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Revista de Protección Vegetal
versão On-line ISSN 2224-4697
Resumo
PETEIRA-DELGADO, B e HIDALGO-DIAZ, L. DETECCCIÓN DE PROTEASA VCP1 EN LA CEPA IMI SD 187 DE Pochonia chlamydosporia var. CATENULATA. Rev. Protección Veg. [online]. 2009, vol.24, n.3, pp. 166-172. ISSN 2224-4697.
El modo de acción de Pochonia como agente de control biológico es a través de la penetración de las hifas en los huevos de sus nematodos diana. La cubierta de los huevos de los nematodos posee una capa externa vitelina, compuesta en su mayoría por proteínas. Por tanto, la penetración es el resultado de una presión física y de la actividad hidrolítica específica de algunas enzimas tales como proteasas y quitinasas. La proteasa más importante del género Pochonia ha sido estudiada en la variedad chlamydosporia y es conocida como VCP1. El objetivo de este trabajo fue la detección y el estudio del comportamiento de la proteasa VCP1 en una cepa promisoria de Pochonia chlamydosporia var. catenulata. La actividad enzimática de esta proteasa se estudió en diferentes medios suplementados con inductores, empleando como sustrato N-succinil-Ala-Ala-Phe-p-nitroanilida. También se desarrollaron análisis PCR y RFLP con cebadores y sondas específicos. En todos los experimentos, los controles positivos utilizados fueron aislamientos de la variedad chlamydosporia. El medio suplementado con quitina fue el único capaz de inducir alguna actividad de la VCP1 pero en un nivel bajo. El gen que codifica para la enzima VCP1 no fue detectado por RFLP en la cepa IMI SD 187, aún cuando las condiciones de la hibridación de la sonda fueron reducidas al mínimo posible. El bajo nivel alcanzado de la actividad de esta enzima apunta hacia la existencia de una isoforma de la VCP1 u otra proteasa totalmente diferente. Esta hipótesis debe ser comprobada aumentando el rango de cepas de la variedad catenulata, teniendo como referencia la cepa 10 de la variedad chlamydosporia en un estudio comparativo con resultados conclusivos en este aspecto. Los resultados de esta caracterización enzimática relacionada con el proceso de infección de los huevos del nematodo hospedante son los primeros que se desarrollan en una cepa de la variedad catenulata, en el mundo.
Palavras-chave : nematodos parásitos; RFLP; enzimas; proteasas.