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Vaccimonitor
versão On-line ISSN 1025-0298
Vaccimonitor v.10 n.4 Ciudad de la Habana oct.-dez. 2001
ARTICULOS ORIGINALES
Sensibilización de placas para ensayos inmunoenzimáticos con antígenos vacunales.
Coating of ELISA plates with vaccine antigens
Rolando Ochoa, Juan Carlos Martínez, Xenia Ferriol, Ana Margarita García, Eric Estrada, Rosa Blanco,
Tania Licea, Franklin Sotolongo.
Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, Cuba.
E-mail:ochoa@finlay.edu.cu
RESUMEN
Se describe un procedimiento de sensibilización de placas para ensayos inmunoenzimáticos (ELISA) con antígenos vacunales. Se define como concentración óptima de sensibilización aquella donde se alcanza la mayor densidad óptica con los sueros estándares y la menor con los sueros negativos y el blanco reactivo. Como modelo se emplean ensayos indirectos correspondientes a los antígenos de captura: toxoide tetánico, diftérico y la vesícula de membrana externa de meningococo B, materia prima activa de la vacuna antimeningocócica VA-MENGOC-BC. Esta metodología permite alcanzar un mayor recubrimiento de la fase sólida, lo cual incrementa la sensibilidad de los ensayos. La ocupación de espacios libres en la placa se hizo más evidente con antígenos de menor peso molecular, como los toxoides diftérico y tetánico.
Palabras claves: ELISA, antígeno, vacuna, sensibilización.
ABSTRACT
A procedure for coating ELISA plates with vaccine antigens is described. The optimum coating concentration was that achieving the highest absorbance for the standard sera and the lowest for the negative controls and the reagent blank. Indirect ELISA is used as model. Tetanus and diphtheria toxoids, and meningococcal B outer membrane vesicle, active principle of the meningococcal vaccine VA-MENGOC-BC, were used as capture antigens. That procedure increases sensitivity of the assays due to coating optimization. The saturation of possible free spaces was more evident with the lowest molecular weight antigens, such as diphtheria and tetanus toxoids.
Keywords: ELISA, antigen, vaccine, plate coating.
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REFERENCIAS
1. Esser P. Principles in adsorption to polystyrene. Nunc Bulletin. 1988; 11(6):1-5.
2. Ochoa R, Martínez JC, Ferriol X, Estrada E, García AM, Blanco R et al. Guía para la estandarización de técnicas inmunoenzimáticas en ensayos de vacunas. VacciMonitor.2000; 9(3):13-18.
3. Esser P. Blocking Agent and Detergent in ELISA. Nunc Bulletin. 1991; 6(9):1-4.
4. Péterfi Z, Kocsis B. Comparison of blocking agents for an ELISA for LPS. Journal of Immunoassay 2000; 21:341-354.
5. Steinitz M. Quantitation of the blocking effect of tween 20 and Bovine Serum Albumin in ELISA microwells. Analytical Biochemistry 2000; 282:232-238.
6. Steinitz M, Baraz L. A rapid method for estimating the binding of ligands to ELISA microwells. Journal of Immunological Methods 2000;238:143-150.
7. Tijssen P. The immobilization of immunoreactants on solid phases. En: Burdon RH, van Knippenberg PH, editors. Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology. Practice and theory of enzyme immunoassays, Amsterdan, London, New York, Tokyo, Elsevier. 1993:297-328.
8. Labsystems. Studies on Immobilization of Biological Materials. Enhanced Adsorption to Modified Polystyrene. Labsystems Research Centre, Finland, 1998.
9. Tijssen P. Kinetics and nature of antibody-antigen interactions. En: Burdon RH, van Knippenberg PH, editors. Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology. Practice and theory of enzyme immunoassays, Amsterdan, London, New York, Tokyo, Elsevier, 1993:123-149.
10. Galazka AM. The Immunological Basis for Immunization Series. Module 2. Diphtheria. World Health Organization: Geneva, 1996.
11. Galazka AM. The Immunological Basis for Immunization Series. Module 3. Tetanus. World Health Organization: Geneva; 1996.
12. Poolman JT, Van der Ley PA, Tommassen J. Surface structures and secreted products of meningococci. In: Cartwright K editor. Meningococcal Disease. John Wiley & Sons Ltd. Chichester, England, 1995:21-34.
13. Martínez JC, Ochoa R, Cruces A, Fajardo EM, Alvarez E, Ferriol X, et al. Validation of an ELISA for the Quantitation of Diphtheria Antitoxin in Human Serum. Biotecnología Aplicada 2000; 17:183-186.
14. Ferriol X, García AM, Ochoa R, Bravo I, Blanco R, Estrada E, et al. Validación de un ELISA para la cuantificación de IgG humana anti proteína de la Neisseria meningitidis serogrupo B. Rev Cubana Med Trop 1999;51(2):99-105.
15. Ochoa R, Martínez JC, Fajardo E, Alvarez E, Estrada E, García AM., et al. Validación de un ELISA para la cuantificación de antitoxina tetánica en suero humano. VacciMonitor. 2000; 9(4):16-21.
16. Microsoft??Excel 2000 [computer program]. Microsoft Corporation. USA, 2000.
17. Statgraphics??plus for WindowsTM [computer program]. Versión 3.1. Statistical Graphic Corp. USA, 1998.