Revista Cubana de Plantas Medicinales

**Efecto protector de los polifenoles de Rhizophora mangle L. sobre el daño oxidativo a proteínas y ADN**

Introducción: al extracto acuoso de la corteza de Rhizophora mangle L. se le ha demostrado un amplio espectro de usos medicinales: en el tratamiento de la mastitis bovina, la curación de heridas,las infecciones uterinas y las úlceras gastroduodenales; debido a sus propiedades antiséptica, cicatrizante, antiinflamatoria y antioxidante. Sin embargo, no se han completado los estudios de la actividad antioxidante a todos los niveles de complejidad para dilucidar los mecanismos de acción involucrados en este efecto farmacológico. Objetivo: determinar si el extracto acuoso de R. mangle y su fracción polifenólica protegen a las principales biomoléculas del daño oxidativo. Metodos: la evaluación de la actividad antioxidante del extracto de R. mangle y su fracción polifenólica sobre las principales biomoléculas se determinó mediante ensayo de daño oxidativo a la albúmina de suero bovino expuesta a los radicales hidroxilo generados en el sistema Fenton y ensayo de degradación oxidativa del ADN inducido por el sistema bleomicina-Fe3+. Resultados: el extracto de R. mangle y su fracción polifenólica, a la máxima concentración ensayada, disminuyeron la oxidación de los grupos sulfidrilos en 87,3 y 89,1 %; e inhibieron la degradación del ADN en 98,4 y 91,9 %, respectivamente. El análisis de regresión mostró que ambos efectos fueron dependientes de la concentración de taninos en el extracto y su fracción. La comparación de las líneas de regresión reveló que el extracto y su fracción resultaron igualmente eficaces en proteger a la albúmina de suero bovino de la oxidación por los radicales hidroxilos, sin embargo, el extracto fue más eficaz en proteger al ADN de la degradación oxidativa que su fracción. Conclusiones: el extracto acuoso de R. mangle mostró un efecto protector a las principales biomoléculas del daño oxidativo, evidenciado por la inhibición de la pérdida de grupos sulfidrilos en la albúmina de suero bovino y la disminución de la degradación del ADN. A su vez se demostró que los compuestos polifenólicos presentes en el extracto fueron los principales responsables de los efectos antioxidantes observados en este estudio.

Introduction: the aqueous extract from Rhizophora mangle (L.) bark has demonstrated a broad spectrum of medicinal uses; for example, in treating bovine mastitis, wound healing, uterine infections and gastroduodenal ulcers, due to its antiseptic, healing, anti-inflammatory and antioxidant properties. However, the antioxidant activity in its whole complexity has not been fully studied in order to elucidate the mechanisms of action involved in this pharmacological effect. Objective: to determine if R. mangle bark aqueous extract and its polyphenolic fraction protect the main biomolecules from oxidative damage. Methods: the antioxidant activity of R. mangle extract and its polyphenolic fraction on the main biomolecules was determined by the following methods: oxidative damage trial on bovine serum albumin exposed to hydroxyl radicals generated in the Fenton system and the bleomycin-Fe3+ system-induced DNA oxidative degradation trial. Results: the R. mangle bark extract and its polyphenolic fraction, at the highest tested concentration, reduced the sulfhydryl group oxidation by 87,3 % and 89,1 % and they also inhibited the DNA degradation by 98.4 % and 91.9 % respectively. The regression analysis demonstrated that both effects depended on tannin concentration in the extract and its fraction. The comparison of regression lines revealed that the extract and its fraction were equally effective in protecting bovine serum albumin from oxidation by hydroxyl radicals; however, the extract was more effective when protecting DNA from oxidative degradation than its fraction. Conclusions: the R. mangle aqueous extract showed a protective effect on the main biomolecules from the oxidative damage, evidenced by inhibiting loss of sulfhydryl group in bovine serum albumin and decreasing the DNA degradation. At the same time, it was shown that polyphenolic compounds present in the extract were the main responsible for the antioxidant effects observed in this study.

**Efecto antiinflamatorio y antimicótico del extracto alcohólico y composición química del aceite de hojas de Conyza bonariensis (L.) Cronquist (canilla de venado)**

Introducción: la especie Conyza bonariensis (L.) Cronquist, comúnmente llamada canilla de venado, es de origen americano. Objetivos: contribuir al estudio farmacológico y toxicológico de los extractos alcohólicos y a la evaluación química del aceite de hojas de C. bonariensis de Ecuador. Métodos: se emplearon 2 tinturas a 50 % con etanol a 70 y 90 % de hojas secas. Se realizó un estudio fitoquímico a través del sistema acoplado de cromatografía gaseosa-espectrometría de masas, se determinó el efecto antimicótico mediante inhibición de dilución en placa con siembra en superficie por diseminación, y antiinflamatorio en el modelo de edema de la oreja inducido por aceite de Croton en ratones albinos de la línea OF1. Resultados: el tamizaje fitoquímico mostró presencia de aceites esenciales, triterpenos-esteroides, compuestos fenólicos, flavonoides, quinonas, antocianidinas, saponinas y compuestos reductores. Se determinó estructuras a 32 componentes del aceite esencial extraído de las hojas y el sesquiterpeno: trans-b-farneseno resultó el componente mayoritario con 70,82 %, este compuesto se informa por primera vez en esta especie. El extracto hidroalcohólico (25 µL a cada lado de las orejas tratadas) inhibió significativamente la inflamación comparado con bencidamina. Conclusiones: los extractos hidroalcohólicos mostraron efecto antiinflamatorio en las condiciones experimentales del estudio y se determinó la composición química del aceite de hojas de C. bonariensis.

Introduction: the Conyza bonariensis (L). Cronquist species, usually called deer shinbone is of American origin. Objectives: to contribute to the pharmacological and toxicological study of alcoholic extracts and to the chemical assessment of C. bonariensis leaf oil from Ecuador. Methods: two 50 % tinctures of 70 % and 90 % ethanol content in dry leaves were used. A phytochemical study was conducted by an combined system of mass spectrometry and gas chromatography; the amniotic effect was determined using plate dilution inhibition with surface culturing by dissemination, and the anti-inflammatory effect in the Croton oil induced ear edema model in OF1 line albino mice. Results: the phytochemical screening showed the presence of essential oils, triterpene-steroids, phenolic compounds, flavonoids, quinones, anthocyanidines, saponins and reducing compounds. The structures of 32 essential oil components extracted from the leaves were identified along with and the sesquiterpene trans-b-farnesene that was the major component (70.82 %), this compound is reported for the first time in this species. The hydroalcoholic extract (25 µL on each side of the treated ears) significantly inhibited inflammation compared to benzidamine. Conclusions: hydroalcoholic extracts showed anti-inflammatory effect in the experimental conditions of the study and the chemical composition of C. bonariensis leaf oil was identified.

**Efecto cicatrizante de la pasta de clorofila-caroteno de Pinus caribaea var. caribaea sobre heridas abiertas asépticas**

Introducción: la cicatrización de heridas es un problema de salud de gran relevancia en la práctica médica actual. Diversos tratamientos en su curación se proponen, entre ellos la aplicación de plantas medicinales. El follaje de Pinus caribaea var. caribaea presenta una variada composición química y es una planta forestal de abundancia en Cuba. Objetivo: evaluar la actividad cicatrizante de la pasta de clorofila-caroteno obtenida a partir del follaje de P. caribaea en un modelo de heridas abiertas en ratas, empleando como controles positivos dos formulaciones de acción cicatrizante comprobada de Rhizophora mangle L. Métodos: se utilizaron 16 ratas Wistar de los 2 sexos, en 4 grupos de 4 ratas cada uno, a las cuales se les provocó heridas. En el grupo control se realizó la administración tópica de vehículo (agua estéril), y en los 3 restantes, pasta de clorofila-caroteno, CIKRON y gel de R. mangle, diariamente durante 11 d. Se procedió a la medición del área de las heridas en el día inicial, a los 8 y 11 d; además, se hizo la evaluación clínica del estado de los animales y se sacrificaron al final del experimento, con el estudio histopatológico de la piel. La evaluación estadística se procesó por análisis de varianza, comparación múltiple de Duncan y chi cuadrado. Resultados: se comprobó el efecto cicatrizante de la pasta de clorofila-caroteno, al disminuir el área de las heridas de manera significativa respecto al resto de los grupos en los días 8 y 11, así como no se manifestaron signos clínicos. El estudio histológico se caracterizó por presentar un porcentaje de heridas en la fase II de cicatrización de la epidermis y dermis en todos los grupos, el grupo tratado con pasta de clorofila-caroteno mostró la mayor proporción de parámetros histológicos en la fase I y II de cicatrización respecto al resto de los grupos. Conclusiones: se demostró el efecto favorable de la pasta de clorofila-caroteno obtenida de las acículas del P. caribaea en el proceso de curación de heridas abiertas, comparables a los efectos de los medicamentos desarrollados con R. mangle.

Introduction: wound healing is a significant healthcare problem in today's medical practice. Several courses of treatment are suggested for healing, including the use of medicinal plants. The green foliage of Pinus caribaea var. caribaea, an abundant plant in Cuba, presents varied chemical composition. Objective: to evaluate wound healing activity of chlorophyll carotene paste from green foliage of Pinus caribaea var. caribaea in open wounds in rats, using two Rhizophora mangle L. formulations with proved wound healing effect as positive controls. Methods: Wistar rats of both sexes, distributed into 4 groups of 4 rats each, were used and they were intentionally wounded. In the control group, the sterile water as vehicle was topically administered where in the other 3 groups, the chlorophyll carotene paste, CIKRON and gel from R. mangle were daily applied for 11 days. The wound area was measured on the first day, 8th and 11th days; in addition to clinical evaluation of the condition of the rats, which were slaughtered at the end of the experiment. A histopathological study was conducted with their skin. The statistical exaluation was based on variance analysis, Duncan´s multiple comparison and chi square. Results: the healing effect of chlorophyll-carotene paste was significant since the wound areas were substantially reduced at 8th and 11th days and clinical signs did not appear. The histological study revealed a high percentage of wounds in healing Phase II of the epidermis and dermis in all the groups. The group treated with chlorophyll-carotene paste showed the greatest portion of histological parameters in healing phases I and II with respect to the rest of the groups. Conclusions: the favourable effect of chlorophyll carotene paste from green foliage of Pinus caribaea var. caribaea in the open wound healing was demonstrated, which is comparable to that of the drugs from Rhizophora mangle L.

**Actividad antimicrobiana y toxicidad frente a Artemia salina del extracto diclorometánico de raíces de Morinda royoc L.**

Introducción: las plantas son una fuente de diversidad natural por la gran variedad de compuestos que sintetizan. Particularmente las antraquinonas resultan un importante grupo de metabolitos secundarios con actividad antimicrobiana y antioxidante. Objetivos: evaluar la actividad antimicrobiana del extracto diclorometánico de raíces de Morinda royoc L., así como su toxicidad contra Artemia salina. Métodos: la actividad antimicrobiana se determinó utilizando el método de microdilución en placa de 96 pozos. Se evaluó la actividad del extracto frente a 7 aislados clínicos de Candida spp. y frente a las bacterias Staphylococcus aureus resistente a meticilina, Staphylococcus aureus ATCC 12598, Enterococus faecales, Escherichia coli, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa y Klebsiella pneumoniae. La toxicidad del extracto se evaluó mediante el ensayo de letalidad con A. salina. Resultados: el extracto crudo fue activo frente a todas las especies de Candida evaluadas. La concentración mínima inhibitoria más baja fue 1,95 µg/mL. El extracto mostró fuerte actividad inhibitoria contra S. aureus, E. faecales, y E. coli. El valor más bajo de concentración mínima inhibitoria obtenido fue 31,25 µg/mL. El extracto presentó una toxicidad moderada hacia A. salina. Conclusiones: los resultados obtenidos demuestran el potencial del extracto diclorometánico de raíces de M. royoc L. en el tratamiento de infecciones causadas por bacterias y hongos.

Introduction: plants are a source of natural diversity because of the great variety of compounds that they synthesize. Anthraquinones in particular are an important group of secondary metabolites characterized by their antimicrobial and antioxidant action. Objectives: to evaluate the antimicrobial action of dichloromethane extract from Morinda royoc L. roots as well as its toxicity against Artemia salina. Methods: the antimicrobial action was determined by using the brooth microdilution in 96-well plate. The extract action against 7 Candida spp clinical isolates and against bacteria such as methicillin-resistant Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus ATCC 12598, Enterococus faecales, Escherichia coli, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae was evaluated. The extract toxicity was measured using brine shrimp (Artemia salina) lethality test. Results: the crude extract proved to be active against all the tested Candida species. The lowest minimal inhibitory concentration was 1.95 µg/mL. The extract showed strong inhibitory action against S. aureus, E. faecales, and E. coli. The lowest minimal inhibitory concentration was 31.25 µg/mL. The extract presented moderate toxicity against A. salina. Conclusions: the results showed the potentialities of dichloromethane extract from M. royoc L. roots for the treatment of bacterial and fungal infections.

**Análisis fitoquímico preliminar y actividad antioxidante, antiinflamatoria y antiproliferativa del extracto etanólico de corteza de Zanthoxylum fagara (L.) Sarg. (Rutaceae)**

Introducción: la especie Z. fagara, que presenta múltiples usos etnobotánicos y diversidad de metabolitos secundarios, se convierte en objeto de estudio promisorio a nivel fitoquímico y(o) farmacológico. Objetivo: detectar la posible presencia de ciertos grupos de metabolitos secundarios mediante análisis fitoquímico preliminar y evaluar la actividad antioxidante, antiinflamatoria y antiproliferativa del extracto etanólico de corteza de Zanthoxylum fagara (L.) Sarg. (Rutaceae). Métodos: el extracto de corteza se sometió a un análisis fitoquímico preliminar, evaluándose mediante ensayos de actividad antioxidante (DPPH, TBARS y peroxidación inducida con FeSO4), antiinflamatoria (edema de oreja de ratón inducido con TPA) y antiproliferativa (se trataron células tumorales, y se usó proteína sulforrodamina B [SRB] en ensayo de microcultivo, se midió viabilidad y crecimiento celular). Resultados: en el extracto se detectó la presencia de alcaloides, flavonoides, taninos y terpenos, principalmente. La actividad antioxidante, a concentraciones de 10, 100 y 1 000 ppm, exhibió porcentajes de inhibición de 14,9; 84,5 y 92,5 %, respectivamente (frente al DPPH); de 92,8 % (a 1 000 ppm) (prueba TBARS), y de 4,2; 47,1 y 93,9 %, respectivamente, en la peroxidación inducida con FeSO4. La actividad antiinflamatoria mostró 45,3 %, y en el caso de la antiproliferación fue moderadamente activo contra las líneas celulares cancerosas K562, con valor de 55,5 %. En otras líneas evaluadas (U251, PC-3, HCT-15, MCF-7, y SKUL) el porcentaje fue inferior a 50 %. Conclusiones: se evidenció la presencia de alcaloides, flavonoides, taninos y terpenos. La capacidad antioxidante y antiinflamatoria fue representativa a concentraciones superiores a 100 ppm, mientras que la actividad antiproliferativa fue moderadamente efectiva contra líneas de células cancerosas leucémicas K562.

Introduction: the Z. fagara species having multiple ethnobotanical uses, and a variety of secondary metabolites becomes a promising object of study at phytochemical and/or pharmacological settings. Objectives: to detect the possible presence of certain groups of secondary metabolites by means of a preliminary phytochemical analysis and to evaluate the antioxidant, anti-inflammatory and antiproliferative activities of the ethanolic extract from Zanthoxylum fagara (L.) Sarg. (Rutaceae)bark. Methods: the bark extract underwent preliminary phytochemical analysis using tests to evaluate antioxidant action (DPPH, TBARS test and FeSO4-induced peroxidation), anti-inflammatory activity (using mouse ear edema induced by acetate 12-O-tetradecanoylphorbol, TPA) and antiproliferative property (in treating tumor cells, sulphorodamine B protein (SRB) in microculture assay was used in addition to measuring cell viability and growth). Results: alkaloids, flavonoids, tannins and terpenes were found in the extract. The antioxidant activity at 10, 100 and 1000 ppm concentrations, exhibited inhibition percentages of 14.9; 84.5 and 92.5 % respectively [compared to DPPH]; 92.8 % (1 000 ppm) [TBARS test], and 4.2; 47.1; and 93.9 %, respectively, in the FeSO4-induced peroxidation. The anti-inflammatory activity showed inhibition percentage of 45.3 %, and in the case of anti-proliferation, the extract was moderately active against cancer cell lines K562, being the inhibition percentage equals to 55.5 %. In the other tested lines (U251, PC-3, HCT-15, MCF-7, and Skule) the inhibition percentage was lower than 50 %. Conclusions: the preliminary phytochemical testing showed the presence of alkaloids, flavonoids, tannins and terpenes. Antioxidant and anti-inflammatory properties were observed at above 100 ppm extract concentrations, whereas the antiproliferative activity was moderately effective against leukemia cancer cell lines K562.

**Análisis fitoquímico de la Salvia coccinea que crece en Cuba**

Introducción: la especie Salvia coccinea L., conocida como banderilla, se emplea en Cuba solo como ornamental, aunque en otros países tiene algunos usos etnomédicos sin que se le hayan reportado estudios farmacológicos. A las plantas de esta especie que crecen en Cuba no se le han realizado estudios fitoquímicos. Objetivo: realizar un tamizaje fitoquímico de los extractos hidroalcohólicos de tallos, flores y hojas de la especie Salvia coccinea L. Métodos: se recolectaron los tallos, así como las hojas y flores, se lavaron, desinfectaron, secaron a 40 ºC y extrajeron de forma independiente a reflujo con una mezcla EtOH/H2O (60:40) a una relación soluto-disolvente de 1:10 durante 2 h. Los extractos se filtraron y se les hicieron las pruebas fitoquímicas. Resultados: los grupos de compuestos identificados en los 2 extractos fueron saponinas, azúcares, principios amargos, fenoles, taninos, grupos amino, alcaloides y flavonoides. El extracto liofilizado de las hojas y flores presentó 9,02 % de polifenoles totales. Conclusiones: en la S. coccinea L. que crece en Cuba se encontraron varios grupos de compuestos, entre estos flavonoides y alcaloides, los que pudieran tener interés farmacológico potencial. Estos resultados conminan a continuar el estudio de los extractos de esta planta y a iniciar la evaluación de sus efectos farmacológicos.

Introduction: the Salvia coccinea L. species, known as banderilla, is used in Cuba as an ornamental plant. Nevertheless, some traditional medical uses have been reported in other countries without reports of pharmacological studies. No phytochemical study has been made with plants of this species growing in Cuba. Objective: to carry out the phytochemical study of hydroalcoholic extracts from stems, leaves and flowers of the Salvia coccinea L. species. Methods: stems, leaves and flowers were collected, washed, disinfected, dried at 40 °C and independently extracted under reflux with a EtOH/H2O (60:40) mixture for 2 h at a solute-solvent ratio of 1:10. Results: compounds identified in both extracts were saponins, sugars, bitter principles, phenols, tannins, amino groups, alkaloids and flavonoids. The lyophilized extract from leaves and flowers contained 9.02 % of total polyphenols. Conclusions: several groups of compounds were found in the S. coccinea L. that grows in Cuba, such as flavonoids and alkaloids, and they could be of potential pharmacological interest. These results encouraged to continue the study of extracts from this plant and to begin evaluating their pharmacological effects.

**Caracterización fitoquímica y de las actividades antibacterianas y anticolinesterasa de Banisteriopsis anisandra A. Juss. (Malpighiaceae)**

Introdução: o uso de plantas para fins medicinais vem crescendo a cada dia. A partir de métodos extrativos, podem-se obter extratos com diferentes atividades terapêuticas, dentre elas ação antifúngica, anticolinesterásica, antitussígena e antibacteriana, esta última, por sua vez, de grande importância comercial em vista do crescimento gradativo de casos de infecções por bactérias resistentes aos tratamentos convencionais. Objetivos: caracterizar químicamente os extratos foliares de B. anisandra, uma vez que não há relatos sobre a mesma na literatura e verificar as atividades anticolinesterásica e antibacteriana destes frente às bactérias patogênicas. Métodos: os extratos obtidos a partir de hexano, clorofórmio, acetato de etila e metanol tiveram as classes fitoquímicas presentes identificadas através de métodos de identificação clássica, testados frente a bactérias patogênicas Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans, Bacillus cereus, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa e avaliados quanto à capacidade de degradação da enzima acetilcolinesterase. Resultados: os resultados encontrados revelaram a diversificação química encontrada em B. anisandra e o potencial farmacotecnológico de seus extratos, especialmente em relação a alcalóides presentes e à sua atividade anticolinesterásica. Conclusão: conclui-se que os extratos de B. anisandra podem ser utilizados para fins farmacotecnológico e que necessita-se de mais estudos fitoquímicos em relação a esta espécie.

Introducción: el uso de plantas con fines medicinales está creciendo cada día. De los métodos de extracción, se pueden obtener extractos con diferentes actividades terapéuticas, entre ellas, antifúngicas, anticolinesterasa, antitusivas y antibacterianas; esta última, a su vez, de gran importancia comercial en vista al aumento gradual de los casos de infecciones por bacterias resistentes a los tratamientos convencionales. Objetivos: caracterizar químicamente los extractos de hojas de B. anisandra, porque no hay reportes en la literatura y verificar las actividades de la acetilcolinesterasa y la actividad antibacteriana frente a bacterias patógenas. Métodos: los extractos obtenidos a partir de la partición con hexano, cloroformo, acetato de etilo y metanol fueron identificados y las clases de fitoquímicos presentes en los extractos mediante métodos de identificación clásica, los cuales fueron probados contra bacterias patógenas de Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans, Bacillus cereus, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa, y evaluados por la capacidad de degradación de la enzima acetilcolinesterasa. Resultados: se mostró la diversidad química encontrada en B. anisandra y el potencial farmacotecnológico, especialmente en relación con los alcaloides encontrados y su actividad anticolinesterasa. Conclusiones: los exctratos de B. anisandra se pueden utilizar para fines farmacotecnológicos y se necesitan más estudios fitoquímicos en relación con esta especie.

**Fitoesteroles y escualeno como hipocolesterolémicos en cinco variedades de semillas de Cucurbita maxima y Cucurbita moschata (calabaza)**

Introducción: la semilla de calabaza se ha estudiado y utilizado en el tratamiento de enfermedades parasitarias, hipertrofia benigna prostática, cistitis y como hipoglicemiante.Sin embargo, se desconocen investigaciones que refieran el uso de la semilla de calabaza y sobre todo de los fitoesteroles y escualeno como elementos hipocolesterolémicos en humanos. Objetivo: determinar el contenido de fitoesteroles y escualeno de cinco variedades de semilla de calabaza para su posible uso como hipocolesterolémicos en humanos. Métodos: se estudiaron semillas de calabaza de dos especies, Cucurbita maxima y Cucurbita moschata, de Cuba y México de las variedades Fifí, Marucha, INIVIT C- 88 (cubanas), Chata y Tapatía (mexicanas), se determinó el perfil de fitoesteroles (beta-sitosterol, campesterol, estigmasterol y estigmastenol) y escualeno mediante cromatografía gas-líquido. Resultados: el contenido de extracto etéreo y grasa verdadera en las semillas osciló entre 331,5 y 346; 307 y 336 g/kg, respectivamente. La variedad fifí (Cucurbita moschata) presentó el mayor contenido de material insaponificable (35,0 g/kg), mostró diferencias significativas (p< 0,001) con las demás variedades y superior a las semillas oleaginosas convencionales. La concentración de escualeno y beta-sitosterol resultó superior en la variedad marucha (Cucurbita moschata) (40,27 y 202,59mg/100 g), que indicó diferencias significativas (p< 0,001) con las restantes variedades. Las variedades chata y marucha presentaron el mayor contenido de campesterol (50,08y 49,31 mg/100 g, respectivamente), así como la marucha encontró la mayor concentración de stigmasterol y estigmastenol (1,75y 28,63 mg/100 g), además, los contenidos resultaron superiores a los alimentos vegetales frecuentes en las dietas. Conclusiones: los resultados obtenidos en la concentración de los fitoesteroles y escualeno en las variedades analizadas, sugieren el estudio de la semilla de calabaza como posible hipocolesterolémico en humanos.

Introduction: the pumpkin seed has been studied and used in the treatment of parasitic diseases, benign prostatic hypertrophy, cystitis and as hypoglycemic substance. However, the research concerning the use of pumpkin seeds and especially the sterols and squalene as hypocholesterolemic elements in humans is unknown. Objective: to determine the phytosterol and squalene content of five varieties of pumpkin seeds for their potential use as hypocholesterolemic compounds in humans. Methods: the pumpkin seeds from two species called Cucurbita maxima and Cucurbita moschata from Cuba and Mexico were studied. The varieties were Fifi, Marucha, INIVIT C-88 (Cuban), Tapatía and Chata (Mexican) for which the profile of phytosterols (beta-sitosterol, campesterol, stigmasterol and stigmastenol) and the squalene were determined using gas-liquid chromatography. Results: the content of ethereal extract and real fat in the seeds ranged 331.5 to 346, and 307 to 336 g/kg, respectively. The variety Fifi (C. moschata) had the highest content of unsaponifiable material (35.0 g/kg) and showed significant differences (p< 0.001) compared with other varieties and above that of conventional oilseeds. The squalene, and beta-sitosterol concentration was higher Marucha (Cucurbita moschata) (40.27 and 202.59 mg/100 g), indicating significant differences (p< 0.001) compared with other varieties. Marucha and Chata varieties exhibited the highest campesterol content (50.08 and 49.31 mg/100 g, respectively), and the Marucha evidenced the largest concentration of stigmasterol and stigmastenol (1.75 and 28.63 mg/100 g); additionally, the amounts contained were above those of the common vegetable food in the diet. Conclusions: the results in phytosterol and squalene concentrations achieved in the studied varieties suggested that the pumpkin seeds be studied as a possible hypocholesterolemic substance for humans.

**Validación del método de cuantificación de taninos totales en formulaciones semisólidas de Rhizophora mangle L. (mangle rojo)**

Introducción: extractos acuosos de Rhizophora mangle L. (mangle rojo) presentan alto contenido de taninos que le confieren propiedades de antiséptico y cicatrizante. Objetivo: demostrar la validez de un método de cuantificación de taninos totales para el control de calidad de formulaciones semisólidas de mangle rojo. Métodos: se estudiaron los indicadores de linealidad, precisión, exactitud, selectividad, y robustez, sugeridos por la USP y la Regulación 41 del CECMED para métodos cuantitativos de contenido o pureza de principios activos mayoritarios. Resultados: se demostró la linealidad en el rango de 0,40-1 mg/mL del patrón empleado, se obtuvo la ecuación de la recta, con coeficientes de determinación y correlación (r² y r) de 0,9912 y 0,9956; el intercepto y la pendiente, no difirieron 0 y 1, respectivamente. Los estudios de recobrado mostraron porcentajes de recobro superiores a 98 % en los diferentes niveles de concentración ensayados indicativos de una adecuada exactitud. El método resultó ser preciso tanto en condiciones óptimas de repetibilidad como en condiciones intermedias. Los resultados de la selectividad mostraron que la respuesta del método no presentó interferencias con otros componentes de la formulación, así como la ausencia de respuesta en los placebos. La robustez quedó comprobada al no obtenerse diferencias significativas entre los resultados obtenidos de corridas del ensayo normal y corridas con cambios (temperatura y tiempo de la centrifugación, variaciones pequeñas del pH del buffer) que resultaron no significativos. Conclusiones: el método de cuantificación de taninos totales resulta confiable para la evaluación de estos compuestos en la formulación semisólida estudiada.

Introduction: Rhizophora mangle L. (red mangrove) aqueous extracts have high tannin content that gives them antiseptic and healing features. Objective: to demonstrate the validity of total tannin quantitative determination method for the quality control of semi-solid red mangrove formulations. Methods: The linearity, precision, accuracy, selectivity and robustness indicators were studied in pursuant to the USP guidelines and the Regulation 41 of CECMED for the quantitative determination methods of the content or purity of majority active principles. Results: the linearity in the 0.40-1 mg/mL range of the used pattern was proved, the equation of the straight line with determination and correlation (r² y r) coefficients equal to 0.9912 and 0.9956 respectively were obtained, and the intercept and the slope did not differ from 0 and 1, respectively. The recovery studies showed recovery rates over 98 % at the various levels of concentration tested, which indicated adequate accuracy. The method was precise both in optimal repeatability conditions and intermediate conditions. The selectivity results revealed that the method response did not interfere with other components of the formulation, and that there was no response in the placebos. Robustness was confirmed since no significant differences between the results from the normal test runs and from the test runs including changes (temperature and centrifugation time, slight variations in the buffer pH) were observed, being all these results not significant. Conclusions: the total tannin quantitative determination method was reliable for the evaluation of these compounds in the studied semi-solid formulation.

Influencia de la preparación de la corteza de Rhizophora mangle L. en el proceso de extracción sólido-líquido

Introducción: la corteza de Rhizophora mangle L., rica por su contenido de taninos, es la fuente de materia prima en la obtención de productos farmacéuticos desarrollados en el Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. Para que los extractos obtenidos a partir de esta corteza tengan la calidad requerida, esta debe ser secada y molinada antes de pasar a la etapa de lixiviación. Objetivos: evaluar diferentes métodos de secado y diferentes tamaños de partículas sobre el rendimiento del extracto acuoso de la corteza de R. mangle. Métodos: se emplearon 3 métodos de secado (en estufa, al sol y a la sombra) y 2 tamaños promedios de partículas de la corteza de R. mangle para evaluar la calidad del extracto por determinación del contenido de sólidos solubles totales, taninos totales y actividad antimicrobiana in vitro. Para la comparación estadística de los resultados se utilizó el programa Statgraphycs. Resultados: se observó que el secado en estufa y al sol son los más recomendados para este fin, además se obtuvieron extractos con cortezas molinadas con diferentes tamaños promedios de partículas y no se encontraron diferencias significativas en la evaluación de estos. Conclusiones: los métodos de secado estudiados permitieron obtener buenos resultados en la evaluación de la corteza; con el secado en estufa seguido del secado al sol se lograron los menores tiempos de operación.

Introduction: Rhizophora mangle L. bark, rich in tannin content, is the source of raw material for pharmaceuticals manufactured at the National Center for Animal and Plant Health (CENSA). For the extracts obtained from the bark to have the required quality, it is necessary that the bark be dried and grounded before lixiviation. Objectives: to evaluate different drying methods and several particle sizes on account of R. mangle aqueous extract yield. Methods: Three drying methods (oven, sun and shade) and 2 average bark particle sizes were used to evaluate the extract quality by determining the total soluble solid content, total tannins and in vitro antimicrobial activity. The Statgraphycs program was used to statistically compare the results. Results: it was observed that the oven drying and the sun drying were the most recommended methods; additionally, no significant differences were found in the extracts obtained from several average grounded bark particle sizes. Conclusions: the studied drying methods allowed achieving good results in the evaluation of the bark. The oven drying followed by the sun drying accounted for the shortest operating times.

**Influencia de las condiciones de cultivo y del momento óptimo de cosecha en Artemisia annua L.**

Introducción: Artemisia annua L. es una planta medicinal de gran interés y es importante precisar los aspectos agrícolas que garanticen su adecuado cultivo. Objetivos: determinar la influencia del cultivo a pleno sol y a la sombra y de la cosecha a diferentes horas y edades de la planta en la producción de biomasa y de los principios activos. Métodos: se utilizaron canteros a plena exposición solar y con determinada disminución de la luz para estudiar las condiciones de cultivo y en las investigaciones del momento de cosecha, en la recolección a diferentes horas del día: 9:00 am, 26 ºC; 11:00 a.m., 30 ºC; 1:00 p.m., 32 ºC; 3:00 p.m. 33 ºC se seleccionaron plantas cultivadas a pleno sol, de 6 meses de edad; en el otro experimento se evaluó en plantas procedentes de semilleros establecidos en 2 fechas: 5 de noviembre y 8 diciembre, la recolección de la parte aérea a diferentes edades: 5, 6 y 7 meses. Se valoró la producción de biomasa, el contenido de artemisinina y adicionalmente el de aceite esencial y el de alcanfor. La extracción del aceite esencial se realizó por hidrodestilación y la de artemisinina y alcanfor por cromatografía gaseosa, la determinación de la presencia de estos dos componentes se realizó por cromatografía en capa delgada y además se valoraron los parámetros farmacognósticos: sustancias solubles en agua y en alcohol. Resultados: se encontraron pocas diferencias en cuanto al rendimiento de la parte aérea en las dos formas de cultivo, pero sí se obtuvo mayor contenido de artemisinina, aceite esencial y alcanfor en el cultivo a pleno sol. La mejor hora para realizar la cosecha es la mañana, donde se presentan mayores valores de aceite esencial y en cuanto a la edad de cosecha, la de 6 meses resultó la más adecuada, cuando hubo mayor proporción de ramas y hojas y menor de tallos viejos, con pocas diferencias entre las fechas en que se hicieron las siembras y se presentaron los mayores porcentajes de aceite esencial y de las sustancias solubles. Conclusiones: los resultados obtenidos permiten recomendar que la planta se siembre a inicios de noviembre-diciembre, a pleno sol y la recolección se lleve a cabo después de las 9:00 a.m. hasta 1:00 p.m., a los 6 meses de edad.

Introduction: Artemisia annua L. is medicinal plant of great interest, and therefore it is important to specify exactly the agricultural elements supporting its proper growing. Objectives: to determine the influence of growing this plant in the sun and in the shade and of harvesting at different hours and plant ages in the production of biomass and active principles. Methods: flowerbeds were placed in the sun and in dimmed light conditions in order to study the growing conditions. In the research conducted at the time of harvest, plants grown in the sun, of 6 months of age and at various day hours: 9:00 a.m. at 26 ºC; 11:00 a.m. at 30 ºC; 1:00 p.m. at 32 ºC, and 3:00 p.m. at 33 ºC were harvested. In the other experiment, the harvest of the aerial parts of the plants coming from seedbeds created on November 5th and on December 8th and aged 5, 6 and 7 months was evaluated. The production of biomass, the content of artemisinin and additionally that of the essential oil and camphor were assessed. The extraction of the essential oil using hydrodistillation and that of artemisinin and the camphor by gas chromatography, the detection of the these two components was made by thin-layer chromatography and also the pharmacognostic parameters such as water- and alcohol-soluble substances were evaluated. Results: there were little differences in aerial parts yielding in the two growing methods but there was high content of artemisinin, essential oil and camphor in plants grown in the sun. The better time interval for harvest is the morning, when there are higher values of essential oil; regarding harvesting age the 6 month was the most convenient since there was higher proportion of branches and leaves and less old stems, with little differences among the dates of growing and the highest percentages of essential oil and soluble substances. Conclusions: the results obtained allow recommending that the plant be grown in the sun at the beginning of the November-December period and be harvested after 9:00 a.m. till 1:00 p.m. and at 6 months of age.