Biotecnología Aplicada

Theranostics and Molecular Imaging: New concepts and technologies for drug development

Some of the bases, challenges and expected outputs of the Molecular Magnetic Resonance Imaging and the Theranostics in the near future are presented in this paper. The Molecular Imaging, which evolution in the last years is truly surprising, is becoming a real tool for decreasing the cost and accelerating the stages of drug discovery and development processes. The new Theranostic platforms and the integration of imaging technologies have opened novel and revolutionary opportunities in medicine and biotechnology-based pharmaceutical industries. The strategy of joining therapeutic and imaging agents into one nano platform has the potential to diagnose disease and to treat and monitor the therapeutic response in vivo at molecular level. It simultaneously enhances the control, evaluation and optimization of drug delivery, release and its efficacy. These theranostic formulations are also increasing the Molecular Magnetic Resonance sensibility to some picomoles. Remarkably, it is widely considered that the conjugation of paramagnetic complexes with versatile macromolecules and natural nanostructures is the most important and fastest way to obtain original theranostic formulations. The optimum use and wider applicability of Molecular Imaging relies on the best possible design of the pre-clinical and clinical trials taking into account the imaging technologies from the very same beginning. The complex problem of personalized medicine, combined therapy, and the synchronization of the therapy of choice with diagnosis may find an outstanding solution in the Theranostics approach.

En este artículo se discuten algunas de las bases, los retos y el uso de las imágenes moleculares y la teranóstica en un futuro cercano. Las imágenes moleculares, cuya evolución en los últimos años ha sido sorprendente, se han convertido en verdaderas herramientas para disminuir los costos y acelerar todas las etapas de los procesos de descubrimiento y desarrollo de nuevos fármacos. La integración de las actuales plataformas de la teranóstica con las tecnologías de imágenes ha abierto oportunidades novedosas y revolucionarias en la medicina y las industrias biotecnológicas y farmacéuticas. La estrategia de unir agentes diagnósticos y terapéuticos en una nanoplataforma ofrece la posibilidad de diagnosticar, tratar y monitorear la respuesta terapéutica in vivo a nivel molecular. Esto permite mejorar simultáneamente la evaluación, la optimización, el control y la eficacia de la distribución y liberación de los medicamentos. Estas formulaciones teranósticas también han incrementado la sensibilidad de las imágenes moleculares de resonancia magnética hasta algunos picomoles. Como conclusión se afirma que la conjugación de complejos paramagnéticos con macromoléculas y nanoestructuras naturales flexibles es la vía más importante y rápida para obtener nuevas formulaciones teranósticas. Para optimizar los ensayos preclínicos y clínicos es necesario que desde el inicio se diseñen teniendo en cuenta las posibilidades de las tecnologías de imágenes. Los problemas complejos asociados con la medicina personalizada, la terapia combinada y la sincronización entre las acciones diagnósticas y terapéuticas encuentran una excelente solución en el campo de la teranóstica.

Identification of genes with altered expression levels in contrasting rice cultivars exposed to salt stress treatments

Soil salinization causes negative effects on plant productivity and poses an increasingly serious threat to the sustainability of agriculture. Improving salt and drought tolerance is one of the most difficult tasks for cereal breeders. A breeding program using somaclonal variation through biotechnological techniques has been used in rice to improve drought and salinity tolerance for increasing agricultural productivity in affected regions. The gene expression of the genes coding for cyclin-dependent kinase C, calcium-dependent protein kinase 7, protein phosphatase, the 7TM-Mlo protein, as well as the expressing sequence tags (EST) EX452034 and EX451286 was determined in rice salt-tolerant somaclone under salt stress conditions. These results show the role of those genes in the salt tolerance performance in rice.

La salinización del suelo provoca efectos negativos en la productividad de las plantas y constituye una amenaza cada vez más grave para la sostenibilidad de la agricultura. Una de las tareas más difíciles para los mejoradores de cereales es aumentar la tolerancia a la salinidad y a la sequía. Durante el programa de mejoramiento del arroz para obtener variedades tolerantes a la salinidad y a la sequía y aumentar su productividad agrícola en las regiones afectadas, se han usado técnicas biotecnológicas empleando la variación somaclonal. Bajo condiciones de salinidad se determinó la expresión de los genes que codifican para la quinasa C dependiente de ciclina, proteína quinasa-7 dependiente de calcio, proteína fosfatasa, la proteína 7TM-Mlo y las secuencias expresadas EX452034 y EX451286 en un somaclón de arroz. Los resultados revelaron la participación de estos genes del arroz en la tolerancia a la salinidad.

Formulation development of a recombinant Streptokinase suppository for hemorrhoids treatment

Recombinant Streptokinase (rSK) is a protein of bacterial origin currently used in the treatment of acute myocardial infarction. Its thrombolytic and anti-inflammatory action makes it attractive for the treatment of hemorrhoids. In this work the influence of absorption enhancer, preservative and emulsifiers on rSK stability was accessed by determining its biological activity under stress conditions. According to the results obtained, were selected as excipients for the formulation: Sodium salicylate as enhancer and anti-inflammatory agent, thimerosal as preservative, Span 60 as emulsifier and Witepsol W25 as suppository base and 100 000 IU per gram of suppository for stability study. Afterwards, three lots at pilot scale were manufactured, packed in aluminum blister shell and stored at 5 ± 3 ºC. Immediately after preparation, the samples were evaluated at months 0, 3, 6, 9, 12 and 18 having into account the physical, chemical and biological properties. The stability study demonstrated that the formulation containing rSK as active pharmaceutical ingredient was stable during 18 months under refrigerated conditions.

La estreptoquinasa recombinante (SKr) es una proteína de origen bacteriano que se utiliza para el tratamiento del infarto agudo de miocardio. Su acción trombolítica y antinflamatoria la hace atractiva para el tratamiento de las hemorroides. Se evaluó la influencia de promotores de la absorción, preservantes y tensoactivos sobre la estabilidad de la SKr, mediante la determinación de su actividad biológica bajo condiciones de estrés. De acuerdo con los resultados, se seleccionaron el salicilato de sodio como promotor de la absorción y agente antinflamatorio, el tiomersal como preservante, el Span 60 como tensoactivo y el Witepsol W25 como base del supositorio, y 100 000 UI de SKr por gramo de supositorio para el estudio de la estabilidad. Posteriormente se prepararon tres lotes a escala piloto y se almacenaron en blíster de aluminio a 5 ± 3 °C. Inmediatamente después de la preparación, se evaluaron las muestras a los 0; 3; 6; 9; 12 y 18 meses, teniendo en cuenta las propiedades físicas, químicas y biológicas. El estudio de estabilidad demostró que la formulación en forma de supositorio es estable durante 18 meses bajo condiciones de refrigeración.

Expression and purification of a full-length recombinant NS1 protein from a dengue 2 serotype viral isolate

Dengue is an emerging disease that poses a threat to one-third of the global human population and produces over 50 million reported cases in tropical and sub-tropical regions every year. An accurate diagnosis of dengue infection is essential for timely management of the disease. NS1 is a 46- to 50-kilodalton highly conserved dengue virus glycoprotein that can be detected during the febrile phase of dengue virus (DENV) infection in both primary and secondary cases. This protein is a specific marker of DENV infection, and a sensitive test for NS1 would, if used together with IgM detection, provide an excellent diagnostic approach. Although the NS1 protein can be isolated from mammalian cell tissue cultures infected with DENV, this procedure is unsafe, laborious, and expensive and has very low yields, making it unsuitable for a large amount of antigen production. In this work, and with the objective of carrying out immunization experiments in mice, we cloned the full-length NS1 region from DENV serotype 2 (rNS1) in the vector pET28a with a 6xHis tag at the N-terminus. The protein was expressed in the Escherichia coli strain Rosetta as inclusion bodies, at the expected size of approximately 46 kDa, and further purified by metal-chelating affinity chromatography (IMAC) under denaturing conditions. Human sera from dengue positive cases showed reactivity to the recombinant NS1 protein by ELISA and Western blot. The unfolded rNS1 was directly used as immunogen. The polyclonal antibodies elicited in immunized mice with the recombinant antigen recognized the natural NS1 antigen from serotype 1 (sNS1).

El diagnóstico certero de la infección por el virus dengue (DENV) es esencial para su tratamiento oportuno. La proteína NS1 (46-50 kDa) es una glicoproteína del DENV de secuencia altamente conservada en los cuatro serotipos del virus, que se puede detectar durante la fase febril del dengue en pacientes infectados por primera o segunda vez, como marcador específico de la infección. Por ello, un test basado en la proteína NS1, pudiera facilitar su diagnóstico cuando se emplea junto con la detección de la inmunoglobulina M (IgM) contra el DENV. Entre las principales dificultades para su obtención está el aislamiento de la proteína NS1 de cultivos celulares de mamíferos, lo cual no es seguro, es laborioso y caro, y con bajos rendimientos que impiden su escalado. En este trabajo se clonó la secuencia completa de la proteína NS1 (rNS1) del DENV serotipo 2 en el vector pET28a, fusionado con una cola de histidina 6xHis en el extremo N-terminal. Esta proteína se obtuvo de forma recombinante en Escherichia coli, cepa Rosetta, como cuerpos de inclusión, con aproximadamente 46 kDa, y se purificó por cromatografía de afinidad de quelatos metálicos (IMAC) en condiciones desnaturalizantes. Sueros humanos de pacientes positivos al dengue mostraron reactividad contra la rNS1 en ensayos de ELISA y Western blot. La proteína rNS1 desnaturalizada se administró directamente como inmunógeno en ratones Balb/C, cuya respuesta de anticuerpos policlonales detectó a la proteína NS1 natural del DENV serotipo 1 en ensayos de inmunoblot.

Molecular and biochemical characterization of tomato (Solanum lycopersicum L.) plants cv. Micro-Tom under lead (Pb)-induced stress

Two different Pb concentrations (5 and 10 mg/kg of PbAc2) were used to study the response of Solanum lycopersicum L. cv. Micro-Tom (MT) plants in two vegetative growth phases. Two genes that have been previously reported to be heavy metal inducible genes (superoxide dismutase, SOD, EC 1.15.1.1; and isoflavone reductase, IFR; EC 1.6.4.2) and another one putatively interesting in this field (transcriptionally controlled tumor protein, TCTP) were selected for an expression study using a real time PCR technique. In the first growth phase (germination to flowering) TCTP was repressed at 10 mg/kg and in the control, SOD expression was low at both concentrations (5 and 10 mg/kg of PbAc2) and IFR was higher at 10 mg/kg PbAc2. In the second phase (flowering to fructification) three genes were expressed in both concentrations but in the case of TCTP and SOD the expression was higher at 5 mg/kg of PbAc2. SOD and Glutathione reductase (GR; EC 1.6.4.2) were selected for a biochemical study together with the determination of protein concentration using spectrophotometer. SOD was higher at 10 mg/kg PbAc2 showing significant difference with control, and GR had the same behavior but had significant differences with the other two treatments while total proteins were higher for the control showing significant differences at 10 mg/kg of PbAc2. This research suggests that Pb toxicity leads to the induction of key enzymes of antioxidant defense system in tomato plants.

Se estudió la respuesta de plantas de tomate Solanum lycopersicum L. cv. Micro-Tom (MT) sometidas a estrés inducido por plomo (5 y 10 mg/kg de PbAc2) y en las fases de desarrollo vegetativo germinación-floración y floración-fructificación. Se determinaron los niveles de expresión en estas condiciones de los genes inducidos por metales pesados superóxido dismutasa (SOD; EC 1.15.1.1) e isoflavona reductasa (IFR; EC 1.6.4.2), y otro de potencial interés en este campo (proteína tumoral controlada durante la transcripción-TCTP). En la primera fase, la TCTP fue reprimida en el grupo control y a la máxima concentración empleada de PbAc2, la expresión de la SOD fue baja en las dos concentraciones y la IFR fue mayor a 10 mg/kg. En la segunda fase, los tres genes se expresaron en las dos concentraciones, la TCTP y la SOD a mayores niveles en 5 mg/kg de PbAc2. Se determinó por densidad óptica la actividad específica de SOD y de la glutatión reductasa (GR; EC 1.6.4.2), junto con la concentración de proteínas totales. Ambas enzimas antioxidantes mostraron mayor actividad específica a 10 mg/kg de PbAc2, con diferencias estadísticamente significativas con respecto al tratamiento control, y la GR también mostró diferencias estadísticamente significativas con respecto al tratamiento con 5 mg/kg. La concentración de proteínas totales fue mayor en el grupo control, y estadísticamente significativa con respecto a la del tratamiento con 10 mg/kg. Esta investigación sugiere que la toxicidad por plomo provoca la inducción de enzimas antioxidantes claves del sistema de defensa en las plantas de tomate.

Procedure for the conjugation of the Streptococcus pneumoniae serotype 6B capsular polysaccharide to the tetanus toxoid

Streptococcus pneumoniae causes annually 826 000 deaths in children under five years. The serotype 6B, one of higher incidence, is targeted by the Cuban research and development project to develop a conjugate vaccine. There is limited data on how modifications caused by conjugation affect the physicochemical and antigenic characteristics of polysaccharides, particularly for serotype 6B capsular polysaccharide (PS6B), despite being the least immunogenic among S. pneumoniae polysaccharides. In this work, a conjugation procedure was established for PS6B comprising: fragmentation by acid hydrolysis, activation by periodate oxidation, and conjugation to tetanus toxoid (TT) by reductive amination to increase its immunogenicity. Reaction conditions were set to obtain the polysaccharide in three molecular size ranges (1-10, 10-30, 30-100 kDa) and levels of oxidation. PS6B fragmentation below 10 kDa and oxidation above 24 % of the repetitive units implied the loss of antigenicity. Polysaccharide length but not oxidation level had an impact on the physicochemical characteristics of the conjugates in the tested conditions. Unlike the native polysaccharide, conjugated 10-30 kDa and 30-100 kDa PS6B were immunogenic in rabbits, with evidence of thymus-dependent response. The procedure described supports obtaining PS6B-TT conjugates reproducibly in the 30-100 kDa and 10-30 kDa molecular size ranges and with 8-18 % oxidized repeat units, which are immunogenic.

Anualmente Streptococcus pneumoniae provoca 826 mil muertes de niños menores de cinco años. El estudio del serotipo 6B, uno de los de mayor incidencia, es uno de los objetivos del proyecto de investigación-desarrollo para obtener una vacuna conjugada en Cuba. La estrategia de conjugación del polisacárido capsular del serotipo 6B (PS6B) fue fragmentarlo mediante hidrólisis ácida, activarlo mediante oxidación con peryodato y conjugarlo a toxoide tetánico (TT) mediante aminación-reductiva. Existe poca información sobre cómo estas modificaciones afectan las características físico-químicas y antigénicas del polisacárido, en particular para PS6B, a pesar de ser el menos inmunogénico de los polisacáridos de S. pneumoniae. En tal sentido, se estableció un procedimiento para obtener conjugados inmunogénicos de PS6B a TT. Se crearon condiciones de reacción para obtener el polisacárido en tres rangos de tallas y niveles de oxidación. Se determinó que la fragmentación del polisacárido por debajo de 10 kDa y la oxidación de más del 24 % de las unidades repetitivas implican pérdida de antigenicidad. La talla del polisacárido tuvo impacto en las características físico-químicas de los conjugados en las condiciones evaluadas; no así el nivel de oxidación. A diferencia del polisacárido nativo, conjugados de PS6B de 10 a 30 kDa y 30 a 100 kDa fueron inmunogénicos en conejos, con evidencias de respuesta timo-dependiente. Los procedimientos que incluyen la obtención del PS6B de 10 a 30 kDa y 30 a 100 kDa con niveles de oxidación entre 8 y 18 % de las unidades repetitivas oxidadas, permitieron obtener conjugados a TT reproducibles e inmunogénicos.

Report of the Conference on Immunological Mechanisms of Vaccination; December 13-18, 2012, Ottawa, Canada

The conference Immunological Mechanisms of Vaccination of the Keystone Symposia was held on December 13-18, 2012, in Ottawa, Canada. There were more than 400 participants from all over the world in the field of immunology and vaccine research. During five days, attendees had the possibility to present and discuss their current work and also to encourage new collaborations. Fifty-five oral presentations were grouped in seven sessions according to the following topics: Innate sensing of pathogens and vaccines, Augmenting immune response to vaccines, T and B cell memory to vaccines, Understanding signatures of vaccine protective efficacy, Translating immunity to vaccines and Vaccines against global threats. Additionally, more than 240 posters were presented and two workshops on Novel adjuvants and Vaccine delivery were organized. The quality of the papers presented at this conference shows that there is a global concern in eradicating chronic and re-emerging infectious diseases. Currently, a special attention is focused to the search for new and potent adjuvants and delivery systems that allows the generation of the immune response at the systemic and mucosal compartments to increase vaccine efficacy .

El Congreso Mecanismos Inmunológicos de la Vacunación reunió más de 400 expertos en el campo de la inmunología y la vacunología. Durante cinco días, tales especialistas tuvieron la oportunidad de presentar y discutir sus resultados de investigación y promover nuevas colaboraciones. En siete sesiones, se agruparon 55 presentaciones orales, cuyos temas fueron: reconocimiento de agentes patógenos y vacunas por el sistema inmune innato; aumento de la respuesta inmune a las vacunas; memoria de células T y B frente a las vacunas; comprensión de los mecanismos de la eficacia protectora de las vacunas; del conocimiento de la inmunidad a las vacunas; y vacunas contra las amenazas mundiales. Además se presentaron más de 240 carteles y se organizaron dos talleres acerca de adyuvantes novedosos y sistemas de administración de vacunas. La calidad de los trabajos presentados en este evento demostró que existe una preocupación mundial por la erradicación de las enfermedades infecciosas crónicas y reemergentes. Actualmente, se dedica una especial atención a la búsqueda de nuevos adyuvantes y sistemas de administración, que permitan generar respuesta inmunitaria en los compartimentos sistémicos y mucosales, para aumentar así la eficacia de la vacunación.

Molecular mechanisms involved in the inhibition of tumor cells proliferation exposed to elevated concentrations of the epidermal growth factor

The EGF promotes inhibition of cell proliferation in vitro and in vivo models depending on its concentration, application schema and the type of tumor cells on which it acts. Our research hypothesis was based on the fact that the EGF varies the expression of genes involved in a negative regulation of tumor cell lines proliferation carrying high levels of its receptor (EGFR). Our objectives were, to obtain information about the effect of EGF on tumor cell proliferation in vitro and in vivo models and, know the gene expression patterns of a group of genes involved in cancer signaling pathways and EGFR. The results showed that EGF at nanomolar concentrations inhibits the tumor cells proliferation bearing high levels of EGFR and, promotes the survival of treated animals, establishing a direct relationship between the inhibition of cell proliferation, high concentrations of EGF and, high amount of EGFR in the cells. The differential gene expression profile showed a variation in a group of genes which exert a powerful control over the cell cycle progression, gene transcription and apoptosis. It was concluded that the inhibition of tumor cell proliferation by the action of EGF is due to activation of molecular mechanisms controlling cell cycle progression. This work won the Annual Award of the Cuban Academy of Sciences in 2012.

El factor de crecimiento epidérmico (FCE) promueve la inhibición de la proliferación celular en modelos in vitro e in vivo en dependencia de su concentración, el esquema de aplicación y el tipo de células tumorales sobre las que actúa. Nuestra hipótesis de investigación se basó en que el FCE varía la expresión de los genes involucrados en la regulación negativa de la proliferación de líneas celulares de origen tumoral que portan altas concentraciones de su receptor (RFCE). Los objetivos fueron obtener información acerca del efecto del FCE en la proliferación de células tumorales en modelos in vitro e in vivo, y conocer los patrones de expresión génica de un grupo de genes involucrados en las vías de señalización del cáncer y el FCE. Los resultados mostraron que el FCE a concentraciones nanomolares inhibe la proliferación de células de origen tumoral que poseen elevados niveles de RFCE, favorece la sobrevida de los animales tratados, y reduce el índice mitótico de las células del tumor, por lo que se establece una relación entre la inhibición de la proliferación celular, las altas concentraciones de FCE y la elevada cantidad de RFCE en las células. La expresión diferencial de genes reveló la variación en la expresión de genes que ejercen un control potente sobre la progresión del ciclo celular, la transcripción génica y la apoptosis. Se concluyó que la inhibición de la proliferación de las células tumorales por la acción del FCE se debe a la activación de mecanismos moleculares de control de la progresión del ciclo celular. Este trabajo recibió el Premio Anual de la Academia de Ciencias de Cuba en 2012.

Phylogenetic and molecular characterization of coronavirus affecting species of bovine and birds in Cuba

Avian infectious bronchitis virus (IBV) and bovine coronavirus (BCoV) are pathogens of veterinary importance that affect birds and bovine in Cuba; however, molecular characteristics and genetic diversity of these viruses are unknown. This study was aimed at determining the molecular characteristics and genetic diversity of both agents, based in the spike S gene. A molecular analysis was carried out from field strains of BCoV collected between 2009 and 2011 and phylogenetic studies were conducted using partial or complete S gene sequences as phylogenetic markers. Besides, studies of phylogenetic inference were carried out in S1 region of recent isolates of IBV. All Cuban bovine coronavirus sequences were located in a single cluster supported by 100 % bootstrap and 1.00 posterior probability values. The Cuban BCoV sequences were also clustered with the USA BCoV strains corresponding to the GenBank accession numbers EF424621 and EF424623, suggesting a common origin for these viruses. This phylogenetic cluster was also the only group of sequences in which no recombination events were detected. Of the 45 amino acid changes found in the Cuban strains, four were unique. On the other hand, two putative genotypes genetically different to the Massachusetts genotype H120 strain used in the Cuban vaccination program were found in the flocks assessed. In addition, a potential nephropathogenic IBV isolate was found by first time in Cuba. This research won the 2012 Award of the Cuban National Academy of Sciences.

El virus de la bronquitis infecciosa aviar (IBV) y el coronavirus bovino (BCoV) son agentes patógenos de importancia veterinaria porque afectan a las aves y al ganado bovino en Cuba. Como se desconocen sus características moleculares y diversidad genética, el objetivo de esta investigación fue determinarlas en ambos agentes, a partir del gen de la espícula S. Se analizaron cepas de campo de BCoV, recolectadas entre los años 2009 y 2011, y se compararon filogenéticamente según varios marcadores del gen S. Además se hicieron estudios de inferencia filogenética en una región de S1 de aislados recientes del IBV. Todas las cepas de BCoV cubanas se localizaron en un mismo grupo filogenético con un soporte estadístico del 100 % y valor de probabilidad posterior 1.00. Las secuencias de coronavirus bovino cubanas se agruparon con cepas de BCoV de EE.UU. con números de acceso en el GenBank de EF424621 y EF424623, que sugiere un origen común para estos virus. Este grupo filogenético fue el único en cuyas secuencias no se detectaron eventos de recombinación. De los 45 cambios de aminoácidos en las cepas cubanas, cuatro fueron únicos. En las granjas evaluadas se detectaron dos posibles genotipos genéticamente diferentes al genotipo Massachusetts de la cepa H120 usada en el programa de vacunación cubano. Además, se halló un potencial aislado de IBV nefropatogénico encontrado por primera vez en Cuba. Este trabajo mereció el Premio Anual de la Academia de Ciencias de Cuba del año 2012.

Molecular characterization of the Cuban Siboney cattle

The new genotype of the Cuban Siboney cattle (5/8H×3/8C) was obtained as part of the genetic improvement strategy to obtain cattle with best fitted behavior under the Cuban climatic conditions and adapted to the tropics. Until 2002, its genetic background had been evaluated based on genetic parameters (progeny and behavior tests, production, and butyric fat yields). The results of the molecular characterization of the Cuban Siboney cattle are presented, from breeds located at the Cuban western regions. The genotypes of cattle six major milk proteins were determined and associative studies to production characters were initiated. RAPD and microsatellite markers were also typified for biodiversity studies. Gene frequencies were obtained for the bovine growth hormone, prolactin and their receptors, and also stearyl-coenzyme A desaturase (SCD) and the diacylglycerol acyltransferase 1 (DAGT1), these two last genes involved in lipids metabolism as candidates for marker-assisted selection. It was demonstrated that the Cuban Siboney cattle has the genetic potential to persist as prominent breed for milk production purposes in the nationwide program of genetic improvement, with high genetic variability and its own molecular characteristics. These results can be used as tools to increase the selection efficiency and to provide greater knowledge on the studied breed.

La transformación de la ganadería cubana a partir de una población eminentemente cebuana y de pequeños núcleos lecheros aislados, hacia una ganadería cuyos niveles productivos puedan satisfacer las necesidades crecientes de consumo de leche por los humanos, fue uno de los principales objetivos económicos y sociales en Cuba desde inicios de los años 60. En la estrategia de mejoramiento genético se diseñó el nuevo genotipo Siboney de Cuba (5/8H×3/8C), que expresaba un mejor comportamiento y adaptación a las condiciones medioambientales tropicales. Hasta 2002, este genofondo se había evaluado me-diante los parámetros genéticos: pruebas de progenie y comportamiento, producción y rendimiento en grasa butírica. Se exponen los resultados de la caracterización molecular del ganado Siboney de Cuba, en rebaños del occidente cubano. Se identificaron los genotipos de las seis principales proteínas lácteas y se iniciaron estudios de asociaciones con caracteres productivos; se tipificaron marcadores RAPD y microsatélites para estudios de biodiversidad. Se obtuvieron las frecuencias génicas para la hormona del crecimiento, la prolactina y sus receptores, y los genes estearil-coenzima A desaturasa y diacilglicerol aciltransferasa 1, involucrados en el metabolismo lipídico, como genes candidatos para la selección asistida por marcadores. Se demostró que la raza tiene potencial genético para mantenerse como eminentemente lechera en el Programa Nacional de Mejora Genética, con elevada variabilidad genética y características moleculares propias. Estos resultados sirven como herramienta para incrementar la eficiencia de la selección y brindan un mayor conocimiento sobre la raza. Este trabajo mereció el Premio Anual de la Academia de Ciencias de Cuba, 2012.