INTRODUCCIÓN
Rhipicephalus microplus Canestrini es considerado el ectoparásito más importante del ganado bovino a nivel mundial, por las pérdidas que ocasiona y su gran capacidad de adaptación y propagación en regiones tropicales y subtropicales con diferencias en su comportamiento biológico (Valdez et al., 2014; Yessinou et al., 2016). Provoca lesiones locales que deterioran la piel y propician infecciones por microorganismos, pérdidas de sangre, daños por toxinas provocadas por el parásito y transmisión de enfermedades (Nápoles et al., 2013).
El principal método de control de las garrapatas se basa en la aplicación de acaricidas químicos sobre las diferentes fases de vida parasitaria de estos hematófagos (Balladares et al., 2014; Moncada et al., 2015). El uso indiscriminado de estos productos químicos ha generado consecuencias desfavorables y efectos secundarios sobre el medio ambiente, los animales y el hombre y además, podrían inducir resistencia química o tolerancia en algunas poblaciones de garrapatas (Domínguez et al., 2016).
En Cuba, se ha generalizado el método de control integrado contra R. microplus, que incluye la inmunización con la vacuna GAVAC y los baños con acaricidas; no obstante, existen informes de resistencia desarrollada frente a los acaricidas de síntesis, por lo que se hace necesario replantear las estrategias utilizadas para su control. Las estrategias incluyen la aplicación de vacunas antigarrapatas y hongos entomopatógenos (Nápoles et al., 2013).
Los hongos constituyen los agentes de control biológico más versátiles debido al amplio rango de hospedantes y su distribución cosmopolita (Rai et al., 2014). La especie de Metarhizium anisopliae sensu lato (Metsch) Sorokin, es considerado como la segunda con la que más se ha trabajado en todo el mundo en relación con su producción masiva y comercialización como bioplaguicidas (Jitendra et al., 2012). Ha sido informada como patogénica sobre R. microplus bajo condiciones de laboratorio y de campo (Veríssimo, 2013; Valdez et al., 2014).
Teniendo en cuenta lo anterior se propuso la realización del presente trabajo con el objetivo de determinar la eficacia in vitro sobre huevos y neolarvas de R. microplus del aislado Ma-005 de M. anisopliae s. l.
MATERIALES Y MÉTODOS
El trabajo se realizó en el laboratorio de Sanidad Vegetal de la Facultad de Agronomía donde se conserva el aislado de M. anisopliae (Ma-005) obtenido de muestras de suelo en un campo cultivado de frijol (Phaseolus vulgaris L) de la finca “El Guayabal” ubicada en el municipio San José de las Lajas, provincia Mayabeque. Además, se utilizó como control Lecanicillium lecanii Zare y Gams, cepa Y-57 (Ll) a una concentración de 1,6 x 108 conidios x mL-1, utilizada en los Centros de Reproducción de Entomófagos y Entomopatógenos (CREE).
Eficacia biológica del aislado Ma-005 de M. anisopliae sobre huevos de R. microplus
Para el ensayo se recolectaron hembras ingurgitadas de R. microplus de vacas de la raza Holstein en la finca “El Jobo” en la provincia Artemisa, municipio Caimito, que no habían recibido tratamiento biológico. En el laboratorio, las garrapatas se colocaron en placas de Petri hasta la puesta de los huevos, pasado de cinco a siete días fueron inoculados por inmersión durante un minuto en suspensiones conidiales del aislado Ma-005 de M. anisopliae con las concentraciones siguientes: 1,1x108, 1,1x107, 1,1x106, 1,1x105 ,1,1x104 y 1,1x103 conidios mL-1, y con L. lecanii cepa Y-57 a una concentración de 1,6 x 108 conidios mL-1, posteriormente se colocaron de 20 a 25 de ellos en frascos de vidrio de 30 mL tapados con cinta de laboratorio (Parafilm “M”®) perforada con una fina aguja para permitir el intercambio gaseoso.
A los 30 días se evaluó el número de huevos eclosionados y determinó el porcentaje de los mismos. Se utilizó un diseño completamente aleatorizado con ocho tratamientos y cuatro repeticiones. Los resultados obtenidos fueron transformados según la expresión asen (p)½ y procesados mediante un análisis de varianza de clasificación simple comparándose las medias a través de la prueba de Tukey con un nivel de significación del 5 % (SAS Institute, 2009).
Eficacia biológica del aislado Ma-005 de M. anisopliae sobre neolarvas de R. microplus
Los procedimientos utilizados para el montaje, incubación y procesamiento de los datos fueron similares a los descritos en el ensayo anterior, excepto que las neolarvas tenían de siete a 10 días y la evaluación del porcentaje de mortalidad se realizó a los siete y 14 días. El criterio de mortalidad de dichas neolarvas fue que al ser estimuladas con un pincel no se movían.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Eficacia biológica del aislado Ma-005 de M. anisopliae sobre huevos de R. microplus
El análisis estadístico realizado muestra diferencias altamente significativas entre los tratamientos El menor porcentaje de huevos eclosionados se registró en la mayor concentración del aislado Ma-005 a 1,1 x108 conidios mL-1 obteniendo un valor 9,93% no difiriendo de la cepa de L. lecanii a la concentración de 1,6 x108 conidios mL-1 con un valor de 10,41%, el mayor porcentaje de huevos eclosionados se evidenció en la menor concentración del aislado Ma-005 sin diferencias significativas con el control (Tabla 1).
Alemán et al. (2015) demostraron que los hongos utilizados causan mortalidad en las diferentes fases evolutivas del ectoparásito, y ocasionan una disminución de la tasa de eclosión en los huevos parasitados. También, Narladkar et al. (2015) informaron el gran efecto ovicida de M. anisopliae.
Eficacia biológica del aislado Ma-005 de M. anisopliae sobre neolarvas de R. microplus
Los análisis estadísticos muestran que existen diferencias altamente significativas en los momentos evaluados. En la Tabla 2, se observa que a los siete días la mortalidad es mayor en la concentración más alta de 1,1x108 del aislado Ma-005 obteniéndose un 55,76 %, no difiriendo de la cepa de L. lecanii a una concentración de 1,6 x 108 con valor de 57,21 % de mortalidad y difiriendo sobre el resto de los tratamientos de 107 a 103. El menor porcentaje de mortalidad se evidenció en la menor concentración sin diferencia con el control. A los 14 días, con resultados similares se evidencia que la mayor concentración de M. anisopliae de 108 no mostró diferencias en la concentración siguiente y la cepa de L. lecanii, pero si difiriendo de los restantes tratamientos, por otra parte, el porcentaje menor de mortalidad se evidenció en la concentración más baja del aislado Ma-005, sin diferencia respecto al control.
Concentración (conidios mL-1) | Huevos eclosionados (%) | |
---|---|---|
X orig. | X. transf. | |
Control | 97,04 | 0,5167 a |
Ll 1,6 x 108 | 10,41 | 0,2692 f |
Ma-005 1,1 x 108 | 9,93 | 0,2672 f |
Ma-005 1,1 x 107 | 28,23 | 0,3319 e |
Ma-005 1,1 x 106 | 45,32 | 0,3841 d |
Ma-005 1,1 x 105 | 58,91 | 0,4220 c |
Ma-005 1,1 x 104 | 71,97 | 0,4557 b |
Ma-005 1,1 x 103 | 91,39 | 0,5033 a |
C.V. (%) | 4,56 | |
ESx | 0,009*** |
Medias con letras iguales, no difieren significativamente, según Tukey (p≤ 0,05)
Sobre los huevos y neolarvas infectados se desarrolló un micelio profuso, de color blanco que con el proceso de esporulación se tornaron de color verde oliváceo.
Los resultados obtenidos concuerdan con Lonc et al. (2014) que refieren que las mayores concentraciones de hongos entomopatógenos poseen una mayor cantidad de conidios que se adhieren a la cutícula de la garrapata aumentando la probabilidad de que propágulos infectivos penetren y se multipliquen dentro del cuerpo de estas ocasionándoles daño, deficiencias nutricionales o liberación de toxinas que disminuyan la supervivencia. Rodríguez et al. (2014) demuestran buenos resultados sobre larvas y huevos de R. microplus utilizando M. anisopliae.
Concentración (conidios mL-1) | Mortalidad (%) | |||
---|---|---|---|---|
7 días | 14 días | |||
X orig. | X. transf. | X orig. | X. transf. | |
Control | 0,00 | 0,2255 e | 4,36 | 0,2444 e |
Ll 1,6 x 108 | 57,21 | 0,4162 a | 80,27 | 0,4760 a |
Ma-005 1,1 x 108 | 55,76 | 0,4125 a | 81,80 | 0,4803 a |
Ma-005 1,1 x 107 | 38,57 | 0,3643 b | 69,52 | 0,4496 ab |
Ma-005 1,1 x 106 | 30,95 | 0,3400 bc | 52,69 | 0,4047 bc |
Ma-005 1,1 x 105 | 21,00 | 0,3075 c | 43,75 | 0,3789 c |
Ma-005 1,1 x 104 | 10,75 | 0,2705 d | 38,59 | 0,3611 c |
Ma-005 1,1 x 103 | 6,30 | 0,2524 de | 21,07 | 0,3083 d |
C.V. (%) | 6,92 | 8,35 | ||
ESx | 0,011*** | 0,016*** |
Medias con letras iguales, dentro de cada columna, no difieren significativamente, según Tukey (p≤ 0,05