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Revista de Salud Animal
versão On-line ISSN 2224-4700
Resumo
ACEVEDO, Ana María et al. Estandarización de un ensayo de RT-PCR en tiempo real basado en SYBR Green I para la detección del virus de la lengua azul en animales centinelas. Rev Salud Anim. [online]. 2016, vol.38, n.1, pp. 46-51. ISSN 2224-4700.
La lengua azul es una enfermedad viral de especies de rumiantes que se transmite por insectos, y que primariamente afecta a los carneros. La enfermedad es causada por un virus (BTV) que pertenece al género Orbivirus de la familia Reoviridae. Se han identificado 26 serotipos diferentes de este virus hasta la fecha. Debido a la rápida diseminación del virus y a la variabilidad de los signos clínicos, se necesita el desarrollo de métodos de detección de BTV rápidos y precisos, los cuales pueden ayudar en el control de la enfermedad. Un ensayo de RT-PCR en tiempo real (rRT-PCR), basado en SYBR Green-I, puede ser un método ideal para detectar rápidamente el genoma de BTV en la sangre de los animales. En este estudio se describe un análisis de curvas de disociación acoplado al rRT-PCR y se compara con el ensayo de RT-PCR anidado (nRT-PCR) que se reporta en el Manual de la OIE. La especificidad y la sensibilidad de ambos métodos se evaluaron usando ARN de BTV-4 extraído a partir de diluciones seriadas del virus en medio de cultivo de tejido y en sangre (comenzando a partir de 104.5 TCID50/ml). El límite de detección de cada ensayo en medio de cultivo de tejido fue de 100.5 TCID50/ml y en sangre fue de 101.5 TCID50/ml (rRT-PCR) y 100.5 TCID50/ml (nRT-PCR). Los análisis de curvas de disociación mostraron curvas de amplificación con curvas de disociación específicas (Tm = 84°C ± 0.5°C) y ausencia de amplificación no específica. La sensibilidad diagnóstica se evaluó a partir de muestras clínicas de un ternero bajo condiciones controladas. Estos resultados mostraron que el rRT-PCR, basado en SYBR Green-I, es un ensayo rápido, sensible e igualmente específico en el diagnóstico de animales afectados con BT.
Palavras-chave : virus de la lengua azul; RT-PCR anidado; ensayo de RT-PCR en tiempo real basado en SYBR Green-I.