Publicaciones Extranjeras

Laboratorio de Cirugía Experimental. Instituto de Investigaciones Médicas. Facultad de Medicina, Valladolid

Prevención del daño intestinal mediante la utilización de un antagonista del factor de activación plaquetaria en el transplante intestinal

Dr. Carlos Vaquero Puerta,¹ Dr. Vicente Gutiérrez Alonso,² Dr. Eladio González González,³ Dr. José Luis Álvarez Conde⁴ 1 Director del Laboratorio de Cirugía Experimental del Instituto de Investigaciones Médicas de la Facultad de Medicina de la Universidad de Valladolid y Jefe del Servicio de Cirugía Vascular del Hospital Universitario de Valladolid.
² Médico Adjunto de Cirugía del Hospital Universitario de Valladolid.
³ Veterinario y Director del Animalario de la Universidad de Valladolid.
⁴ Jefe de Sección de Cirugía del Hospital Río Carrion de Palencia.

RESUMEN

Se realiza un estudio comparativo en ratas singénicas de la cepa Wistar con objeto de valorar los efectos de preservación del injerto al utilizar el antagonista del factor de activación plaquetaria, WEB-2086. En la valoración ultraestructural se ha podido comprobar los efectos de esta sustancia al nivel de las células epiteliales de intestino trasplantado.

Descriptores DeCS: PRESERVACION DE ORGANOS/métodos; INTESTINOS/trasplante; FACTOR DE ACTIVACION PLAQUETARIA/farmacología; RATAS WISTAR.

INTRODUCCIÓN

La presentación del intestino, utilizado posteriormente para trasplante sigue siendo en el momento actual un tema para investigar, dado que no se ha conseguido un método que se pudiera considerar ideal y por otro lado considerando los pobres resultados obtenidos al utilizar esta técnica quirúrgica.^1-4,16,19

En la larga búqueda de sustancias o fármacos de preservación se han ensayado gran cantidad de ellas buscando sobre todo la preservación del daño isquémico.^9,12-14

El factor de activación plaquetaria (PAF) es un fosfolípido implicado en gran cantidad de actividades biológicas, muchas de ellas relacionadas con la isquemia hística. La utilización de un neutralizador o antagonista específico del PAF, pensamos que puede ser beneficioso en la preservación del daño isquémico e incluso en la revascularización.^11,14,17,21

MÉTODOS

Para el presente estudio se han utilizado 20 ratas singénicas macho. Se ha empleado la mitad como donantes y la otra mitad como ratas receptoras. En la mitad de las ratas donantes se ha preservado su intestino al utilizar el antagonista específico del PAF, WEB-2086 a dosis de 1 mg/kg de peso del injerto y solución de Ringer lactato frío por vía regional mesentérica, a través de la arteria mesentérica anterior. En la otra mitad de animales que se ha empleado como testigo, sólo se utilizó en la perfusión solución de Ringer lactato frío. Los injertos se han mantenido una vez perfundidos a 4 EC antes de su implantación durante 1 hora. Posteriormente se han transplantado los injertos en las ratas receptoras, y se implantó un segmento de unos 5 cm de longuitud, anastomosando los vasos mesentéricos a la aorta y porta y practicando un asa de Thiry-vella. Los animales se han estabulado en condiciones estándares de habitabilidad. Posteriormente a las 24 horas del trasplante se han sacrificado los animales, se les extrajo el injerto de intestino trasplantado, y se procesó para su evaluación bajo microscopia electrónica de transmisión. Se ha centrado especialmente el estudio en el vértice de la vellosidad al nivel del enterocito, al considerar que es la parte más sensible a la isquemia.

RESULTADOS

Los efectos de la preservación al utilizar sólo una solución de Ringer lactato fría nos ha mostrado lesiones al nivel del enterocito, típicas del síndrome de isquemia-reperfusión intestinal. Lesiones al nivel de los microvilli con discreto abalonamiento de la punta, a veces con pérdida o fragmentación de éstos. Al nivel de las mitocondrias se han visto hinchamiento con destrucción de crestas y pérdidas de la limitación de las membranas constitutivas. Además, se ha perdido la densidad ribosomal citoplasmática.

F IGURA 1. Serias alteraciones ultraestructurales a nivel del enterocito en el grupo no citopreservado con antagonistas del PAF (18.000X).

FIGURA 2. Conservación de las estructuras intracitoplasmáticas en el grupo tratado con anatagonistas del PAF (18.000X).

Cuando se ha utilizado el antagonista del PAF para la preservación, las lesiones aunque existentes, han sido más discretas, con una mejor preservación de membranas y sobre todo del daño mitocondrial. No parece impedir el daño al nivel de las microvellosidades y paradójicamente ha aparecido una mayor densidad lisosomial en la célula. (figuras 1 y 2).

DISCUSIÓN

La deprivación del riesgo a un órgano ocasiona una serie de alteraciones al nivel hístico celular que van desde la formación de edema, alteraciones en la permeabilidad y transporte de sustancias a otras más relacionadas con las células sanguíneas.⁵

El daño hístico y celular durante la isquemia depende del aporte de oxígeno en lo que respecta al desarrollo de un metabolismo anaerobio.⁸ De la misma forma la reperfusión de un órgano también desencadena una serie de acontecimientos que desde el punto de vista metabólico puede tener mayores consecuencias que la propia isquemia.

Existe una serie de mediadores inflamatorios como el PAF, que desempeña un papel importante en el fenómeno de isquemia-reperfusión.^14,21 y que aunque éste no está presente de forma continua en las células endoteliales, puede sintetizarse con el estímulo adecuado. Sus acciones están vinculadas con la de los cambios en la permeabilidad de membrana, adherencia leucocitaria y otras al nivel de la histamina y procesos vinculados al daño del fenómeno isquemia-reperfusión del órgano.¹⁸

En el trasplante de órganos, se ponen en marcha con una gran intensidad los procesos de isquemia en la obtención y preservación del órgano y la reperfusión, con la implantación de éste.^15,20 Por este motivo la preparación del órgano con sustancias que pudieran inhibir este factor de activación plaquetaria puede ser tremendamente beneficioso como se ha apuntado en nuestro estudio.

Se puede mantener la hipótesis del mecanismo de actuación al nivel de trasplante de intestino en que la acción del preparado investigado modula la adhesión leucocitaria del endotelio, con una posible neutralización del bloqueo de los receptores del PAF.²¹

SUMMARY

A comparative study was carried out in syngeneic Wistar rats with the aim of assess the effects of the preservation of grafts when using the antagonist of the platelet activating factor, WEB-2086. The effects of this substance at the level of epithelial cells of the transplantated intestine were proved in the ultrastructural assessment.

Subject headings: ORGAN PRESERVATION/methods; INTESTINES/transplantation; PLATELET ACTI-VATING FACTOR/pharmacology; RATS, WISTAR.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Clark CI. Recent progress in intestinal transplantation. Arch Dis Child 1992;67:976-9.
2. Deltz E, Mengel W, Hamelmann H. Small Bowel transplantation: report of a clinical case. Prog Pediatr Surg 1990;25:90-6.
3. Eitelbaum DH, Wise WE, Sonnino RE, Dunaway DJ, Powers P, McClung HJ, et al. Monitoring of intestinal transplant rejection. Am J Surg 1989;157(3):318-22.
4. Fenzlein PG, Abendroth D, Schilling M, Schaidt M, Land W. Biochemical multisensor element for estimation of organ viability. Transplant Proc 1991;23(1 pt 2):1302-3.
5. Gabbert H, Wagner R, Aust P, Höhn P. Ischemia and post ischemic regeneration of the small intestinal mucosa an enzyme histochemical investigation. Acta Histochem 1978;63:197-213.
6. Grant D, Lamont D, Zhong R, García B, Wang P, Stiller C, et al. 51Cr-EDTA: a marker of early intestinal rejection in the rat. J Surg Res 1989;46(5):507-14.
7. Hansmann ML, Hell K, Gundlach E, Deltz E, Schroeder P. Immunohistochemical investigation of biopsies in a succesful small-bowel transplantation. Transplant Proc 1990;22:2502-3.
8. Hohenleitner FJ, Senior JR. Metabolism of canine small intestine vasculary perfused in vitro. J Appl Physiol 1969;26:119-28.
9. Kazmierczak SC, Lott JA. Monitoring of intestinal transplant rejection (letter). Am J Surgery 1991;162(1):90-1.
10. Kobayashi T, Mutsukage A, Morimoto T, Takagi H. Correlation between cell viability and messenger RNA intactness during cell preservation. Transplantation 1991;51(4):901-5.
11. Kubes P, Ibbotson G, Russell J, Wallace JL, Granger DN. Role of platelet-activating factor in ischemia/reperfusion-induced leukocyte adherence. Am J Physiol 1990;259:300-5.
12. Luther B, Wolff H, David H, Lehmann C. Results of the perfusion and preservation of animal and human small-bowel transplant. Transplant Proc 1990;22(6):2435-6.
13. Manax WG, Bloch JH, Eyal Z, Lillehei RC. Experimental preservation of the small bowel. Am J Surg 1965;109:26-30.
14. Milazzo J, Sabido F, Hobson RW, Duran WN. Platelet activating factor blockade inhibits leukocyte adhesion to endothelium in ischemia-reperfusion. Surg Forum 1992;43:376-8.
15. Schraut WH. Current status of small-bowel transplantation. Gastroenterology 1988;94(2):525-38.
16. Schwart MZ. Small-bowell transplantation. Pediatr Surg Int 1988;3:318-25.
17. Tomeo AC, Durán WN. Resistence and exchange microvessels are modulated by differents PAF receptor. Am J Physiol 1991;261:1648-52.
18. Wagner R, Gabbert HM, Hönh P. Ischemia and postischemia regeneration of small intestinal mucosa. A ligh microscopic and autoradiographic study. Virchous Arch C Cell Path 1979;31:259-76.
19. Watson AJM, Lear PA. Current status of intestinal transplantation. Gut 1987;30:1771-82.
20. Zhong R, Wang P, Chen H, Sutherland F, Hurlbut D, Lamont D, et al. A comparison of heterotopic and orthotopic rat intestinal transplant models. Transplant Proc 1990;22(6):244-5.
21. Zimmerman GA, McIntyre GM, Mehra M, Prescott SM. Endothelial cell-associated platelet activiting factor: a novel mechanism for signaling intercelular adhesion. J Cell Biol 1990;110:529-40.

Recibido: 27 de agosto de 1996. Aprobado: 21 de octubre de 1996.

Prof. Carlos Vaquero Puerta. Laboratorio de Cirugía Experimental, Facultad de Medicina, avenida Ramón y Cajal s/n, 47005, Valladolid, España.