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Introducción
En la región Amazónica la inseminación artificial (IA) en ovinos permite un incrementode la tasa de ganancia genética de la progenie por macho y por año, facilita el transporte del material genético sin la necesidad de mover animales en pie con los riesgos sanitarios que esto conlleva, incrementa la eficiencia del servicio y el registro de datos (Castelo et al., 2008; Ribeiro-Peresa et al., 2014; Villa-Duque et al., 2016). Entre sus desventajas están los posibles errores de servicio, la dispersión de enfermedades si no se realizan los controles adecuados, los costos más elevados y la necesidad de contar con personal capacitado (Bernardi et al., 2011).
A pesar de todos sus beneficios, la implementación de la IA en ovinos no se encuentra tan difundida como en otras especies domésticas. Los porcentajes de fertilidad usando semen fresco son aceptables ⸺superiores el 60 %⸺ aunque irregulares, mientras que al emplear semen criopreservado son inferiores al 40 % (Perry et al., 2010). El éxito de la IA es multifactorial, se relaciona con factores propios de la hembra (manejo, estacionalidad, morfología genital), del macho (estacionalidad, calidad y/o conservación del semen) (Salamón y Maxwell, 2000; Santiani et al., 2007; Barbas et al., 2013), de manejo (condiciones ambientales, estado sanitario, manipulación), así como factores propios de la técnica: sitio de inseminación, cantidad de espermatozoides/dosis, capacitación del personal inseminador (Anel et al., 2006).
En el ovino, las horas luz (fotoperíodo negativo) y la temperatura son los factores ambientales que influyen más marcadamente en la calidad seminal. Una menor calidad de los eyaculados puede extenderse entre 15 días y dos meses posteriores a la exposición a altas temperaturas (Carmenate et al., 1982; Lincoln, 1992; Manco et al., 2014). Lozano-Marquez et al. (2016) han demostrado que carneros de diferentes razas son sensibles a las condiciones medioambientales del Trópico Alto Colombiano. Además, observaron que estos estresores ambientales aumentan la temperatura escrotal dificultando la termorregulación, lo cual impacta negativamente sobre las variables de volumen, concentración, motilidad individual y progresiva, viabilidad y morfología normal. Asimismo, durante procesos inflamatorios, en los testículos hay un aumento en la temperatura testicular de al menos 3 °C, y una reducción de 2 a 3 °C en el gradiente de temperatura escrotal (Cisale et al., 1999). Otros factores que pueden influir aumentando la temperatura corporal son los estados febriles causados por enfermedades, arreos prolongados o estrés (Simonetti et al., 2014).
El objetivo del presente trabajo fue evaluar cómo se vio modificada la fertilidad frente a una infección bacteriana sistémica y la recuperación posterior a la antibióticoterapia.
MATERIALES Y MÉTODOS
El caso se presentó en el año 2018, en dos machos ovinos de pelo largo raza Blackbelly, uno apodado Justin de 40 meses de edad, con una condición corporal de 2,3 y un peso de 48 kg, y el segundo apodado Sambo, de 44 meses de edad, con una condición corporal de 2,2 y un peso de 55 kg, pertenecientes a la majada del Centro de Investigación, Posgrado y Conservación de la Biodiversidad Amazónica (CIPCA). Dicho centro está ubicado en el cantón Arosemena Tola de la provincia de Napo (Ecuador), en el kilómetro 44 vía Puyo-Tena (coordenadas: S 01° 14.325´; W077° 53.134´) y dispone de una superficie de 3 ha de pastos destinadas al módulo de lechería ovina. El ambiente es tropical con precipitaciones de 4 000 mm/año, una humedad relativa promedio del 80 % y temperaturas que varían entre los 15 y los 25 °C. Su topografía se caracteriza por relieves ligeramente ondulados sin pendientes pronunciadas, distribuidos en mesetas naturales de gran extensión. La altitud varía entre los 580 y 990 m snm. Si bien los suelos presentan una composición muy heterogénea, la mayoría se origina en sedimentos fluviales procedentes de la región andina del país. El CIPCA cuenta con cinco carneros que comparten un potrero de 0,5 ha, su alimentación se basa en forraje de Brachiaria decumbens (pasto Dallis) y Brachiaria brizantha (pasto Marandú), y por la noche se encierran con suplementación mineral. Se extrae semen en forma semanal mediante la técnica de vagina artificial, método rápido y que evita el estrés de los machos, además de posibilitar las colectas seriadas (Aisen, 2004). En marzo de 2018 se observó que dos de los machos presentaban diferentes patologías:
Justin: Al realizar el examen de rutina pre colecta seminal (Robles, en Actualización en Producción ovina, 2015, INTA) este carnero presentó un comportamiento atípico, por lo que se procedió en primera instancia con un examen semiológico minucioso. Características clínicas: El ritmo cardíaco (RC) fue de 90/min, la frecuencia respiratoria (FR) de 18/min y la temperatura de 40 ºC. Al examen físico general, se encontró un exudado purulento con daño en piel y tejidos a nivel del escroto. El diagnóstico presuntivo fue de infección septicémica por contaminación bacteriana posterior a una miasis o larvas de moscas Cochliomyia hominivorax, localizada en el escroto, basado en los síntomas y signos febriles e inflamación de ganglios. El tratamiento indicado fue antibiótico, antinflamatorio no esteroide: combinación de Penicilina G Benzatínica, Penicilina G Procaínica, Penicilina G Potásica, Estreptomicina y Diclofenac sódico Class© (Laboratorio CCLabs). Dosis recomendada del producto: 1 mL/ 15 kg de peso. Dosis administrada: 3,20 mL IM profunda durante tres días seguidos. Además, se realizó tratamiento local de la zona afectada con pulverización y baños compuestos con yodóforos y repelentes de aplicación diaria hasta su recuperación total.
Sambo: Se detectó una claudicación, por lo cual se realizó un examen semiológico minucioso. Características clínicas: RC: 88/min, FR: 19/min Temperatura 39,8ºC. Presentó una cojera evidente, hinchazón simétrica bilateral e hiperémica de los bulbos del talón que se extendía a los dedos adyacentes, también se encontró localmente un exudado caseoso, mal oliente, con ligero daño en pezuña. El diagnóstico presuntivo fue de infección localizada en la extremidad posterior derecha a causa de una claudicación acompañada con una infección podal interdigital, basado en los síntomas y signos febriles, inflamación de la corona, jadeo, cojera y anorexia. El tratamiento indicado fue antibiótico y antinflamatorio no esteroide: combinación de Penicilina G Benzatínica, Penicilina G Procaínica, Penicilina G Potásica, Estreptomicina y Diclofenac sódico Class© (Laboratorio CCLabs). Dosis recomendada del producto: 1 mL/ 15 kg de peso. Dosis administrada: 3,6 mL IM profunda por cinco días seguidos. Limpieza tópica de la extremidad afectada con yodóforos y repelentes a diario hasta su mejoría.
El mismo día que se detectaron los síntomas a los dos carneros, se implementó el tratamiento, sin realizar la identificación etiológica de los agentes patógenos. Luego de comenzado el tratamiento, se realizaron extracciones seriadas de semen durante dos meses (del 31/03/2018 al 31/05/2018), una vez a la semana, dos saltos por la mañana entre las 9:00 y las 11:00 h, con una diferencia de 10 a15 minutos cada uno. Se obtuvieron en total 17 muestras de cada carnero.
Se analizaron las siguientes variables seminales: Volumen (VOL) en mL, pH, Color (Evans y Maxwell, 1990), Concentración (número de espermatozoides x10⁶/mL), Motilidad Masal (escala: 0-5), Motilidad Individual (escala: 0-5), Motilidad Progresiva (escala: 0-5), Mortalidad (%) y Morfología.
Todas las evaluaciones fueron realizadas por una misma persona para disminuir el error de lectura. El protocolo de colecta de semen con vagina artificial y el manejo general de los animales forman parte de una tesis de doctorado, aprobada por la Comisión de Bioética de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de Rosario, Resol. CD N° 126/16.
Para las variables volumen y concentración se obtuvieron los promedios y errores estándar de todas las extracciones. Se probó si existían diferencias significativas entre ambos carneros mediante la aplicación de análisis de varianza simple. Se utilizó JMP versión 5.0 para Windows (JMP®, SAS Institute, 2003) para el análisis estadístico. Para las variables color, motilidad, mortalidad y morfología se realizaron análisis descriptivos.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El pH de los eyaculados de ambos carneros mostró el mismo comportamiento durante el transcurso de la patología, que varió de 7,3 antes del tratamiento y en su recuperación, a 6,1 en el momento más crítico de la infección. El color del semen en la primera extracción fue blanco-lechoso, para luego cambiar desde la segunda hasta la decimotercera extracción a los colores grises y marrones indicando contaminación, para volver a la normalidad a partir de la decimocuarta muestra. En cuanto al volumen de los eyaculados, se observó que Sambo produjo un volumen promedio mayor que Justin (1,15 ± 0,19 mL y 1,00 ± 0,15 mL, respectivamente), mostrando diferencias significativas (P ≤ 0,05) (Fig. 1). Cuando se comparó el volumen de cada eyaculación también se encontraron diferencias significativas, a excepción de tres muestreos (9, 11 y 13) en donde fueron similares. Al evaluar el volumen de los eyaculados de cada individuo, durante el tratamiento se notó un descenso significativo, fue recuperándose el volumen a partir del muestreo 13.
Fig. 1 Volumen promedio del eyaculado (mL) de los dos carneros de pelo para los dos saltos en los diferentes muestreos
La concentración de los eyaculados de Sambo fue de 2729±494 x106/ mL, existiendo una ligera variación respecto a los de Justin 2819±494 x106/ mL, no existiendo diferencias significativas (P ≥ 0,05) (Fig. 2).
Fig. 2 Concentración x 106 /mL de los dos carneros de pelo para los dos saltos en los diferentes muestreos
En las Fig. 3yFig. 4 se observa que los eyaculados de ambos carneros mostraron el mismo comportamiento en la motilidad masal, individual y progresiva, que resultaron afectadas desde la segunda extracción hasta la décima, a partir de la cual lentamente comenzaron a recuperar sus valores normales.
Fig. 3 Valores de Motilidad masal (0-5), individual (0-5) y progresiva (0-5) de Justin durante las extracciones
Fig. 4 Valores de motilidad masal (0-5), individual (0-5) y progresiva (0-5) de Sambo durante las extracciones
Ambos carneros mostraron el mismo comportamiento con respecto al porcentaje de viabilidad espermática, tal es así que gráficamente se superponen, antes del inicio del tratamiento Sambo tenía el 2 % de viabilidad y Justin el 5 % de viabilidad. Ambos carneros aumentaron su mortalidad al 100 % hasta la séptima extracción, para luego comenzaron a recuperar lentamente los valores normales a partir de la octava extracción hasta llegar a la última extracción con los valores de inicio (Fig. 5). Así mismo, se observó que el porcentaje de alteraciones morfológicas en las colas de los espermatozoides mostró un idéntico comportamiento.
El volumen de los eyaculados fue similar al descripto por Maza Gamboa et al. (2015) para individuos de la raza Pelibuey con una condición corporal, pesos similares y levemente inferior al descripto por Carrillo-González y Hernández (2016) para ovinos criollos en Colombia. De la misma manera, las concentraciones espermáticas halladas en la primera muestra y en los últimos eyaculados coinciden con las reportadas por Maza Gamboa et al. (2015), pero resultaron superiores a las descriptas para carneros de raza criolla (Carrillo-González y Hernández, 2016).
En concordancia con descripto por Alves et al. (2016) y por Escobar et al. (2019), el aumento de la temperatura a nivel testicular, independientemente del origen de la hipertermia, genera disminuyen la calidad seminal, particularmente en cuanto a concentración y la motilidad espermática. Estos autores reportaron que la recuperación a valores normales se entre los 35 y 62 días post hipertermia, en forma coincidente con la duración de la espermatogénesis en las especies evaluadas. En el presente trabajo se vieron afectados también el pH, volumen promedio de los eyaculados y viabilidad. La normalización se observó alrededor de los 50 días, hecho que coincide con la espermatogénesis del carnero, que es de alrededor de 49 días (Hafez y Hafez, 2013).
Los hallazgos en este trabajo coinciden también por lo descripto por Cisale et al. (1999), quienes observaron la restauración de la calidad de los eyaculados luego de 8 a 18 meses post tratamiento en dos carneros afectados por miasis escrotales con evolución crónica. En este caso, la afección a nivel del parénquima testicular fue mucho más marcada, con proliferación fibrosa del tejido intersticial.
Asimismo, el deterioro de los parámetros seminales evaluados podría deberse no sólo a los procesos inflamatorios y febriles observados sino también a la implementación de una antibioticoterapia sistémica. En este sentido, los resultados coinciden con los descriptos por Sinha et al. (2012), quienes observaron una normalización de la calidad seminal aproximadamente a los 47 días de la administración sistémica de los agentes antimicrobianos, en forma coincidente con la espermatogénesis.
Es importante destacar que los otros tres carneros de raza Blackbelly que forman parte de la majada del CIPCA fueron sometidos al mismo régimen de extracción de semen y que ninguno de ellos presentó alteraciones en la calidad seminal (datos no mostrados). Este hecho nos permite descartar que las alteraciones observadas en las muestras de Sambo y Justin fuesen producto de estresores ambientales como elevadas temperaturas, humedad relativa ambiente y lluvias normales en ambientes tropicales (Lozano-Marquez, 2016, Bossois Moura et al., 2019).
CONCLUSIONES
En los dos casos clínicos presentados se observó el mayor impacto sobre la calidad seminal en las primeras 7 a 8 muestras viéndose afectados todos los parámetros analizados, en coincidencia con la duración del ciclo de la espermatogénesis. Si bien no se realizó la identificación del agente etiológico, el tratamiento farmacológico implementado fue adecuado ya que en ambos casos permitió la curación de los individuos, lo que se reflejó no sólo en la desaparición de signos y síntomas a nivel sistémico, sino también en la recuperación de la calidad espermática.
