Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos

Clonazepan: Estudio preclínico de una formulación nacional

Yalile Alfonso Valdés,¹ María del Carmen Ribas Avila,² Thais Ballenilla Rodríguez³ e Isabel María Guerra Sardiñas⁴

1. Licenciada en Ciencias Biológicas.
2. Licenciada en Ciencias Biológicas. Investigadora Agregada.
3. Licenciada en Ciencias Bioquímicas. Investigadora Auxiliar.
4. Técnico Medio en Química. Controlador C de la calidad.

RESUMEN

Se estudió comparativamente 2 formulaciones de clonazepán, la formulación nacional tabletas 1 mg lote 2003, en relación con el producto importado Rivotril^R 0,5 mg de La Roche lote 818997, España. Para ello se evaluó la actividad anticonvulsivante al inducir convulsiones por pentilentetrazol; y la coordinación motora y el efecto miorrelajante, mediante el método de varilla rotatoria en ratones albinos suizos en ambos casos, procedentes de la colonia del laboratorio Control Biológico. Los 2 productos resultaron activos frente a las convulsiones, siendo el nacional más potente que el importado; para los otros 2 parámetros no aparece diferencia significativa. De las formulaciones estudiadas, con el producto nacional se alcanzó un margen terapéutico superior.

Palabras clave: QUIMICA FARMACEUTICA; CLONAZEPAM/química; CARBOXYMETILCELULOSA/administración & dosificación; RATONES.

INTRODUCCION

El clonazepán pertenece al grupo de las benzodiazepinas, actúa sobre el sistema nervioso central como hipnosedativo, antiansioso, anticonvulsivante y miorrelajante.^1,2 Posee potente acción antiepiléptica,¹ acción tranquilizante manifestada por disminución de la actividad motora, ataxia, supresión de las respuestas incondicionadas de fuga y las respuestas condicionadas de evitación, así como relajación muscular.³ Su modo de acción es inhibir la propagación de las descargas cerebrales desde la zona epileptógena a las regiones corticales.¹ La absorción oral es rápida y aparece en sangre a los pocos minutos; la concentración plasmática alcanza el máximo entre 2 a 3 h.²

El objetivo de este trabajo es evaluar la actividad farmacológica y los efectos neurotóxicos del clonazepán nacional de 1 mg en relación con el Rivotril^R 0,5 mg de La Roche, España.

MATERIAL Y METODO

Actividad anticonvulsivante

Ratones albinos machos de 18 a 22 g, distribuidos en grupos de 10 con ayuna previa de 3 h. Se les adminitró por vía oral una suspensión en carboximetil celulosa al 0,25 % (usada en controles n=5) de las formulaciones de ensayo a las dosis de 0,015; 0,030; 0,045 y 0,060 mg/kg.

Transcurridos 20 min de la administración, se inyectó por vía subcutánea pentilentetrazol (125 mg/kg) para provocar convulsiones tónico-clónicas y muerte en el 100 % de los ratones.^4,5

Coordinación motora y efecto miorrelajante

Se utilizó una modificación del método de Coughenours et al.,⁶ cuyo principio es el método de la varilla rotatoria clásica. Ratones albinos hembras de 24 a 28 g, distribuidos en grupos de 8 y ayuna previa de 3 h, después de una semana de adaptación, se colocaron en las rejillas metálicas de un aparato similar al rotarod y se realizó un giro de 180 ? a 15 rev/min para determinar el número de animales que caen (efecto miorrelajante, tiempo de caída %) y el número que es incapaz de cruzar hacia el lado opuesto de la rejilla (coordinación motora, tiempo de trepado %) en la misma operación, en un tiempo de 60 s. La administración del producto fue por vía oral y las formulaciones se prepararon en suspensión en carboximetil celulosa al 0,5 % (usada en controles) a las concentraciones de 0,0125; 0,0250 y 0,0500 mg/mL a las dosis de 0,125; 0,250; 0,375; 0,500 y 1,0 mg/kg.

Procesamiento estadístico

Se calcularon mediante Probits⁷ la DE₅₀ (dosis capaz de proteger de la muerte al 50 % de los ratones inyectados) y las dosis tóxicas medias (DT₅₀) para los tiempos de caída y trepado. Además se estimó la potencia del producto nacional relativo al importado.

RESULTADOS Y DISCUSION

Actividad anticonvulsivante

Ambas formulaciones resultaron efectivas al proteger a los ratones (en un porcentaje proporcional al incremento de la dosis) de las convulsiones y de la muerte provocadas por el pentilentetrazol (figura 1); sin embargo, existe diferencia en la potencia anticonvulsivante en lo que se refiere a la protección de la muerte del clonazepán en relación con el Rivotril^R, siendo el primero más activo (tabla 1); esto puede atribuirse a que la disolución del Rivotril^R (80 % de la tableta se disuelve en 1 h) es más baja que la del clonazepán (85 % de la tableta se disuelve en 1 h), según evaluaciones realizadas en el laboratorio (datos no publicados).

TABLA 1. Estimado de la DE₅₀ para la prevención de la muerte provocada por las convulsiones inducidas por pentilentetrazol
 

	Dosis	Límites	Potencia
Tratamiento	(mg/kg)	(mg/kg)	(%)
Clonazepán	0,027	0,017-0,042	147,9
Rivotril^R	0,041	0,019-0,065

Coordinación motora y efecto miorrelajante

El clonazepán altera los indicadores de afectación motora estudiados, los que se expresan en función de la DT₅₀, estas afectaciones se incrementan proporcionalmente con la dosis, por lo que la curva dosis-respuesta cumple con la linealidad (figura 2). No se encontró diferencia significativa entre ambas formulaciones para los indicadores ensayados (tabla 2); con estos resultados se calculó el índice terapéutico, en relación con la actividad anticonvulsivante, y se encontró que los trastornos en la coordinación motora y efecto miorrelajante no se presentan en el rango de dosis donde se obtiene la respuesta anticonvulsiva, excepto para el tiempo de trepado en el Rivotril^R, donde el margen de seguridad es 8 veces mayor con respecto a la especie ensayada (tabla 3).

TABLA 2. Estimado de la DT₅₀ para los tiempos de caída y trepado

	Tiempo de caída		Tiempo de trepado
	DT50 Límites	Potencia	DT50 Límites	Potencia
Tratamiento	(mg/kg)	(%)	(mg/kg)	(%)
Clonazepán	0,40	0,31-0,67	0,38	0,28-0,57
		108,7		83,5
Rivotril^R	0,47	0,24-0,90	0,33	0,08-1,12

TABLA 3. Correlación entre las DT₅₀ (tiempo de caída y trepado) y la DE₅₀

	DE50	DT50	Margen  de seguridad
Tratamiento	(mg/kg)	(mg/kg)	DT/DE
Clonazepán	0,027	0,40	14,8
		(caída)
		0,38	14,0
		(trepado)
Rivotril^R	0,041	0,47	11,4
		(caída)
		0,33	8,0
		(trepado)

Se demuestra la actividad anticonvulsivante de las formulaciones estudiadas frente al pentilentetrazol, de manera que el clonazepán resultó más potente que el Rivotril^R; sin embargo, no se encontró diferencia en la afectación motora, alcanzándose con el clonazepán un margen terapéutico superior.

SUMMARY

A comparative study of 2 clonazepam formulations, the national formulation in tablets 1 mg, batch 2 003, and the Rivotril^R 0.5 mg imported from La Roche, batch 818 997, Spain, was carried out. Their anticonvulsant activity was evaluated by inducing convulsions with pentylenetetrazole; whereas the motor coordination and the myorelaxing effect were evaluated by using the rotatory rod method in Swiss albinic mice from the Biological Control Lab colony, in both cases. The two products were active to convulsions, but the national one was stronger than the imported one. No significant difference was observed in the other two parameters. Of the formulations studied a higher therapeutic margin was obtained with the national product.

Key words: CHEMISTRY; PHARMACEUTICAL; CLONAZEPAM/chemistry; CARBOXYMETHRYLCELLULOSE/administration & dosage; MICE.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Pinder RM, Brogden RN, Speight TM, Avery GS. Clonazepam. A review of its pharmacological properties and therapeutic efficacy in epilepsy. Drugs 1976;12:321.
2. Litter M. Farmacología experimental y clínica. 7 ed. Buenos Aires: El Ateneo, 1986;329-33.
3. Randall LO, Kappell B. Pharmacological activities of some benzodiazepines and their metabolites. New York: Raven, 1973;27.
4. Haigh JRM, Feely M, Gent PJ. Tolerance to the anticonvulsivant effect of clonazepam in mice no concurrent changes in plasma concentration. J Pharm Pharmacol 1986;38(12):931-4.
5. Tousch C. Epuisement d'effect du cours du traitement par le clonazepan. Sem Hop Paris 1973;49(Suppl):53.
6. Coughenours LL, Mc Lean JR, Parker RB. A New York device for the rapid measurement of impaired motorfunction in mice. Pharmacol Biochem Behav 1977:6:351-3.
7. Finney DJ. Probits analysis. 3ra ed. Cambridge: Cambridge University, 1971.

Recibido: 17 de agosto de 1995. Aprobado: 15 de octubre de 1995.

Lic. Yalile Alfonso Valdés. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. Ave. 26 No. 1605 entre Rancho Boyeros y Calzada del Cerro, municipio Plaza de la Revolución, Ciudad de La Habana, Cuba.