Comunicación breve

Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí"

Identificación de Cryptococcus neoformans var. neoformans en aislamientos clínicos cubanos

Lic. Carlos M. Fernández Andreu,¹Dr. Gerardo Martínez Machín,²Dra. María Teresa Illnait Zaragozí,³Lic. Mayda Perurena Lancha⁴ y Lic. Mario González Miranda⁵

RESUMEN

Mediante la utilización del medio de canavanina-glicina-azul de bromotimol (CGB), se estudiaron 50 cepas de Cryptococcus neoformans de origen clínico. El 56 % de las cepas se aisló de pacientes con sida y el 16 % pertenecía a pacientes sometidos a transplante renal. El 90 % de las cepas se obtuvo a partir de muestras de líquido cefalorraquídeo, lo que se corresponde con la forma clásica de presentación de la criptococosis. Todas las cepas se identificaron como C. neoformans var. neoformans, lo que coincide con reportes anteriores realizados en Cuba. Con el conocimiento de las variedades de C. neoformans se pueden hacer inferencias sobre la epidemiología, la clínica y la respuesta al tratamiento de la criptococosis.

Descriptores DeCS: CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS/aislamiento & purificación; SINDROME DE INMUNODEFICIENCIA ADQUIRIDA/líquido cefalorraquídeo; TRANSPLANTACION DE RIÑON; AZUL DE BROMOTIMOL; CUBA.

Con el aumento del número de casos de criptococosis al nivel mundial, especialmente causado por su asociación con el sida, se ha incrementado también el interés en profundizar en el conocimiento de su agente causal, la levadura encapsulada Cryptococcus neoformans. En la actualidad se conocen 2 variedades de esta especie, C. neoformans var. neoformans y C. neoformans var. gattii, las cuales presentan propiedades bioquímicas, serológicas y ecológicas que permiten diferenciarlas entre sí.1,2

En 1982, Kwon-Chung y otros propusieron un medio de cultivo que permitía la diferenciación de ambas variedades con alta especificidad, se basaba en la capacidad de la variedad gattii de resistir y crecer en presencia de L-canavanina y utilizar la glicina como una única fuente de carbono.3 Desde entonces, este medio de cultivo, conocido como CGB (canavanina-glicina-azul de bromotimol), ha sido empleado por diferentes autores para la diferenciación sencilla y específica de las 2 va-riedades.2,4,5

Mediante la utilización de este medio, fueron estudiadas 50 cepas de C. neoformans aisladas de pacientes hospitalizados en diferentes centros asistenciales del país en el período comprendido entre 1986 y 1996. Estas cepas habían sido identificadas previamente hasta el nivel de especie por la presencia de cápsula, producción de ureasa y fenoloxidasa, asimilación de inositol, no fermentación de carbohidratos, ausencia de filamentos en agar harina de maíz y crecimiento a 37 ^oC.1

Del total de cepas, 28 (56 %) procedían de pacientes con sida, 8 (16 %) de receptores de transplantes renales y 14 (28 %) de pacientes con otras enfermedades de base no precisadas. El 74 % fue aislado a partir de 1990, lo que está muy en relación con el desarrollo de la epidemia del virus de la inmunodeficiencia humana en Cuba. El líquido cefaloraquídeo fue la muestra a partir de la cual se aisló el 90 % de las cepas, tanto en los pacientes con sida comoen el resto de los enfermos (tabla).

Tabla. Procedencia de las cepas estudiadas

		Pacientes con sida		Pacientes con transplante renal		Otros pacientes
Año	No.	LCR	Otras muestras	LCR	Otras muestras	LCR	Otras muestras
1986-1989	13	1	-	5	-	5	2a
1990	2	-	-	1	-	1	-
1991	3	-	-	-	-	3	-
1992	8	6	-	2	-	-	-
1993	7	6	1b	-	-	-	-
1994	4	3	-	-	-	1	-
1995	4	3	1c	-	-	-	-
1996	9	6	1d	-	-	2	-
Total	50	25	3	8	-	12	2

a: Piel y meninges; b: lavado broncoalveolar; c: orina; d: sangre.

LCR: Líquido cefalorraquídeo.

El medio CGB fue preparado según Kwon-Chung y otros.3 La prueba se consideró positiva al producirse un cambio de color amarillo (pH 5,8) a azul intenso (pH 7,0) en el medio de cultivo inoculado, en los primeros 5 d de incubación a 28 ^oC. Se emplearon como controles cepas de referencia de C. neoformans var. neoformans y C. neoformans var. gattii.

Todas las cepas estudiadas fueron identificadas como C. neoformans var. neoformans al no producirse ningún cambio de color en el medio.

Hasta el presente todas las cepas de C. neoformans identificadas en Cuba pertenecen a la variedad neoformans. A diferencia de otros estudios realizados anteriormente con cepas cubanas,6,7 en el presente trabajo, 28 de las cepas procedían de pacientes con sida. Se ha señalado que el 99 % de los casos de criptococosis en pacientes con sida tiene como agente causal a C. neoformans var. neoformans. En la literatura médica mundial sólo habían sido reportados 8 casos causados por la variedad gattii; sin embargo, en fecha reciente fueron informados otros 7 casos, australianos.8 Esta última variedad muestra una marcada predilección por el huésped inmunocompetente, por lo que ha sido señalado su carácter de verdadero patógeno más que de un patógeno oportunista.4

La L-canavanina actúa como un inhibidor metabólico de aquellas enzimas que contienen L-arginina, altera sus estructuras terciarias y cuaternarias, y por consiguiente la actividad biológica de tales proteínas. De esta forma, la L-canavanina resulta tóxica para una gran variedad de microorganismos. Pero, la resistencia de C. neoformans var. gattii se ha atribuido a la presencia de un sistema capaz de degradar la L-canavanina y convertirla en compuestos no tóxicos.9

La identificación de las variedades de C. neoformans puede convertirse en una útil herramienta para conocer las posibles fuentes de infección. El hábitat natural de C. neoformans var. neoformans desde hace muchos años ha estado asociado con palomares u otros lugares donde haya acumulación de excretas de aves. Sin embargo, recientemente se ha podido confirmar la presencia de esta variedad en huecos de troncos de árboles con evidente degradación de la lignina, lo que pudiera modificar los conocimientos actuales de la epidemiología de esta micosis.10 Por otra parte, sólo a partir de 1990 se ha podido conocer la relación de C. neoformans var. gattii con material vegetal vinculado con diferentes especies de Eucaliptus.11

C. neoformans var. neoformans, a diferencia de C. neoformans var. gattii, es sensible a la L-canavanina y a bajas concentraciones de cicloheximida; es incapaz de utilizar la glicina como única fuente de carbono e incapaz de utilizar la D-prolina y el D-triptófano como fuentes nitrogenadas.1 La variedad neoformans agrupa a los serotipos A y D, mientras que a la variedad gattii pertenecen los serotipos B y C. Los estados perfectos o sexuales de ambas variedades son Filobasidiella neoformans (C. neoformans var. neoformans) y F. bacillispora (C. neoformans var. gattii). C. neoformans var. neoformans tiene una amplia distribución geográfica, mientras que la variedad gattii se limita a algunas zonas tropicales y subtropicales.1

Además de las diferencias bioquímicas, serológicas y ecológicas, con sus implicaciones epidemiológicas, entre las variedades de C. neoformans existen importantes diferencias clínicas relacionadas con la patogenicidad de la cepa y la respuesta al tratamiento,4 todo lo cual hace que la determinación de estas variedades se convierta en una necesidad actual de los laboratorios de micología médica.

SUMMARY

50 strains of Cryptococcus neoformans of clinical origin were studied by using the canavanine-glycine-bromothymol blue (CGB) medium. 56 % of the strains were isolated from AIDS patients, and 16 % belonmged to patients with kidney transplantation. 90 % of the samples were obtained from the samples of cerebrospinal fluid, which corresponded to the classical form of presentation of cryptococcosis. All the strains were identified as C. neoformans var. neoformans, coincidings with previous reports made in Cuba. Knowing the varieties of C. neoformans, inferences can be drawn on the epidemiology, clinics and response to the treatment of criptococcosis.

Subject headings: CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS/isolation & purifications; ACQUIRED IMMUNODEFICIENCY SYNDROME/cerebrospinal fluid; KIDNEY TRANSPLANTATION; BROMOTHYMOL BLUE; CUBA.

Referencias Bibliográficas

1. Mitchell TG, Perfect JR. Cryptococcosis in the era of AIDS-100 years after the discovery of Cryptococcus neoformans. Clin Microbiol Rev 1995;81(4):515-48.
2. Kwon-Chung KJ, Peiffer T, Chang YC, Wickes BL, Mitchell D, Stern JJ. Molecular biology of Cryptococcus neoformans and therapy of cryptococcosis. J Med Vet Mycol 1994;32(Suppl 1):407-15.
3. Kwon-Chung KJ, Polacheck I, Bennett JE. Improved medium for separation of Cryptococcus neoformans var. neoformans (serotypes A and D) and Cryptococcus neoformans var. gattii (serotypes B and C). J Clin Microbiol 1982;15:535-7.
4. Speed B, Dunt D. Clinical and host differences between infections with the two varieties of Cryptococcus neoformans. Clin Infect Dis 1995;21:28-34.
5. Ellis D, Pfeiffer T, Ruma P, Brownlee A, Chen S, Sorrell T. Distribution and frequency of C. neoformans var. gattii among the species of Eucalyptus. En: Program and Abstracts of 3rd. International Conference on Cryptococcus and Cryptococcosis; 1996 Sept 22-26; Institut Pasteur, Paris, 1996:47-8.
6. Fernández Andreu C, Martínez Machín G, Álvarez Bernald LP, Rodríguez Morales R, Álvarez Herrera C. Cryptococcus neoformans var. neoformans isolated in Havana City. Mem Inst Oswaldo Cruz 1990;85(5):245.
7. Fernández Andreu C, Martínez Machín G, Menéndez de San Pedro J, Oramas Rodríguez B. Identificación de variedades de Crytococcus neoformans mediante la utilización de medios de cultivo. Rev Cubana Med Trop 1991;43(2):100-3.
8. Marriott DJE, Speed BR, Spelman D, Shaw D, French M, Harkness JL. Cryptococcus neoformans var. gattii infection in Australian patients: a review of seven cases. En: Program and Abstracts of 3rd. International Conference on Cryptococcus and Cryptococcosis; 1996 Sept 22-26; Institut Pasteur, Paris, 1996:180.
9. Polacheck I, Kwon-Chung KJ. Canavanine resistance in Cryptococcus neoformans. Antimicrob Agents Chemother 1986;29:468-73.
10. Lazéra MS, Pires FDA, Camillo-Coura L, Nishikawa MM, Bezerra CCF, Trilles L, et al. Natural habitat of Cryptococcus neoformans var. neoformans in decaying wood forming hollows in living trees. J Med Vet Mycol 1996;34(2):127-31.
11. Ellis DH, Pfeiffer TJ. Natural habitat of Cryptococcus neoformans var. gattii. J Clin Microbiol 1990;28: 1642-4.

Recibido: 31 de enero de 1997. Aprobado: 22 de noviembre de 1997.

Lic. Carlos M. Fernández Andreu. Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí". Apartado 601, Marianao 13, Ciudad de La Habana, Cuba.

1. Licenciado en Microbiología. Investigador Auxiliar.
2. Especialista en Microbiología. Investigador Agregado.
3. Especialista en Microbiología.
4. Licenciada en Microbiología. Aspirante a Investigadora.
5. Licenciado en Microbiología.