Rev Cubana Med Trop 1996;48(2):136-137

Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí"

Clasificación en subgrupos de cepas del virus sincitial respiratorio aisladas de un brote en Ciudad de La Habana

Lic. DANAY CHACON, Dr. ANGEL VALDIVIA, Dr. ANGEL GOYENECHEA, Dr. ISABEL OROPESA y Lic. CLARA SAVON

RESUMEN

Se detectó un alto número de casos de enfermedades respiratorias agudas en niños menores de 1 año, ingresados en un hospital de Ciudad de La Habana. De 93 pacientes estudiados se obtuvieron 25 cepas del virus sincitial respiratorio. Los aislamientos virales fueron multiplicados en células HEP-2, y después de observarse un efecto citopático del 80 % se clasificaron en subgrupos por la técnica de inmunofluorescencia indirecta, utilizando anticuerpos anti-proteína G del virus sincitial respiratorio. Todas las muestras estudiadas se clasificaron dentro del subgrupo A. Este tipo de estudio es el primero realizado en nuestro país, lo cual nos permitió profundizar en la causa viral de estas enfermedades y conocer que durante el brote circuló el subgrupo A del virus sincitial respiratorio.

Palabras clave: INFECCIONES DEL TRACTO RESPIRATORIO; TECNICA DEL ANTICUERPO FLUORESCENTE/métodos; VIRUS SINCITIAL RESPIRATORIO HUMANO/aislamiento y purificación; VIRUS SINCITIAL RESPIRATORIO HUMANO/clasificación.

El virus sincitial respiratorio (VRS) es la causa más importante de infecciones del tracto respiratorio en niños pequeños.¹ Las enfermedades agudas más frecuentes asociadas a la infección por este virus son la bronquiolitis y la neumonía.

Los aislamientos virales han sido clasificados dentro de 2 subgrupos A y B, sobre la base de sus reacciones con anticuerpos monoclonales.² Las diferencias antigénicas entre las cepas de ambos subgrupos se detectan fundamentalmente en la proteína G de la envoltura.³ Se ha observado que dicho virus manifiesta una amplia distribución mundial,⁴ y Cuba no está exenta de esta problemática. En nuestro país existen estudios que esclarecen la estacionalidad de este virus, se ha podido determinar la existencia de períodos cortos de 7 a 12 meses, y períodos largos de 7 a 18 meses durante el otoño, invierno y primavera.⁵

De octubre de 1994 a febrero de 1995, ocurrió un brote por VRS en niños entre 1 semana y 1 año de edad con diagnóstico clínico de enfermedades respiratorias agudas. Veinticinco aislamientos de VSR previamente obtenidos en el laboratorio a partir de las muestras (exudados nasofaríngeos) tomadas a los niños ingresados en el Hospital Pediátrico "William Soler", fueron inoculadas en frascos de 25 cm² con células HEP-2,⁶ en medio MEM suplementado con suero de ternera fetal al 2 %, antibiótico (penicilina 100 m/mL, estreptomicina 100 mg/mL), y anfotericina B (2,5 mg/mL) como antimicótico. Los aislamientos virales se inocularon a razón de 500 mL por frasco. Las células fueron observadas diariamente y se determinó la aparición de efecto citopático (ECP) característico entre los días 3 y 5 después de la inoculación, se realizaron cambios de medio según lo requirieron las condiciones del cultivo.

Cuando las células presentaron el ECP esperado, fueron desprendidas de forma mecánica y transferidas a viales, posteriormente fueron centrifugadas 10 minutos a 1 500 r.p.m. Al precipitado de células obtenido se le realizó la técnica de inmunofluorescencia indirecta según el método descrito por Gadner y Mc Quillian,⁷ se utilizaron anticuerpos monoclonales contra regiones de la proteína G (021/1G, 021/19G, 021/68G, 021/78G)^7,8 donados gentilmente por el profesor J. Antonio Melero del Instituto Carlos III, de Majadahonda, España.

El 100 % de las cepas estudiadas se clasificó dentro del subgrupo A mostrando el predominio de éste en los aislamientos obtenidos de niños ingresados en el Hospital Pediátrico "William Soler". Estos datos coinciden con lo reportado por Cane y Pringle,⁹ los cuales realizaron estudios de clasificación en subgrupos de cepas del VSR, aisladas de diferentes regiones del mundo (Inglaterra, EE.UU., Malasia y Ecuador) el subgrupo A fue el más representativo en los aislamientos.

En nuestro país éste es el primer estudio que se realiza dirigido a determinar subgrupos en cepas aisladas de un brote de VSR, pensamos que la continuidad de este tipo de trabajo será útil e importante al brindar un mayor conocimiento de la circulación del VSR, como agente causal de enfermedades respiratorias agudas, y lograr así una mayor profundización en cuanto al comportamiento epidemiológico de este virus en Cuba.

SUMMARY

A high number of acute respiratory diseases was detected among children under one year admitted in a hospital of Havana City. 25 respiratory syncytial virus strains were obtained from 93 patients studied. Viral isolations were multiplied in HEP-2 cells and after observing a cytopathic effect of 80 %, they were classified into subgroups by the indirect immunofluorescence technique, using anti-protein G antibodies from the respiratory syncytial virus. All the samples studied were classified within subgroup A. It is the first time a study like this is conducted in our country, which allowed us to deepen into the viral cause of these diseases and to know that the subgroup A of the respiratory syncytial virus circulated during the outbreak.

Key words: RESPIRATORY TRACT INFECTIONS; FLUORESCENT ANTIBODY TECHNIQUE/methods; RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS, HUMAN/isolation and purification; RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS, HUMAN/classification.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. McIntosh K, Chyanock RM. Respiratory syncytial virus. En: Fields BM, Knipe DM. Virology. 2 ed. New York: Raven Press, 1990:1045-66.
2. Anderson LJ, Heirholzer JC, Tsou C, Hendry RM, Fernie BN, Stone Y, et al. Antigen characterization of respiratory syncytial virus strains whith monoclonal antibodies. J Infect Dis 1985;151:626-33.
3. Mufson MA, Orvell C, Rafnar B, Norrby E. Two distinct subtypes of human respiratory syncytial virus. J Gen Virol 1985;66:2111-24.
4. Been M. Repeated infections with respiratory syncytial virus. J Inmunol 1967;98:1115-22.
5. Goyenechea A, Bello M, Clua A, Savón C, Díaz O, Hernández B. Determinación de anticuerpos fijadores de complemento al virus syncytial respiratorio: estudio longitudinal de una población menor de 1 año en Ciudad de La Habana. Rev Cubana Med Trop 1994;46:79-85.
6. American Type Culture Collection. Catalogue of cell lines and hibridomas. 7 ed. Maryland, 1992:47.
7. Gadner PS, Mc Quillian B. Application of immunofluorescence antibody technique in the rapid diagnosis of respiratory syncytial virus infection. Med J 1986;3:340.
8. García Barrera B, Palomo C, Delgado T, Pérez-Breña P, Melero JA. Marked differences in the antigenic structure of human respiratory syncytial virus F and G glicoproteins. J Virol 1989;63:925-32.
9. Cane PA, Pringel CR. Molecular epidemiology of respiratory syncytial virus: rapid identification of subgroup A lineages. J Virol Methods 1992;40:297-306.

Recibido: 24 de enero de 1996. Aprobado: 26 de abril de 1996.

Lic. Danay Chacón. Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí". Apartado 601, Marianao 13, Ciudad de La Habana, Cuba.

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