Resumen

GUISADO-BOURZAC, Frenkel et al. Obtención de un soporte de afinidad para la purificación de fosfolipasas A₂. Rev Cub Quim [online]. 2016, vol.28, n.2, pp. 595-609. ISSN 2224-5421.

El objetivo de la presente invención es la síntesis de un soporte de afinidad con un fosfolípido inmovilizado (fofatidilcolina de yema de huevo inmovilizada a un gel amino) como ligando para la purificación de fosfolipasas A₂. La Sepharose CL-4B fue activada, oxidada y aminada. La fosfatidilcolina fue inmovilizada covalentemente controlándose mediante la determinación de fosfatos en los materiales de partida y los lavados. La validez de los soportes cromatográficos obtenidos se verificó mediante la purificación de fracciones con actividad fosfolipásica provenientes de las anémonas marinas Condylactis gigantea y Stichodactyla helianthus, así como del veneno de la serpiente Crotalus durisus terrificus. Se obtuvieron perfiles de elución con un máximo típico para este procedimiento y tipo de enzima. La actividad fosfolipásica A₂ se verificó cualitativamente a través de una TLC luego de la incubación de los picos obtenidos frente a la fosfatidilcolina purificada y a un sustrato fluorescente: 1-palmitoil-2-NBD-C12-PC.

Palabras clave : cromatografía de afinidad; fosfolipasa A₂; inmovilización de fosfatidilcolina de yema de huevo inmovilizada; anémona de mar; gel amino.

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