Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. Estación Experimental de Plantas Medicinales "Dr Juan Tomás Roig".

Control de calidad de la tintura homeopática de Coffea arabica L. cultivada en Cuba

Lic.Madeline Chalala Vázquez,1 Lic. Dinah María García García,2 Téc. Maritza Crespo Valiente,3 Téc. Carlos A. Rodríguez Ferradá4 y Téc. Isabel Hechevarría Sosa.4

Resumen

El objetivo de este trabajo fue obtener la tintura de Coffea arabica L. según el método de la escuela francesa, a un título de etanol del 65 % y establecer sus indicadores de calidad tales como: características organolépticas, imagen capilar, índice de refracción, densidad relativa, pH, título etanólico y porcentaje de residuo seco. Se realizaron reacciones de identificación para determinar la presencia de fenoles, azúcares reductores y esteroides y se estandarizó un perfil de la tintura por cromatografía en capa delgada. En todos los lotes obtenidos, sus índices de calidad se encontraron dentro de los límites establecidos por las farmacopeas tomadas como referencias. Se realizó un estudio de estabilidad para determinar el tiempo de vida útil de la tintura durante un año, a temperatura ambiente en frascos de vidrio de color ámbar de 30 mL y pudo comprobarse que en estas condiciones conservó óptimamente sus características, además el conteo microbiano de la misma se mantuvo por debajo de los niveles permisibles durante todo el experimento. Estos resultados demostraron que es posible obtener esta tintura en Cuba con una calidad similar a la exigida por farmacopeas homeopáticas oficiales.

DeCs: TINTURAS/farmacología; FARMACOTECNICA HOMEOPATICA; VENCIMIENTO DE LOS MEDICAMENTOS; TINTURA MADRE; CUBA.

Summary

The aim of this paper was to obtain the Coffea arabica L. tincture according to the method of the French School at a titer of ethanol 65 % and to establish its quality indicators, such as organoleptic characteristics, capillary image, refraction index, relative density, pH, ethanolic titer and percentage of dry residue. The identity reactions were made to determine the presence of phenols, reducing sugars and steroids, and a tincture profile was standardized by thin layer chromatography. The quality indexes of all the batches attained were within the limits established by the pharmacopeias taken as references. A stability study was conducted to determine the time of useful life of the tincture during a year at room temperature in amber glass bottles of 30 mL and it could be demonstrated that under these conditions it kept their characteristics in an optimum way and that its microbial count was under the permissible levels during the whole experiment. These results showed that it is possible to obtain this tincture in Cuba with a quality similar to that demanded by Official Homeopathic Pharmacopeias.

Subject headings: DYES/pharmacology; HOMEOPATHIC PHARMACOTHECNIQUES; DRUG EXPIRATION; MOTHER TINCTURE; CUBA.

Coffea arabica L. pertenece a la familia de las Rubiáceas, su nombre común es café crudo y fue introducido en la práctica homeopática por el doctor Stapf en 1823.1

Coffea como medicamento homeopático es considerado por algunas fuentes como un semipolicresto.2,3,4
En homeopatía es de gran utilidad ya que es efectiva en la actividad emocional, da sensación de vigor, controla el mal humor y la cólera, controla la irritación de los riñones, la neuralgia y el insomnio.5

Para satisfacer la alta demanda de tinturas madres obtenidas a partir de plantas cultivadas en las condiciones de Cuba, se decidió comprobar el método para su obtención descrito en farmacopeas homeopáticas oficiales1,6,7 y valorar los indicadores de calidad fundamentales, comparándolos con los establecidos en estas farmacopeas.

Métodos

En la obtención de la tintura se utilizaron semillas secas de frutos maduros de Coffea arabica L. completamente libres de tegumentos del fruto, registrado con el número de herbario 4659 y cosechado en la Estación Experimental de Plantas Medicinales " Dr. Juan Tomás Roig ", en San Antonio de los Baños, provincia Habana, Cuba, en los meses de septiembre, octubre y noviembre.

Se obtuvieron 15 lotes de tintura con un título de etanol del 65 % en una proporción 1/10, según el método de la escuela francesa. Se realizó el control de calidad de los mismos y se determinaron las características organolépticas, imagen capilar, índice de refracción, densidad relativa, pH, título de etanol, residuo seco y porcentaje de cafeína.6,7

Se realizaron además reacciones de identificación para determinar la presencia de azúcares reductores, fenoles y esteroides; por la reacción de Felinhg, cloruro férrico y del bromo, respectivamente.

Se estandarizó un perfil de la tintura mediante cromatografía en capa delgada. Se utilizaron placas precubiertas de silicagel G-60 de 0,25 mm de espesor, como sistema de solvente se empleó una mezcla de butanol, ácido acético glacial, agua 40:10:10 y como reveladores de la luz UV - visible, una solución de yoduro de potasio y yodo en etanol y otra de ácido clorhídrico al 25 % en etanol. Como sustancia de referencia fue empleada una solución de 1mg/mL de cafeína en etanol.6

Se realizó un estudio de estabilidad durante un año de tres lotes de tintura, almacenados a temperatura ambiente en frascos de vidrio de color ámbar de 30 mL, con tapas de baquelita y retapas de polipropileno, se evaluaron los mismos indicadores que se tuvieron en cuenta para el control de la calidad, al inicio y cada tres meses. Además, se realizó un control microbiológico al comienzo del experimento y después cada 6 meses, que consistió en conteo total de hongos y bacterias, evaluación cuantitativa de enterobacterias y de Echerichia coli., Salmonella sp., Pseudomonas aeruginosas y Staphylococcus aureus con los medios y métodos descritos en la USP XXII ( Determinaciones de límites microbianos de medicamentos no estériles8) y por la norma cubana basada en esta Farmacopea.9 Para la interpretación de los resultados se aplicó un análisis de varianza simple y la diferencia entre las medias se determinó mediante la prueba de rangos múltiples de Duncan.10

Resultados

La tintura de Coffea arabica L. no presentó sedimentos, ni partículas, se comportó como un líquido transparente de color ambarino y sabor a licor.

Los lotes evaluados presentaron una imagen capilar alta, de color crema amarillento muy poco coloreada, con franja lineal. A la luz UV- visible toda la imagen tomó color azul fluorescente, excepto en la parte superior de la subfranja y la parte media de la banda; con vapores de amoníaco al visible la imagen tomó coloración amarillo intenso y expuesta a la luz UV-visible, el color azul fluorescente varió a verde intenso también fluorescente.

Todos los lotes respondieron positivamente a las pruebas de identificación exigidas por las respectivas monografías utilizadas, en el caso de la reacción de Felinhg se observó para los 15 lotes la formación de un precipitado rojo muy característico de azúcares reductores, en la reacción de cloruro férrico, en todos los lotes se apreció una intensa coloración verde oscura característica de fenoles; en la reacción del bromo también todos los lotes tomaron un color rojo vino típico. Estos resultados coincidieron con los publicados por las Farmacopeas.7,8

En la tabla 1 se presentan los resultados de los indicadores evaluados a los diferentes lotes de tintura.

Tabla 1 Indicadores determinados a los diferentes lotes de tintura de Coffea arabica L.

Lote	Indice de refracción	Densidad relativa	pH	Residuo seco (%)	Título de etanol(%)	% de cafeína
1	1,363	0,8889	6,21	1,49	71,03	-
2	1,363	0,8881	6,26	1,40	70,10	-
3	1,363	0,8810	6,01	0,90	68,24	-
4	1,364	0,8922	0,35	2,28	69,17	-
5	1,364	0,9066	6,43	2,17	60,90	0,09
6	1,363	0,9062	6,44	2,27	58,18	0,11
7	1,363	0,9056	6,46	2,16	59,09	0,12
8	1,362	0,8842	6,50	2,07	65,46	0,10
9	1,363	0,8902	6,53	2,16	65,46	0,09
10	1,363	0,8931	6,55	1,61	66,38	0,10
11	1,362	0,8945	6,53	1,95	66,38	0,10
12	1,364	0,8912	6,44	1,85	68,24	0,11
13	1,364	0,8908	6,46	1,92	68,24	0,10
14	1,364	0,8906	6,46	1,83	64,55	0,12
15	1,367	0,8929	6,42	2,56	67,31	0,16
Valor publicado				³ 1,007,8	60 - 707,8	³ 0,067

 

En la Fig. se muestra el perfil cromatográfico de la tintura y se relaciona el color de cada una de las bandas y el intervalo de valores de Rf a los que aparecen. En ese perfil pueden observarse dos bandas de color azul en los intervalos de Rf de 0,15-0,20 y de 0,20-0,25; una banda parda superpuesta con una verde azul a 0,55-0,60 y una banda azul pálida a un intervalo de 0,79-0,82. Al revelar con las soluciones reveladoras y examinarse a la luz visible el cromatograma mostró una banda parda púrpura a 0,59, próximo al mismo valor de Rf correspondiente a la cafeína.

Figura. Perfil cromatográfico de la tintura de Coffea arabica L. revelado con luz U.V.

 

Durante el estudio de estabilidad, la tintura conservó sus propiedades organolépticas, así como las características de la imagen capilar, presentó similar comportamiento en las reacciones de identificación realizadas y se detectó la presencia de cafeína en todas las evaluaciones.

Los resultados del resto de los indicadores evaluados aparecen reflejados en la tabla. 2 donde se observa que los valores de índice de refracción, densidad relativa y pH, permanecieron prácticamente invariables durante el año de experimentación. De igual forma el perfil cromatográfico mostró el mismo número de bandas e idéntica respuesta frente a los sistemas de detección utilizados, sin que fueran notados cambios en cuanto a la aparición de nuevas bandas o a la desaparición de las ya detectadas.

Tabla 2. Indicadores evaluados a Coffea arabica L. durante el estudio de estabilidad,

Indice de refracción
Lote	Inicio	1ra	2da	3ra	4ta
1	1,364	1,363	1,362	1,362	1,362
2	1,364	1,363	1,363	1,362	1,363
3	1,364	1,363	1,363	1,363	1,363
Densidad relativa
Lote	Inicio	1ra	2da	3ra	4ta
1	0,891	0,891	0,892	0,92	0,892
2	0,890	0,891	0,891	0,891	0,891
3	0,890	0,891	0,891	0,891	0,892
pH
Lote	Inicio	1ra	2da	3ra	4ta
1	6,44	6,43	6,44	6,43	6,41
2	6,46	6,44	6,46	6,43	6,35
3	6,46	6,45	6,44	6,45	6,47
Residuo seco (%)
Lote	Inicio	1ra	2da	3ra	4ta
1	1,85 bc	1,96 b	1,93 b	2,19 a	1,69 c
2	1,92 c	1,93 c	2,07 b	2,17 a	1,72 d
3	1,83 b	1,88 b	1,92 b	2,09 a	1,62 c
Título de etanol (%)
Lote	Inicio	1ra	2da	3ra	4ta
1	68,24 a	66,38 ab	63,63 b	63,63 b	64,55 b
2	68,24 ns	66,38 ns	66,38 ns	65,46 ns	64,55 ns
3	64,55 ns	64,55 ns	63,63 ns	64,55 ns	65,46 ns
% de cafeína
Lote	Inicio	1ra	2da	3ra	4ta
1	0,11 a	0,10 ab	0,08 b	0,11 a	0,09 b
2	0,10 b	0,07 c	0,12 a	0,10 b	0,08 c
3	0,12 a	0,10 a	0,12 a	0,12 a	0,10 a

 

Los tres lotes de tintura resultaron microbiológicamente estables durante el año y el conteo de bacterias, enterobacterias y hongos se mantuvo dentro de los límites, con ausencia de microorganismos patógenos.9,10

 

Discusión

Las características organolépticas de todos los lotes de tintura obtenidos coincidieron con las informadas por las farmacopeas tomadas como base para este estudio. Los valores de índice de refracción, densidad relativa y pH oscilaron dentro de un intervalo relativamente estrecho, lo que demostró la homogeneidad entre los lotes. Los valores del residuo seco y título de etanol se encontraron dentro de los límites establecidos. El contenido de cafeína alcanzó valores superiores a 0,06 % que coincidió con los publicados en la monografía de referencia.7

El perfil cromatográfico de la tintura coincidió con el que se registra y cuando se atomizó con el reactivo de KI e I2 y HCl fue observada la banda parda púrpura con un valor próximo de Rf a 0,59 que coincidió con la intensidad de color y tamaño de la banda publicada para la solución de cafeína tomada como referencia.7,8

Estos resultados corroboraron la posibilidad de obtener la tintura madre de Coffea arabica L. a partir de plantas que crecen en Cuba con una calidad similar a la exigida por farmacopeas de reconocido prestigio internacional.

El análisis estadístico de los resultados obtenidos durante el estudio de estabilidad demostró que para el caso del título de etanol y el contenido de cafeína de forma general no existieron diferencias significativas entre las evaluaciones, es decir, resultaron iguales respectivamente, no ocurrió lo mismo con el porcentaje de residuo seco, donde las evaluaciones se diferenciaron estadísticamente entre sí, sin embargo hay que destacar que este indicador en los 3 lotes evaluados se mantuvo por encima del límite establecido ( ³ 1,00 ) durante todo el experimento, por lo que se puede afirmar que la tintura conservó todas sus características de forma óptima durante un año bajo las condiciones ensayadas.
Finalmente, se puede decir que es posible obtener la tintura madre de Coffea arabica L. a partir de plantas que crecen en Cuba, con una calidad similar a la exigida por farmacopeas de prestigio mundialmente reconocido y que además conserva todas sus propiedades envasada en frascos de color ámbar de 30 mL, almacenados a temperatura ambiente por un año.

Referencias Bibliográficas

1. Pharmacopea Homeopática de los Estados Unidos Mexicanos. México, DF: Publicaciones e Impresiones de calidad;1998.p. 335.
   
2. Uribe F, Jiménez B. Farmcopea homeopática. 2da ed. New Delhi: B. Jain Publ; 1990.
   
3. Castañeda LC. Farmacopea homeopática 2 tomo. Guadalajara: Edamex; 1990.
4. Jarh GHG. Nuevo Manual de Medicina Homeopática. Manual de Materia Médica. 8va ed. New Delhi: B. Jain Publ; 1992.
5. Enciclopedia Verma Indu. VAID. New Delhi: B. Jain P; 1092 .
6. Pharmacopée Francaise. 6 suppl. 10 ed. Moulins-Lés-Metz: L' Adrapharm/Moisonneuve; 1989.
7. Syndicat des pharmacies et laboratories homeopatiques. Homeopathic- pharmacotechnie et monographies des medicaments courants. Vol. 1. Lyon: 1981.
8. United States. Pharmacopeial Convention USP XXII Rockville; 1990.p. 1479.
   Cuba. Medicamentos no estériles. Determinaciones microbiológicas. NC. 26-121: 92:1992.
9. Duncan A. Múltiple range test biometric. Biometrics 1965;11:1.
   

Recibido: 10 de diciembre del 2002. Aprobado: 24 de marzo del 2003.
Lic. Madeline Chalala Vázquez. Estación Experimental de Plantas Medicinales "Dr. Juan Tomás Roig". San Antonio de los Baños. La Habana, Cuba.

1 Licenciada en Química.
2 Investigador Auxiliar.
3 Técnico Medio en Tecnología Farmacéutica.
4 Técnico Medio en Agronomía.