ARTÍCULO ORIGINAL

 

 

Actividad de extractos de orégano y tomillo frente a microorganismos asociados con otitis externa

Extracts from oregano and thyme against external otitis-associated microorganisms

Luciana de Souza Prestes^I, Ricardo Frascolla^II, Rosema Santin^III, Marco Aurelio Ziemann dos Santos^IV; Renata Costa Schram^V, Maria Regina Alves Rodrigues^VI, Luiz Filipe Damé Schuch^VII, Mario Carlos Araújo Meireles^VII

^I Máster en Ciencias. Departamento de Veterinaria Preventiva, Facultad de Veterinaria, Universidad Federal de Pelotas (UFPel). Pelotas, RS, Brasil.
^II Practicante del Laboratorio de Bacteriología. Departamento de Veterinaria Preventiva, Facultad de Veterinaria, Universidad Federal de Pelotas (UFPel). Pelotas, RS, Brasil.
^III Practicante del Laboratorio de Micología. Departamento de Veterinaria Preventiva, Facultad de Veterinaria. UFPel. Pelotas, RS, Brasil.
^IV Técnico en Cromatografía. Departamento de Química Orgánica, Instituto de Química e Geociencias. UFPel. Pelotas, RS, Brasil.
^V Médica Veterinaria. Departamento de Veterinaria Preventiva. Facultad de Veterinaria. UFPel. Pelotas, RS, Brasil.
^VI Departamento de Química Orgánica, Instituto de Química y Geociencias. UFPel. Pelotas, RS, Brasil, responsable por los análisis de los resultados de la cromatografía.
^VII Departamento de Veterinaria Preventiva. Facultad de Veterinaria, UFPel. Pelotas, RS, Brasil.

---

RESUMEN

INTRODUCCIÓN: la utilización de plantas con fines medicinales para el tratamiento de enfermedades ha ocurrido a lo largo de la historia de la humanidad. La enfermedad más comúnmente diagnosticada en perros es la otitis externa y, por lo tanto, es grande su importancia clínica.
OBJETIVO: evaluar la actividad antimicrobiana in vitro de 3 tipos de extractos de las plantas Origanum vulgare L. (orégano) y Thymus vulgaris L. (tomillo), un aceite, una tintura y una decocción, frente a microorganismos asociados con esa enfermedad.
MÉTODOS: la evaluación de los extractos fue realizada a través de microdiluciones en caldo frente a aislados de Malassezia pachydermatis, Pseudomonas aeruginosa (ATCC 10145) y Staphylococcus aureus (ATCC 12600). Se realizó un análisis por cromatografía de los aceites para comparación de sus constituyentes.
RESULTADOS: los aceites presentaron concentración inhibitoria mínima menor frente a los microorganismos, pero los extractos que presentaron mejor rendimiento fueron las tinturas.
CONCLUSIONES: los 2 tipos de extractos pueden ser una alternativa para el tratamiento de la otitis externa de los perros.

Palabras clave: Origanum vulgare L., Thymus vulgaris L., aceite esencial, tintura, otitis externa.

---

ABSTRACT

INTRODUCTION: the use of plants for medicinal purposes to treat diseases has been seen throughout the history of mankind. The most common diagnosed disease in dogs is external otitis, and therefore, the clinical importance of this illness is great.
OBJETIVE: to evaluate the in vitro antimicrobial activity of 3 types of extracts from Origanum vulgare L. (oregano) and Thymus vulgaris L. (thyme) in the form of an oil, a tincture and a decoction against otitis-associated microorganisms.
METHODS: the evaluation of these extracts was performed through microditulion in broth against Malassezia pachydermatis, Pseudomonas aeruginosa (ATCC 10145) y Staphylococcus aureus (ATCC 12600) isolates. The oil components were compared by chromatography technique.
RESULTS: the oils presented with a lower minimum inhibitory concentration against microorganisms, but the best performance extracts were tinctures. CONCLUSIONS: these two types of extracts may be an alternative for the treatment of external otitis in dogs.

Key words: Origanum vulgare L., Thymus vulgaris, essential oil, tincture, external otitis

---

 

 

INTRODUCCIÓN

Origanum vulgare L. y Thymus vulgaris L. son plantas distribuidas en áreas del mediterráneo y Asia, ambas pertenecen a la familia Lamiaceae.^1,2 Presentan diversas actividades biológicas con acción antiséptica, expectorante, carminativa y antiespasmódica relacionadas con el contenido en timol y carvacrol, que constituyen 40 a 50 % del aceite esencial utilizado como antiséptico, saborizante y antioxidante.^3-5 Comparados con el fenol, el timol y el carvacrol presentan mayor actividad antibacteriana y fungicida, pero menos toxicidad.⁶ La otitis externa en animales de compañía es la enfermedad más comúnmente diagnosticada en perros y por lo tanto, es de gran importancia en clínica.^7,8 Malassezia pachydermatis se encuentra en otitis externa como agente que se perpetúa, facilitada por la utilización excesiva de antibacterianos que eliminan bacterias comensales competidoras.⁹

El objetivo de este trabajo fue evaluar in vitro la actividad antimicrobiana del orégano frente a los microorganismos Malassezia pachydermatis, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa y determinar la concentración inhibitoria mínima (CIM).

MÉTODOS

Origen de las plantas: O. vulgare fue obtenido de fuente comercial (Quimer Comercial Ltda., lote nº 001, año 2001), previamente seco y con respectivo laudo agronómico y botánico. T. vulgaris fue colectado de huerta de plantas medicinales, en un asentamiento de reforma agraria (Cooperativa de Producción Agropecuaria Vista Alegre-COPAVA), municipio de Piratini (4587E, 6070N). Las hojas fueron secadas al aire libre, protegidas del sol y de la lluvia. Un espécimen fue identificado por la doctora Leila Macías del Herbario Pel del Instituto de Biología de la Universidad Federal de Pelotas (Voucher PEL 24.586).

Extracción del aceite esencial: la extracción fue realizada por arrastre de vapor utilizando un clevenger modificado de acuerdo con la farmacopea brasilera.¹⁰ Rápidamente, 100 g de cada planta fueron colocados en un balón de vidrio con 500 mL de agua destilada estéril y sometidas al aparato durante aproximadamente 4 h. Los aceites esenciales fueron extraídos de una única vez, guardados en frasco ámbar estéril hasta la realización de los análisis por cromatografía y los análisis in vitro.

Cromatografía: los análisis por cromatografía de los aceites fueron realizados por cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masa (CG/EM) en el Laboratorio de Fitoquímica del Instituto de Química Orgánica de la Universidad Federal de Pelotas. Se utilizó un cromatógrafo (GC/FID Shimadzu Mod. 17 A columna capilar con 5 % difenil/95 % dimethylsiloxano) con el objetivo de comparar los constituyentes principales, timol y carvacrol, de las 2 plantas.

Preparación de las tinturas: las tinturas de las plantas fueron preparadas utilizando 100 g de planta seca para 1 L de alcohol de cereales a 70 gl. Las plantas permanecieron en maceración durante 15 d en frasco ámbar con agitación diaria.¹⁰ Después, las tinturas fueron filtradas, el volumen de alcohol restituido y conservadas en frasco ámbar hasta su utilización. Para la evaluación antimicrobiana el alcohol fue extraído utilizándose un evaporador rotatorio a 55 ^oC bajo 600 nm/hg de presión negativa. El volumen inicial fue repuesto con agua destilada estéril y se utilizó antes de transcurrir 24 h.

Preparación de las decocciones: fueron preparadas momentos antes de su utilización por causa de la posibilidad de degradación del extracto, se utilizó 1 parte de planta para 10 de agua destilada estéril mantenida en ebullición durante 10 min.^6,10

Microorganismos: las cepas de referencia de Pseudomonas aeruginosa (ATCC 10145) y Staphylococcus aureus (ATCC 12600) fueron cedidas por la Fundación Oswaldo Cruz-FIOCRUZ). Los aislados de Malassezia pachydermatis fueron obtenidos, en el Laboratorio de Micología de la Facultad de Veterinaria-UFPel, a través de colecta de material del meato acústico externo de perros con otitis externa clínica.

La determinación de la susceptibilidad de microorganismos frente a los extractos fue realizada por microdilución en caldo, modificado por Nascente¹¹ para las levaduras, en microtécnica. El crecimiento microbiano fue evaluado por turbación y la concentración inhibitoria mínima (CIM) era la mayor dilución donde no hubo turbación visible expresa en porcentaje de extracto.^12,13

RESULTADOS

Los análisis de la cromatografía mostraron diferencias entre los constituyentes de las plantas. El aceite de T. vulgaris presentó 7 picos compatibles con los patrones utilizados (mirceno, p-cimeno, 1,8 cineol, linalol, 4-terpineol, a-terpineol y timol). Fueron observados, por lo menos, otros 17 constituyentes no caracterizados, muchos de los cuales en cantidades mayores que el contenido de timol. En relación a O. vulgare, se identificaron 10 constituyentes relacionados a los padrones (a-terpineno, p-cimeno, limoneno, g-terpineno, terpinoleno, linalol, 4-terpineol, a-terpineol, timol y carvacrol), la relación timol:carvacrol resultó próxima a 1:1. El pico de 4-terpineol se presentó muy semejante al de los constituyentes principales.

Los resultados de CIM para los extractos de las plantas evaluados aparecen en la tabla 1. A pesar de que los constituyentes de las 2 plantas son diferentes, la CIM del orégano y del tomillo fue semejante para las 4 muestras de M. pachydermatis (0,5 %).

En relación con las tinturas, la planta que mostró mejor resultado fue el orégano con CIM media de 25 %. La CIM de la decocción de orégano fue de 50 %, la decocción de tomillo no presentó inhibición de los aislados de M. pachydermatis. Frente a las bacterias el mejor resultado fue el de los aceites y frente a P. aeruginosa la CIM del aceite de orégano fue 12 % y frente a S. aureus fue 1,56 %; la CIM del aceite de tomillo fue 5 % para P. aeruginosa y de 1,25 % para S. aureus (tabla 2).

DISCUSIÓN

La variación en la constitución del aceite esencial ha llevado a la tentativa de clasificar esas plantas en diferentes quimiotipos de acuerdo con el constituyente principal.¹⁴ Esta variación depende de la variedad de orégano, de la altitud, sazonalidad y otras características agronómicas.^15,16

Hammer y otros¹⁷ utilizaron aceites comerciales y obtuvieron una CIM de 2,0 % para P. aeruginosa y para S. aureus 0,12 %; para el aceite de tomillo la CIM fue > 2,0 % para P. aeruginosa y para S. aureus 0,25 %. Sin embargo, no se encontraron otros trabajos que utilizaron la misma metodología para mejor compararlos.

Todos los extractos y tinturas inhibieron el crecimiento de los hongos y de las bacterias, el extracto de aceite mostró el mejor resultado, pero el rendimiento obtenido con esta forma farmacéutica es mucho menor por gramo de planta en relación con las otras formas de extracción.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Ken HWY. Drogas de origen vegetal - Mejorana. En: Tratado de Farmacognosia, México DF: Editoral Atlante; 1951. p. 938.

2. Badi HN, Yazdani D, Ali SM, Nazari F. Effects of spacing and harvesting time o herbage yield and quality/quantity of oil in thyme, Thymus vulgaris L. Ind Crops Prod. 2004;19:231-6.

3. Siatis NG, Kimbaris AC, Pappas CS, Tarantilis PA, Daferera DJ, Polissiou MG. Rapid Method for Simultaneous Quantitative Determination of Four Major Essential Oil Components from Oregano (Oreganum sp.) and Thyme (Thymus sp.) Using FT-Raman Spectroscopy. J Agric Food Chem. 2005; 53:202-6.

4. Daferera DJ, Ziogas BN; Polissiou MG. CG-MS Analysis of essential oils from some Greek aromatic plants and their fungitoxity on Penicillium digitatum. J Agric Food Chem. 2000; 48:2576-81.

5. Guillén MD, Manzanos MJ. Study of the composition of the different parts of a Spanish Thymus vulgaris L plant. Food Chem. 1998;63(3):373-83.

6. Simões CMO, Schenkel EP, Gosmnn G, Mello JCP, Mentz LA, Petrovick PR. Farmacognosia: da Planta ao Medicamento. Ed. da UFRGS/ed. da UFSC, Porto Alegre, RS/Florianópolis, SC, 2004; p. 1002.

7. Crespo MJ, Abarca ML., Cabañes FJ. Occurrence of Malassezia spp. in the external ear canals of dogs and cats with and without otitis external. Méd Mycol. 2002; 40:115-21.

8. Plant JD, Rosenkrantz WS, Griffin EC. Factors associated with and prevalence of high Malassezia pachydermatis numbers on dog skin. JAVMA. 1992;201(6):879-82.

9. Lobell R, Wiengarten A; Simmons R. Um novo agente para o tratamento da otite canina. A Hora Veterinária. 1995;88:29-33.

10. ANVISA. Farmacopéia Brasileira. 4ta. ed., v.1. Sao Paulo: Ed. Atheneu; 1988.

11. Nascente PS. Malassezia pachydermatis em cães e gatos: estudo da freqüência e avaliação da sensibilidade aos antifúngicos cetoconazol, fluconazol e itraconazol. Pelotas-RS, Dissertação [Mestrado em Veterinária] _ Programa de Pós-graduação em Veterinária, Universidade Federal de Pelotas; 2001. p. 84.

12. Lambert RJW, Skandamis PN, Coote PJ; Nychas GJE. A study of the minimum inhibitory concentration and mode of action of oregano essential oil, thymol and carvacrol. J Appl Microbiol. 2001; 91:453-62.

13. Manohar V, Ingram C, Gray J, Talpur NA, Echard BW, Bagchi D. Antifungal activities of origanum oil against Candida albicans. Mol Cell Biochem. 2001; 228:111-7.

14. Skoula M, Gotsiou P, Naxakis G, Johnson CB. A chemosystematic investigation on the mono- and sesquiterpenoids in the genus Origanum (Labiatae). Phytochem. 1999; 52:649-57.

15. Mockute D, Bernotiene G, Judzentiene A. The â-ocimene chemotype of essential oils of the inflorescences and the leaves with stems from Origanum vulgare ssp. vulgare growing wild in Lithuania. Biochem System Ecol. 2003; 31:269-78.

16. Kofidis G, Bosabalidis AM, Moustakas M. Contemporary Seasonal and Altitudinal Variations of Leaf Structural Features in Oregano (Origanum vulgare L.). Ann Bot. 2003; 92:635-45.

17. Hammer KA, Carson CF, Riley TV. Antimicrobial activity of essential oils and other plant extracts. J Appl Microbiol. 1999;86:985-90.

Recibido: 8 de agosto de 2008.
Aprobado: 10 de octubre de 2008.

M. C. Luciana de Souza. Departamento de Veterinaria Preventiva, Faculdad de Veterinaria, Universidad Federal de Pelotas (UFPel). Campus universitario s/n, CEP 96010900, Pelotas,RS, Brasil. Correo electrónico: [e-mail]