Resumo

HERNANDEZ, Abel et al. Generación de dos anticuerpos policlonales para la detección mediante western blot de virus de la hepatitis A en plantas. Biotecnol Apl [online]. 2012, vol.29, n.2, pp. 102-107. ISSN 1027-2852.

Para detectar las proteínas del virus de la hepatitis A en sistemas recombinantes se requiere de anticuerpos de calidad. Siguiendo estos objetivos la secuencia de ADNc que codifica para dos proteínas estructurales del virus de la hepatitis A, VP2 y VP3 se clonaron en el vector de expresión en Escherichia coli pTrc His resultando los plásmidos pTrcHisVP2 y pTrcHisVP3. Las células recombinantes portadoras de ambas construcciones fueron crecidas en medio líquido y después de la inducción con IPTG se detectaron ambas proteínas de 34 kDa y 24 kDa mediante SDS-PAGE. Las proteínas recombinantes VP2 y VP3 que contenían el tallo de histidina fueron purificadas en condiciones desnaturalizantes mediante cromatografía de afinidad a iones metálicos rindiendo 8 y 10 mg por 300 mL de cultivo respectivamente. La inmunización de conejos con las proteínas purificadas permitió la obtención de anticuerpos policlonales que permitieron la detección de las proteínas estructurales del virus de la hepatitis A en ensayos de western blot. De acuerdo a estos resultados los antisueros obtenidos pudieran ser útiles en el seguimiento en la producción de proteínas del virus de la hepatitis A en plantas transgénicas, donde una posible expresión de las proteínas del VHA superiores al 0.25% de las proteínas totales solubles podrían ser detectadas con estos sueros policlonales mediante ensayos de western blot.

Palavras-chave : Virus de la hepatitis A; proteína de estructura; sueros policlonales.

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