica del hígado.

Study and isolation of aerobic hydrocarbon-degrading bacteria from Cuban shorelines

The isolation of aerobic marine bacteria able to degrade hydrocarbons represents a promising alternative for the decontamination of oceanic and coastal environments. In the present work, twelve water and sediment samples from the Felton coastline in the Province of Holguín were collected and screened with Bushnell-Haas medium supplemented with light crude oil or with seawater supplemented with yeast extract and crude oil as a carbon source, obtaining twenty seven and six bacterial isolates respectively that were able to grow in these media. The obtained isolates were then subjected to selection in Bushnell-Haas medium supplemented with a heavy crude oil, selecting three strains able to degrade this hydrocarbon mixture within a period of seven days. Pure cultures of these strains were further used in crude oil biodegradability assays. Total petroleum hydrocarbon (TPH) degradation was evaluated through SARA analysis, employing gas chromatography with an FID detector and infrared spectroscopy to analyze the aliphatic and aromatic hydrocarbon fractions, respectively. All three stains removed more than 60% of the TPH and one of them showed the best degradation potential with figures above 65% for the entire hydrocarbon fraction, except resins. Two of the strains were also able to decrease C17:Pr and C18:Ph ratios to less than 50% in comparison to the abiotic control. Two of these strains were phenotypically identified as sp., and the remaining one as sp. The degradation potential exhibited by these new isolates warrants further studies on their possible application to decontaminate coastal environments affected by oil spills.

El aislamiento de bacterias marinas aerobias como posibles degradadoras de hidrocarburos, es una variante muy prometedora para la descontaminación de mares y costas. Se recogieron doce muestras de agua y de agua con sedimentos de las costas de Felton (Holguín, Cuba). Se empleó el medio Bushnell-Haas con petróleo crudo ligero y, alternativamente, agua de mar suplementada con extracto de levadura y petróleo crudo, como fuentes de carbono. Se obtuvieron 33 cepas bacterianas, que se sometieron a un proceso de selección en el medio Bushnell-Haas suplementado con crudo pesado, de las que se seleccionaron tres porque degradaban los hidrocarburos en siete días. Su capacidad de degradación se evaluó a escala de laboratorio. La remoción de los hidrocarburos totales del petróleo (HTP) se determinó mediante el análisis de los saturados, los aromáticos, las resinas y los asfáltenos. Los análisis de las fracciones saturadas y las aromáticas fueron mediante cromatografía de gases con detector de ionización de llama y espectroscopia infrarroja, respectivamente. Las tres cepas seleccionadas removieron más del 60% de los HTP. Una de ellas mostró valores de remoción superiores al 65% en todas las fracciones, excepto en las resinas; mientras que dos de ellas disminuyeron las tasas de C17/pristano y C18/fitano a menos del 50% con respecto al control abiótico. Dos de las cepas se identificaron fenotípicamente como del género , y otra como del género . Las potencialidades biodegradadoras de estos microorganismos en la limpieza de costas marinas han generado nuevos estudios.

On the isolation of immunostimulatory active acemannan from Aloe barbadensis

Acemannan from Aloe barbadensis was obtained with four processes: 1) size exclusion chromatography (SEC) using Sepharose CL-4B matrix followed by ethanolic precipitation; 2) SEC, ultrafiltration using hollow-fiber cartridges (30 kDa or 0.1 µm) and ethanolic precipitation; 3) SEC, precipitation with cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) and ethanolic precipitation; and 4) direct precipitation with CTAB and ethanolic precipitation. The detergent CTAB was effective to concentrate chromatographic eluates (process 3) and allowed the direct isolation and purification of acemannan from crude ethanolic extracts (process 4), without recurring to SEC. Process 4 also decreases operation time (9 days vs. 15 days in process 3), and costs regarding raw materials. Both processes generate materials devoid of detectable levels of anthraquinones and contaminating DNA, and proteins below 5% of dry weight. This material was essentially made of mannose; 97% obtained in processes 1-3 and 75% in process 4, with a molecular mass ranging from 2000 to 5000 Mr according to G5000 PW SEC. Acemannan in dry form was sterilized at the optimal 10 kGy ?-radiation dose, and retained both its physical-chemical properties and adjuvanticity for HBsAg co-delivered by the nasal route in mice. The mixture of acemannan-1% benzyl alcohol (w/v) does not affect the adjuvanticity. The total carbohydrates content, SEC-HPLC, pH, microbial limit and organoleptic characteristics of the irradiated polysaccharide suspended in phosphate buffer remained stable at -20 ºC for at least 6 months of storage. These results may be useful for designing processes for producing pharmaceutical quality acemannan to be used in vaccine clinical studies.

Se obtuvo el acemanano de Aloe barbadensis mediante cuatro procesos: 1) cromatografía de exclusión molecular (SEC) en matriz de sefarosa CL-4B, seguida de precipitación etanólica; 2) SEC, ultrafiltración en cartuchos de fibra hueca (30 kDa o 0.1 µm) y precipitación etanólica; 3) SEC, precipitación con bromuro de cetil trimetil amonio (CTAB) y precipitación etanólica; y 4) precipitación directa con CTAB, seguida de precipitación etanólica. El CTAB fue efectivo para concentrar los eluatos cromatográficos (proceso 3) y permitió el aislamiento directo y la purificación del acemanano a partir de extractos etanólicos crudos (proceso 4), sin recurrir a SEC. En el proceso 4 disminuyeron los tiempos de operación del proceso (a 9 de 15 días del proceso 3), y los costos por materias primas. Ambos procesos generaron acemanano libre de niveles detectables de antraquinonas y ADN contaminante, con niveles de proteína inferiores al 5% del peso seco. El preparado estuvo compuesto fundamentalmente de manosa, 97% en los procesos 1 al 3, y 75% en el proceso 4, con masas moleculares en el rango de 2000-5000 Mr, según SEC en G5000 PW. El acemanano en su formulación seca se esterilizó mediante radiación gamma a la dosis óptima de 10 kGy y retuvo sus propiedades físico-químicas y su capacidad adyuvante, demostrada esta última mediante coadministración con el HBsAg por vía nasal en ratones. La mezcla acemanano-benzil alcohol 1% (p/v) no afectó la capacidad adyuvante. El contenido de carbohidratos totales, las propiedades organolépticas y el perfil SEC-HPLC, el pH y el límite microbiano se mantuvieron estables por al menos 6 meses de almacenamiento a -20 °C. Estos resultados pueden ser útiles para el diseño de procesos de producción de acemanano con calidad farmacéutica para estudios clínicos.

Generation of two polyclonal antibodies for western blot detection of hepatitis A virus in plants

In recombinant systems, the availability of good quality antibodies is required to detect Hepatitis A virus (HAV) proteins. Following this line, the cDNA sequences coding for two hepatitis A virus structural proteins, VP2 and VP3, were cloned into the bacterial expression vector pTrcHis yielding plasmids pTrcVP2 and pTrcVP3. Recombinant Escherichia coli XL1-blue strains harboring these two constructs were grown in liquid media and after IPTG gene induction, both fused recombinants molecules were detected by SDS-PAGE as 34 kDa and 24 kDa bands respectively. Recombinant VP2 and VP3 proteins containing N-terminal hexa-histidine tags were purified under denaturing conditions by immobilized metal affinity chromatography yielding 8 mg and 10 mg of refolded protein per 300 mL of bacterial culture respectively. Immunization of rabbits against purified recombinant proteins allowed the production of high titer polyclonal sera with immunological reactivity detecting hepatitis A virus proteins using western-blot analysis. According to our results, these two polyclonal sera constitute a valuable tool to follow the production of HAV proteins in transgenic plants, where a putative expression of HAV proteins higher than 0.25% of the total soluble protein could be detected with the use of these sera by western blot assay.

Para detectar las proteínas del virus de la hepatitis A en sistemas recombinantes se requiere de anticuerpos de calidad. Siguiendo estos objetivos la secuencia de ADNc que codifica para dos proteínas estructurales del virus de la hepatitis A, VP2 y VP3 se clonaron en el vector de expresión en Escherichia coli pTrc His resultando los plásmidos pTrcHisVP2 y pTrcHisVP3. Las células recombinantes portadoras de ambas construcciones fueron crecidas en medio líquido y después de la inducción con IPTG se detectaron ambas proteínas de 34 kDa y 24 kDa mediante SDS-PAGE. Las proteínas recombinantes VP2 y VP3 que contenían el tallo de histidina fueron purificadas en condiciones desnaturalizantes mediante cromatografía de afinidad a iones metálicos rindiendo 8 y 10 mg por 300 mL de cultivo respectivamente. La inmunización de conejos con las proteínas purificadas permitió la obtención de anticuerpos policlonales que permitieron la detección de las proteínas estructurales del virus de la hepatitis A en ensayos de western blot. De acuerdo a estos resultados los antisueros obtenidos pudieran ser útiles en el seguimiento en la producción de proteínas del virus de la hepatitis A en plantas transgénicas, donde una posible expresión de las proteínas del VHA superiores al 0.25% de las proteínas totales solubles podrían ser detectadas con estos sueros policlonales mediante ensayos de western blot.

A microanalytical variant of the SOS Chromotest for genotoxicological evaluation of natural and synthetic products

Agents that can damage the DNA in vivo have potential adverse effects on human health. They may induce transmissible mutations and cancer. SOS Chromotest is a SOS transcriptional-fusion based assay, ß-galactosidase gene was located after a SOS promoter, thus its enzymatic activity indicates the level of induction of SOS response and the DNA damage produced by chemical and physical mutagens, can be estimated. We presented and evaluated a microanalytical variant of the original SOS Chromotest for detecting genotoxicity of pigmented samples. We introduced two main modifications: we changed the colorimetric substrates for fluorescent ones and we worked at micro-analytical scale. The optimal ß-galactosidase substrate concentration used was 1.8 mM and 40 minutes as time reaction. This variant detected efficiently the genotoxicity of known mutagen and the natural pigmented extracts. The results are discussed in relation to the advantages to work at micronalytical scale, costs reduction, automatization of reading and its usefulness for the screening of a large variety of samples.

Una variante microanalítica del SOS Chromotest para la evaluación genotóxica de productos naturales y sintéticos. Los agentes que pueden dañar al ADN in vivo tienen la potencialidad de tener efectos adversos sobre la salud humana. Los mismos pueden inducir mutaciones transmisibles y cáncer. El ensayo SOS Chromotest es un ensayo basado en una fusión transcripcional de un gen SOS, sfi A y el gen de la ß-galactosidasa, así la actividad enzimática indica el nivel de inducción de la respuesta SOS response y puede estimarse el daño al ADN producido por mutágenos físicos y químicos. Nosotros presentamos y evaluamos en este trabajo una variante microanalítica del ensayo SOS Chromotest original para la detección de la genotoxicidad de muestras pigmentadas. Introdujimos dos modificaciones principales: cambiamos sustratos que desarrollan color por otros que desarrollan fluorescencia y trabajamos a escala micro-analítica. La concentración óptima de sustrato para la ß-galactosidasa utilizada fue de 1.8 mM y el tiempo de reacción fue de 40 minutos. Esta variante detectó eficientemente la genotoxicidad de mutágenos conocidos y de extractos naturales pigmentados. Los resultados son discutidos en relación a las ventajas que ofrece trabajar a escala microanalítica, reducción de costos, automatización de las lecturas y su utilidad para tamizar una larga variedad de muestras.

Biotecnología Habana 2012 congress: Infectious Diseases symposium and satellite symposia on HIV and Dengue

The congress Biotecnología Habana 2012 was held at the Convention Center in Havana, Cuba, March 5-8. Organized by the Center for Genetic Engineering and Biotechnology (CIGB), this edition was dedicated to medical applications of biotechnology, with pre-Congress specialized satellite symposia and full conference sessions. Here we present information regarding the symposium on Infectious diseases (covering pertussis, adjuvants, hepatitis B and C treatment and vaccines) and also that related to two of the three pre-congress satellite symposia on dengue and the human immunodeficiency virus.

El congreso Biotecnología Habana 2012 se celebró del 5 al 8 de marzo en La Habana, Cuba. Auspiciado por el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB), esta edición se dedicó a las aplicaciones médicas de la biotecnología, con simposios satélites precongreso y conferencias plenarias. Este reporte expone información del simposio sobre enfermedades infecciosas (que incluyó temáticas relativas a pertusis, adyuvantes, vacunas y tratamiento de las hepatitis virales B y C), y dos de los simposios satélites precongreso referidos a dengue y virus de la inmunodeficiencia humana.

CIGB-247 vaccine breaks immunological tolerance to the vascular endothelial growth factor in mice, rats, rabbits and non-human primates, without disturbing physiologic angiogenic processes

CIGB-247 is a novel cancer therapeutic vaccine that uses a mutated form of human vascular endothelial growth factor (VEGF) as antigen in combination with the oil-free adjuvant VSSP (very small sized proteoliposomes of Neisseria meningitidis outer membrane). The vaccine was designed to affect tumor neo-vascularization and tumor cell viability by eliciting antibodies that block the interaction of VEGF and its receptors in activated endothelial cells, as well as specific cytotoxic T cells that can directly destroy tumor and tumor stroma cells producing VEGF. Our previous experimental studies with CIGB-247 in mice, in which VEGF shares an 87% homology to the human molecule, have shown that the vaccine has anti-tumoral and anti-metastatic activity, and produces anti-VEGF antibodies and a specific T cell cytotoxic response against tumor cells. Herein we extend the immunogenicity and safety studies of CIGB-247 in mice, rats, rabbits and non-human primates. All the species develop antigen-specific IgG antibodies able to block the interaction of VEGF and VEGF receptor 2 in an ELISA assay. Purified IgG from CIGB-247 immunized monkey sera effectively impair human microvascular endothelial cells' proliferation and capillary-like structures formation in MatrigelTM. In monkeys and mice, DTH and direct cell cytotoxicity experiments suggest that specific T cell responses are elicited after vaccination. Immunization with CIGB-247 does not affect animal behavior, hematology counts, blood biochemistry or histology of critical organs. Skin deep wound healing was not affected in vaccinated rats and monkeys. Altogether, these results support further clinical development of CIGB-247 therapeutic cancer vaccine, and shed light on the potential mechanisms underlying its effects.

El CIGB-247 es una nueva vacuna terapéutica contra el cáncer, que emplea la forma mutada del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) como antígeno, en combinación con el adyuvante VSSP derivado de la membrana externa de Neisseria meningitidis. Los estudios con el CIGB-247 en ratones demostraron que la vacuna tiene una actividad antitumoral y antimetastásica, que se relaciona con una respuesta de anticuerpos anti-VEGF y de células T citotóxicas específicas. Este reporte refiere nuevas evidencias de inmunogenicidad y seguridad del CIGB-247 en ratones, ratas, conejos y primates no humanos. En estas especies, la vacuna indujo anticuerpos específicos que bloquean la interacción del VEGF con su receptor en un ensayo de tipo ELISA. Las inmunoglobulinas del tipo G (IgG) purificadas de suero de monos inmunizados afectaron la proliferación de células endoteliales microvasculares humanas y la formación de estructuras capilares en MatrigelTM. Los experimentos de hipersensibilidad retardada y de citotoxicidad directa en ratones y monos sugieren que la vacunación induce una respuesta citotóxica específica. La inmunización con el CIGB-247 resultó segura: no afectó la conducta de los animales, los conteos hematológicos, la bioquímica sanguínea ni la histología de los órganos vitales. La cicatrización de heridas profundas no se afectó en las ratas ni en los monos inmunizados. Tales resultados sustentan el futuro desarrollo clínico de esta vacuna y aportan elementos sobre los mecanismos potenciales que median su efecto antitumoral.

Production of highly polymerized bacterial levan in two eukaryotic hosts of biotechnological interest

Bacterial levan (ß(2,6)-linked polyfructan) has potential applications in the food, bio-energetic, medical, pharmaceutical, and other industries. The lack of technically and economically feasible large-scale production systems limits the commercial exploitation of levan. Gluconacetobacter diazotrophicus secretes a levansucrase (LsdA, EC 2.4.1.10) that synthesizes high levels of levan and fructooligosaccharides from sucrose. This bacterium is not attractive for the cost-effective production of LsdA. In this research, we used Pichia pastoris and Nicotiana tabacum as hosts for LsdA production and direct levan synthesis, respectively. The recombinant yeast constitutively expressing the lsdA gene acquired saccharolytic capacity and secreted LsdA to a yield 9-fold higher than the value reported for the natural host. The occurrence of N-glycosylation in the yeast-produced LsdA did not affect the catalytic efficiency, substrate specificity, or product profile compared to the native non-glycosylated enzyme. This finding prompted us to express the lsdA gene in vacuoles, the most physiologically appropriate compartment to direct levan formation within the plant cell. Constitutive expression of LsdA fused to the vacuolar targeting signal of an onion fructosyltransferase allowed the accumulation of highly polymerized levan (above 104 fructose residues) in mature tobacco leaves where the polymer represented between 10 and 70% (w/w) of total dry weight. The latter value is the highest reported in the literature for a levan-producing transgenic plant grown in soil. No drastic physiological changes were observed in tobacco plants with levan yields up to 30% (w/w) in leaves. The polymer production remained stable in the plant progenies pointing for potential application in biotechnology.

Levana bacteriana es un homopolímero ß (2,6) soluble de unidades de fructosa, con aplicación en las industrias alimentaria, médico-farmacéutica, bioenergética y otras. La carencia de un sistema productivo factible, técnica y económicamente, impide la explotación comercial de levana a gran escala. La bacteria Gluconacetobacter diazotrophicus secreta una levanasacarasa (LsdA, EC 2.4.1.10) que sintetiza altos niveles de levana y fructooligosacaridos a partir de la sacarosa. Por ser el hospedero nativo poco atractivo para la producción masiva de LsdA, se investigaron la levadura Pichia pastoris y la planta Nicotiana tabacum como nuevas fuentes. La levadura P. pastoris recombinante expresó constitutivamente LsdA y adquirió actividad sacarolítica, e incrementó el rendimiento de LsdA en 8 a 9 veces con respecto a G. diazotrophicus. La N-glicosilación de LsdA en un hospedero eucarionte no afectó la eficiencia catalítica ni el rendimiento de fructanos en comparación con la enzima nativa. Ello permite la obtención de LsdA glicosilada activa en las vacuolas de las plantas, compartimento celular más apropiado para esos fines. La expresión constitutiva de LsdA fusionada con la señal de localización vacuolar de la fructosiltransferasa de cebolla permitió la acumulación de levana altamente polimerizada (más de 104 residuos de fructosa) en hojas de tabaco, entre 10 y 70% del peso seco total. Este último es el máximo valor descrito para una planta transgénica crecida en suelo, productora de levana. La ausencia de alteraciones fisiológicas drásticas en clones que acumularon hasta 30% de levana, y la producción estable del polisacárido en sus progenies, remarcan su potencial agronómico.

Genetic characterization of Cuban Creole cattle using molecular tools

The bovine Cuban Creole is product of the prolonged almost empirically directed process of natural selection, of the descendants of the cattle Bos taurus brought by the Spaniards conquerors and of animal coming from Africa, with genes Bos indicus. The present study sustains the Cuban Creole bovine characterization through typing tools of six milky proteins, random amplified polymorphic DNA markers, 30 microsatellite loci, the D-loop region of the mtDNA and six Y chromosome microsatellites. It was confirmed the presence of Bos indicus genes in the Cuban Creole, supposedly pure Bos taurus, with genetic potential to be used in programs to improve the quality of milk; there is a high genetic variability in the breed with proper alleles of the race and an intermediate profile between both uniparental ascendances by the mtDNA haplotypic composition; the molecular variation of the Y chromosome demonstrates a recent process of introgression of the mediated Zebu males, which agrees with its historical origin. The molecular characterization of genetic material of interest for the bovine Cuban Cattle was obtained for the very first time, with almost the totality of the markers available for this aims, which is an important contribution to the knowledge of the genetic characteristics of the Creole cattle in Cuba. It also contributes with valuable information on its genetic variability as a starting point for the design and development of programs to improve and increase the productive indicators and establish the bases for the development of this Cuban native race conservation programs, in situ or ex situ.

El ganado bovino Criollo Cubano es producto del prolongado proceso de selección natural casi empíricamente dirigido, de los descendientes del ganado Bos taurus traído por los españoles a Cuba y del ganado procedente de África, con genes Bos indicus. Esta propuesta sustenta la caracterización del ganado bovino Criollo Cubano mediante herramientas de tipificación de seis proteínas lácteas, marcadores de polimorfismos de ADN amplificados aleatoriamente, 30 loci de microsatélites, la región D-loop del ADNmt y seis microsatélites del cromosoma Y. Se confirmó la presencia de genes de Bos indicus en el Criollo Cubano, supuestamente Bos taurus puro, con potencial genético para ser utilizado en programas de mejora de la calidad de la leche. Existe elevada variabilidad genética en el rebaño, con alelos propios de la raza y un patrón intermedio entre ambos extremos uniparentales por la composición haplotípica del ADNmt. La variación molecular del cromosoma Y evidencia un proceso reciente de introgresión del ganado Cebú, mediada por los machos, lo que concuerda con su origen histórico. Por primera vez se logra la caracterización molecular de un genofondo de interés para la ganadería cubana, con casi todos los marcadores disponibles para estos fines. Esta es una valiosa contribución al conocimiento de la variabilidad genética del ganado Criollo de Cuba, como punto de partida y base para el diseño y desarrollo de programas de mejora productiva y conservación de esta raza autóctona cubana, ya sea in situ o ex situ.