Instituto de Hematología e Inmunología

Alteraciones de la solubilización e inhibición de la precipitación
de inmunocomplejos en la anemia drepanocítica

Lic. Julio C. Merlín Linares, Lic. Rinaldo Villaescusa Blanco, Lic. Ada A. Arce Hernández, Lic. Ana M. Guerreiro Hernández y Dr. Edgardo Espinosa Martínez

Resumen

Se estudiaron los fenómenos de solubilización e inhibición de la precipitación de inmunocomplejos en un grupo de 39 pacientes con anemia drepanocítica en crisis hepática (13) y en estado basal (26), utilizando como modelo el complejo125 I-toxoide tetánico/anti-toxoide tetánico. La inhibición de la precipitación estuvo disminuida en la crisis hepática y en el estado basal, con valores normales de la actividad hemolítica de la vía clásica y de los niveles séricos del C4, mientras que la disminución de la solubilización en la crisis hepática estuvo relacionada con una disminución de la actividad hemolítica de la vía alternativa, la actividad hemolítica del factor B y los niveles del componente C3, y con un aumento de los inmunocomplejos circulantes. Nuestros resultados sugieren la posible utilidad de estos mecanismos para evaluar otras funciones del complemento, no detectadas mediante una determinación de la actividad hemolítica, como medida de la función de las vías clásica y alternativa.

DeCS: ANEMIA DE CELULAS FALCIFORMES/inmunología; COMPLEMENTO; VIA ALTERNATIVA DEL COMPLEMENTO; VIA CLASICA DEL COMPLEMENTO; COMPLEJO ANTIGENO-ANTICUERPO.

La inhibición de la precipitación de inmunocomplejos (IPIC) es un fenómeno que depende fundamentalmente de la integridad funcional de la vía clásica del complemento, especialmente en su etapa inicial.1-4 El fenómeno de la solubilización de inmunocomplejos (SIC) por el suero depende principalmente de la integridad funcional de la vía alternativa,5-7 aunque la vía clásica contribuye con un efecto favorecedor en la iniciación del proceso.8

Se han reportado alteraciones de la SIC, fundamentalmente en el lupus eritematoso sistémico (LES) y otras enfermedades autoinmunes.9-11 Estas alteraciones de la SIC han sido correlacionadas con los períodos activos de la enfermedad y con los niveles de inmunocomplejos circulantes, por lo que se ha propuesto la utilización de esta prueba para evaluar la función de la vía alternativa.12 Sin embargo, diversos autores han argumentado que los antígenos se unen con sus anticuerpos específicos in vivo en presencia del complemento, lo que crea las condiciones idóneas para que el fenómeno más favorecido sea el de la IPIC.4,12

La presencia de inmunocomplejos circulantes en la anemia drepanocítica (AD) ha sido reportada anteriormente.13 En un estudio seriado del complemento y los inmunocomplejos solubles circulantes en diferentes fases clínicas de la AD, se observaron niveles aumentados de los inmunocomplejos circulantes en un elevado porcentaje de los pacientes que se encontraban en crisis hepática.14

Este trabajo se realizó con el objetivo de evaluar las posibles alteraciones de la SIC y la IPIC en pacientes con AD en condiciones basales y en crisis hepática, así como determinar las relaciones de estos mecanismos con la actividad hemolítica del complemento y con los niveles de inmunocomplejos circulantes.

Métodos

Muestras: se extrajeron muestras de sangre a 26 pacientes con AD que se encontraban en condiciones basales, a 13 pacientes en crisis hepática y a 30 donantes aparentemente sanos considerados como controles. Las muestras de sangre se dejaron reposar durante 1 hora a temperatura ambiente, se centrifugaron, y los sueros fueron almacenados a -70 °C hasta su utilización.

Para la determinación de la IPIC y la SIC se utilizó como modelo el complejo formado a partir de la reacción del125 I-Toxoide tetánico(125I-TT) con una cantidad equivalente de anticuerpos de conejo anti-toxoide tetánico (anti-TT). El marcaje radioisotópico del toxoide tetánico se realizó con 125 I-NaI (Amersham) en presencia de IC1. La obtención del suero (anti-TT), así como la preparación de los complejos radiomarcados , se llevó a cabo según los procedimientos descritos anteriormente.15,16

La IPIC se determinó mediante un procedimiento consistente en hacer reaccionar el 125I-TT con una cantidad equivalente de suero anti-TT en presencia del suero problema.15 Los resultados obtenidos se expresaron como el porcentaje de inhibición de la precipitación del complejo con respecto a una mezcla de sueros normales.

La SIC se determinó mediante el procedimiento de añadir un complejo insoluble de 125 I-TT/-antiTT al suero problema.16

Los resultados obtenidos se expresaron como el porcentaje de solubilización del complejo con respecto a una mezcla de sueros normales.

La actividad hemolítica total de la vía clásica, 17 de la vía alternativa18 y del factor B12 del complemento, así como los niveles séricos de los componentes C3 y C4 del complemento, se determinaron por los métodos usuales.

Los niveles séricos de inmunocomplejos solubles circulantes se determinaron mediante la prueba de desviación del C1q radiomarcado (PD C1q) propuesta por Sobel 19 y el método de precipitación con polietilenglicol 6000 (PEG 6000) propuesto por Hasková.20

Resultados

No se apreciaron alteraciones de la actividad hemolítica de la vía clásica, ni de los niveles del complemento C4 en el grupo de pacientes con AD en crisis hepática (tabla 1). En este grupo de pacientes, se pudo observar una disminución significativa (p<0,01) de la actividad hemolítica de la vía alternativa, de la actividad hemolítica del factor B y de los niveles séricos del componente C3, así como un aumento significativo (p<0,01) de los niveles de inmunocomplejos solubles circulantes mediante la prueba de desviación del Clq (tabla 1).

TABLA 1. Complemento e inmunocomplejos en pacientes con AD en crisis hepática

Pruebas	Pacientes (N=13) Media ± DE	Controles (N=30) Media ± DE	p
Actividad hemolítica de la vía clásica (CH50)	23,2 ± 1,87	27,5 ± 6,5	NS
Niveles de C4 (g/L)	0,28 ± 0,04	0,35 ± 0,05	NS
Actividad hemolítica de la vía alternativa (%)	81,8 ± 6,8	98 ± 16	< 0,01
Actividad hemolítica del Factor B (%)	77,75 ± 7,82	100 ± 24	< 0,01
Niveles de C3 (g/L)	1,07 ± 0,15	1,52 ± 0,50	< 0,01
Prueba de desviación del C1q (% inhibición)	19,5 ± 8,6	10 ± 10	< 0,01
Precipitación con PEG 6000 (DO x 10-2)	8,4 ± 4,1	9,5 ± 3,5	NS

El grupo de pacientes que se encontraba en crisis hepática tenía disminuidas significativamente (p< 0,01) la IPIC y la SIC (tabla 2). En el grupo de pacientes que se encontraba en condiciones basales, solo se observó una disminución significativa (p< 0,01) de la IPIC (tabla 2).

TABLA 2. Inhibición de la precipitación (IPIC) y solubilización de inmunocomplejos (SIC) en pacientes con AD

Pacientes
Pruebas	En crisis hepática (N=13) Media ± DE	p	En estado basal (N=26) Media ± DE	p	Controles(N=30) Media ± DE
IPIC (%)	24,2 ± 19,53	< 0,01	60,8 ± 20,35	< 0,01	91,4 ± 8,45
SIC (%)	10,4 ± 17,29	< 0,01	47,7 ± 26,54	NS	47,1 ± 9,48

Discusión

La disminución significativa de la actividad hemolítica de la vía alternativa, de la actividad hemolítica del factor B y de los niveles séricos del componente C3, al igual que el aumento de los inmunocomplejos circulantes, observados en el grupo de pacientes con AD en crisis hepática, concuerda con lo reportado por otros autores.13-14 En este trabajo se observó además una disminución significativa de la IPIC y de la SIC en este grupo de pacientes, y de la IPIC en el grupo de pacientes que se encontraba en condiciones basales.

La dependencia de la IPIC con respecto a la actividad de la vía clásica 2-4 no pudo ser confirmada, pues la actividad hemolítica y los niveles del componente C4 se mantuvieron dentro del rango normal . De acuerdo con lo anterior, estos pacientes podrían presentar alteraciones de los componentes iniciales o alguno de los activadores o agentes de control, capaces de provocar una disminución de la IPIC, sin afectar la actividad hemolítica de esta vía. Este resultado podría constituir una evidencia de que la IPIC es capaz de reflejar alteraciones de la vía clásica que no son detectadas por la determinación de la actividad hemolítica.

Se ha reportado 5-7 que la SIC depende de la integridad de la vía alternativa, lo que se confirmó en este trabajo por la relación de la SIC con la actividad hemolítica, con los niveles de C3 y con la actividad hemolítica del factor B. Para evaluar la participación de estos 2 mecanismos en el aclaramiento de los inmunocomplejos, se debe tener en cuenta que, aunque la disminución de la IPIC pudo haber contribuido a aumentar los niveles, o a una persistencia más prolongada de los inmunocomplejos en la circulación, la disminución de la SIC en la crisis hepática concuerda con las alteraciones de la actividad de la vía alternativa y con el aumento de los inmunocomplejos circulantes observados en este grupo de pacientes. Además, en condiciones basales, la recuperación de los valores normales de la SIC observada en este trabajo, concuerda con la recuperación de los valores normales de la actividad de la vía alternativa y de los inmunocomplejos circulantes reportada anteriormente.14

A partir de los resultados obtenidos, se puede considerar que la SIC constituyó un indicador más apropiado que la IPIC para valorar las posibilidades que tienen estos pacientes de eliminar los inmunocomplejos de la circulación; a pesar de que algunos autores habían señalado que la IPIC debería reflejar mejor lo que ocurre normalmente in vivo 4,12 y que la IPIC parece ser más eficiente in vitro, es decir, que el suero fresco es capaz de inhibir la precipitación de una cantidad de inmunocomplejos15 mucho mayor que la cantidad de inmunocomplejos que puede solubilizar.16

Esta aparente contradicción podría explicarse teniendo en cuenta que el efecto de la IPIC parece tener un carácter temporal. De hecho, se ha demostrado que los complejos cuya precipitación ha sido inhibida por la vía clásica, tienden a precipitar nuevamente al cabo de cierto tiempo, y que estos precipitados pueden ser solubilizados de manera permanente a través de la vía alternativa.1,4 Los complejos que han sido solubilizados por la vía alternativa no pueden activar nuevamente el complemento, y no interactúan con receptores celulares para los fragmentos Fc,2,3 pero son capaces de unirse con los receptores celulares para el C3b21,22 para ser posteriormente fagocitados.

Por otra parte, la persistencia de los inmunocomplejos en pacientes con una actividad hemolítica normal, no debe ser atribuida a la incapacidad de estos complejos para activar el complemento, pues el complejo125 I-TT/anti TT empleado fue capaz de activar el complemento por la vía clásica y por la alternativa, lo que permitió que se obtuvieran los valores normales de la IPIC y de la SIC con el grupo control.

En este sentido, tanto la IPIC como la SIC pudieran resultar de utilidad para revelar alteraciones de otras funciones que realiza el complemento a través de las vías clásica y alternativa, respectivamente, que podrían no ser detectadas por una determinación de la actividad hemolítica.

AGRADECIMIENTOS

Para la realización de este trabajo, hemos contado con el apoyo del proyecto Programa de asistencia médica preventiva, terapéutica y de rehabilitación para pacientes con enfermedades hematológicas: hemofilia y anemia drepanocítica, auspicciado por el Centro de Informazione e Educazione allo Sviluppo (CIES), y el Ministerio de Asuntos Exteriores (MAE) de Roma, Italia.

Summary

The phenomena of solubilization and inhibition of the precipitation of immunocomplexes were studied in a group of 39 patients with sickle cell anemia in hepatic crisis (13) and in basal state (26), using as a model the tetanus toxoid/anti-tetanus toxoid complex125 I. The inhibition of the precipitation was reduced in the hepatic crisis and in the basal state with normal values of the haemolytic activity of the classical pathway and of the serum levels of C4, whereas the reduction of the solubilization in the hepatic crisis was related to a lowering of the haemolytic activity of the alternative pathway, the haemolytic activity of factor B and the levels of component C3, and to an increase of the circulating immunocomplexes. Our results suggest the possible usefulness of these mechanisms to evaluate other functions of the complement not detected by a determination of the haemolytic activity, as a measure of the function of..the classical and alternative pathways.

Subject headings: ANEMIA, SICKLE CELL/immunology; COMPLEMENT; COMPLEMENT PATHWAY, ALTERNATIVE; COMPLEMENT PATHWAY, CLASSICAL; ANTIGEN-ANTIBODY COMPLEX.

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Recibido: 26 de diciembre de 2002. Aprobado: 7 de abril de 2003.
Lic. Julio C. Merlín Linares. Instituto de Hematología e Inmunología. Apartado 8070, CP 10800, Ciudad de La Habana, Cuba. Tel [phone]. Fax [phone]. e-mail: [e-mail]