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Vaccimonitor
versión On-line ISSN 1025-0298
Resumen
MARRERO-DOMINGUEZ, Karen; LEDON-PEREZ, Talena y FANDO-CALZADA, Rafael. Desarrollo de un ensayo de PCR para detectar los genes codificadores de la toxina del cólera (ctxAB) en preparaciones del candidato vacunal vivo atenuado CV638 contra el cólera. Vaccimonitor [online]. 2016, vol.25, n.2, pp. 30-36. ISSN 1025-0298.
El candidato vacunal vivo oral atenuado CV638 se produce siguiendo los criterios de las guías de Buenas Prácticas de Producción específicas para vacunas. El ingrediente activo de este candidato vacunal es la cepa atenuada genéticamente Vibrio cholerae 638; desarrollada por investigadores del Centro Nacional de Investigaciones Científicas de Cuba (CNIC), a partir de la cepa toxigénica de V. cholerae serogrupo O1, biotipo El Tor C7258, (Perú, 1991), mediante la remoción de los genes que codifican la producción de la toxina del cólera (ctxAB). Dado que la cepa 638 carece de estos genes en su genoma, la presencia de ctxAB en las preparaciones vacunales estaría dada por una contaminación con una cepa toxigénica de V. cholerae. El presente estudio tuvo como objetivo desarrollar un PCR específico para detectar los genes ctxAB a partir de ADN aislado de preparaciones del candidato vacunal CV638 contaminado artificialmente con V. cholerae toxigénico. La sensibilidad del ensayo de PCR empleando como molde ADN de la cepa toxigénica fue de 1 picogramo (pg) de ADN genómico por reacción, correspondiente a ~200 copias del genoma de la bacteria. La sensibilidad del método de PCR para detectar cepas toxigénicas en preparaciones vacunales de la cepa 638, contaminadas con una cepa toxigénica fue de ~7 x 103 unidades formadoras de colonia (UFC) de la cepa toxigénica por dosis del candidato vacunal CV638. Este método, una vez validado, pudiera emplearse en el control de la calidad de la producción del candidato vacunal vivo CV638.
Palabras clave : V. cholerae 638; vacunas; toxina del cólera; PCR.