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Empresa Laboratorio Farmacéutico "Julio Trigo"

Desarrollo tecnológico y estudio de estabilidad del colirio de idoxiuridina 0,1 %

Martha Botet García,1 Caridad Margarita García Peña,2 Mirtha Castiñeira Díaz,3 María Aurora Barrios,3 Caridad Rodríguez Delgado4 y Vivian Martínez Espinosa5

Resumen

La idoxiuridina, que se asemeja a la timidina, inhibe la timidílico fosforilasa y las polimerasas específicas del ADN que son necesarias para la incorporación de la timidina en el ADN del virus. La idoxiuridina se incorpora en el ADN defectuoso que incapacita al virus, para infectar o destruir tejidos o para reproducirse. El objetivo del presente trabajo consistió en el desarrollo tecnológico de una formulación de idoxiuridina, para su administración por vía ocular, que cumple con todos los requisitos de calidad exigidos para el producto, como: características organolépticas, pH, valoración y esterilidad, con un tiempo de vida útil de 2 años, a temperatura de 2 a 8 oC, y que mantuvo invariables sus características físicas, químicas y microbiológicas durante el estudio de estabilidad realizado mediante el estudio de estabilidad acelerado a 25 oC y vida de estante de 2 a 8 oC, por espacio de 6 meses y de 24 meses, respectivamente.

Palablas clave: Idoxiuridina, formulación, estabilidad.

La idoxiuridina (figura) es el nombre genérico del principio activo, y el nombre químico, 2-dioxi-5-iodouridina, la fórmula global y el peso molecular son C9H11IN2O5 y 354,10 respectivamente. Se utiliza en el tratamiento de la queratitis, la queratitis metaherpética y otras erosiones corneales causadas por el virus del herpes simple.1,2

Fig. Estructura de la idoxiuridina.

Los colirios se utilizan por su efecto local, diagnóstico y terapéutico, y sirven para alcanzar una actividad farmacológica que se desarrolla tras la penetración de la sustancia medicamentosa en los tejidos circundantes pero, casi siempre, su efecto se limita a las estructuras oculares.3

La formulación que se producía en el país no contemplaba el empleo de un amortiguador de pH, y provocaba inestabilidad en el valor de pH de la formulación, por lo que se decide realizar la reformulación del producto incluyendo un buffer como regulador de pH, para contribuir a aumentar el tiempo de vida del producto terminado.4-6

El objetivo fundamental de este trabajo consistió en el desarrollo de una formulación de idoxiuridina para administración por vía ocular, estable física y químicamente, que permita sustituir la importación de este medicamento al introducir la tecnología de fabricación en la producción nacional con vistas a garantizar que se cubra la alta demanda nacional de estos en los centros hospitalarios del país.

Métodos

Para el desarrollo de la tecnología se utilizó un tanque reactor de acero inoxidable de 250 litros de capacidad, Seitz, D-6800 Mannheir, un tanque presurizador de acero inoxidable No.17 530 (5 L de capacidad) Sartorius, filtro Holder 16 277 (293 mm de diámetro). Sartorius Alemania, máquina conformadora, doisficadora y selladora Bottelpack, Typ 3012-099, Rommelag, balanza analítica Sartorius de sensibilidad 0,0001 g, medidor de pH digital modelo Termo Orion USA, Membrana filtrante de Nitrato de celulosa de 0,2 µ y 293 mm de diámetro. Sartorius, prefiltro de fibra de vidrio de 279 mm de diámetro. Sartorius., tubo de silicona 8,2, material: TECHNOSIL. 1139 Batch. No. 003983 Flexicon A/S* FREJASVEJ 2-6* DK-4100 RINGSTED, tubo de teflón 3/8, polietileno de baja densidad para extrusión y soplado de cuerpos huecos, tapas perforantes de polipropileno de alta densidad, prefabricadas en la máquina de inyección Boy 15 S en FRASPLAST.

Para el ensayo se empleo un Cromatógrafo Líquido de Alta Resolución KNAUER con detector UV/VIS (KNAUER) ajustado a 254 nm, un dosificador
(loop) de 20 µL e integrador (SHIMADZU CR 8 A). La separación se realizó isocráticamente sobre una columna Lichrospher 250 x 4 m, RP 18, 5 µm. La fase móvil utilizada consistió en una mezcla desgasificada de 2 componentes, metanol:agua (13:87), con una velocidad de flujo de 1,7 mL/min. Para el análisis se disolvió una cantidad exacta de la sustancia de referencia química en agua destilada, de modo que se obtuviera una solución con una concentración final de 400 µg/mL. Las muestras fueron preparadas de forma similar.

Desarrollo tecnológico

El colirio se elaboró en la Empresa Laboratorio Farmacéutico "Julio Trigo", con un contenido equivalente a 1,0 mg/mL de idoxiuridina, cloruro de benzalconio, fosfato de sodio monobásico dihidratado y fosfato de sodio dibásico anhidro. El material de envase empleado fue frasco de polietileno de baja densidad.

Todos los estudios se realizaron con el empleo muestras de 3 lotes a los cuales se les realizaron las pruebas de control químico y microbiológico de acuerdo con lo establecido en la monografía especializada (USP 26).7

Se analizaron todos los parámetros de calidad establecidos previamente para esta formulación (tabla I).

Estudio de estabilidad

Para realizar el estudio de estabilidad se empleó la técnica analítica descrita en la monografía USP-26, previamente validado, según lo reportado por García Peña, Caridad y otros, en la Revista Cubana de Farmacia. 2005, 39 (2); y se le determinaron los parámetros de desempeño y se emplearon en cada caso para la determinación de vida de estante o vida útil y de estabilidad acelerado. El estudio de estabilidad acelerado se realizó a 25 ºC, y se analizaron las muestras al inicio, al mes, 2, 3 y 6 meses; mientras que el estudio de estabilidad por vida de estante se efectuó a una temperatura de 2-8 ºC y se realizó el análisis al inicio, 3, 6, 9, 12, 18 y 24 meses. Se confeccionó un programa de muestreo periódico con el fin de evaluar las muestras sometidas a esa temperatura de trabajo a través del tiempo. Se observaron las características organolépticas, la valoración, el pH y la esterilidad mediante los estudios realizados.8,9

El estudio de esterilidad se determinó según lo establecido en el Laboratorio de Control Microbiológico del Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM), y se estableció como límite de aceptación la ausencia de microorganismos viables.

Resultados

Desarrollo tecnológico

A la formulación del colirio de idoxiuridina 1,0 mg/mL elaborada con los componentes descritos y cumpliendo con el procedimiento tecnológico, se le determinaron los requerimientos de control de la calidad para esta forma farmacéutica: características organolépticas, identificación, pH, valoración y esterilidad (tabla 1).

Tabla 1. Especificaciones de calidad de la formulación colirio de idoxiuridina 1,0 mg/mL

Especificación	Inicial	1 año	2 años	Límites
Descripción	Cumple	Cumple	Cumple	Líquido transparente e incoloro
Identificación	Cumple	Cumple	Cumple	El tiempo de retención de la muestra coincide con el tiempo de retención de la sustancia de referencia química
pH Escalado 1 Escalado 2 Escalado 3	5,79 5,84 5,77	5,96 5,94 5,94	5,95 5,93 5,91	4,5-7,0
Valoración (%) Escalado 1 Escalado 2 Escalado 3	98,1 101,4 106,0	96,4 99,5 103,9	94,6 97,9 101,0	90,00-110,0 %
Esterilidad	Cumple	Cumple	Cumple	Ausencia de microorganismos viables

Estudios de estabilidad

Con los estudios de estabilidad, por el método de vida útil, se pudo establecer el tiempo de estabilidad y las condiciones de almacenamiento (iluminación y temperatura).

Los resultados de este estudio se corroboran además por los resultados de los estudios de estabilidad acelerada (tabla 2), mientras que los resultados del estudio de estabilidad por vida de estante se pueden apreciar en la tabla 3.

Tabla 2. Resultados de los ensayos realizados para el estudio de estabilidad acelerado

Especificación	Inicial	1 mes	2 meses	3 meses	6 meses
Descripción	Cumple	Cumple	Cumple	Cumple	Cumple
Identificación	Cumple	Cumple	Cumple	Cumple	Cumple
pH Escalado 1 Escalado 2 Escalado 3	5,79 5,84 5,77	5,78 5,77 5,76	5,84 5,84 5,86	5,77 5,78 5,80	5,85 5,86 5,82
Valoración (%) Escalado 1 Escalado 2 Escalado 3	98,1 101,4 106,0	95,3 97,6 105,3	95,0 97,4 103,8	95,0 97,2 103,4	94,4 94,8 102,5

 Tabla 3. Resultados de los ensayos realizados para el estudio de estabilidad por vida de estante

Especificación	Inicial	3 meses	6 meses	9 meses	12 meses	18 meses	24 meses
Descripción	Cumple	Cumple	Cumple	Cumple	Cumple	Cumple	Cumple
Identificación	Cumple	Cumple	Cumple	Cumple	Cumple	Cumple	Cumple
pH Escalado 1 Escalado 2 Escalado 3	5,79 5,84 5,77	5,80 5,81 5,78	5,70 5,71 5,74	5,67 5,65 5,65	5,96 5,94 5,94	5,75 5,77 5,80	5,95 5,93 5,91
Valoración (%) Escalado 1 Escalado 2 Escalado 3	98,1 101,4 106,0	97,6 101,0 105,4	97,4 100,6 105,0	96,9 100,2 104,4	96,4 99,5 103,9	95,9 98,4 102,9	94,6 97,9 101,0

Discusión

Desarrollo tecnológico

Las formulaciones desarrolladas y evaluadas cumplen con las especificaciones de calidad descritas en la Farmacopea USP y reportadas en la tabla 1, para el producto terminado; se observa además una buena reproducibilidad tecnológica en cada ensayo realizado.10

Estudio de estabilidad

En todas las formulaciones estudiadas el tiempo de vida útil fue superior a los 2 años y las especificaciones de calidad se encontraron dentro de los límites establecidos. Las características organolépticas permanecieron inalterables para el tiempo de experimentación, lo que permitió establecer las condiciones de almacenamiento; se comprobó que la luz no ejerce ninguna influencia sobre el producto terminado.11 Los parámetros de valoración y de pH se encontraron dentro de los límites establecidos para el producto terminado.

Los estudios de estabilidad acelerada reportaron que en ninguno de los lotes estudiados se tiene una pérdida mayor al 10 % de la potencia inicial para cada una de las variantes recomendadas por el Centro para el Control Estatal de los Medicamentos (CEDMED), a fin de realizar estudios de estabilidad acelerados. Los otros parámetros evaluados se encontraron dentro de los límites establecidos en el tiempo de duración del estudio.12

Los resultados del estudio de estabilidad realizado tanto por vida de estante como acelerado demostraron que los valores de pH se encuentran dentro del límite establecido en las especificaciones de calidad del producto terminado, de manera que se solucionó el problema de inestabilidad de pH del colirio de idoxiuridina que fue objeto de la reformulación, con el objetivo de mejorar la calidad del producto que existía en al industria hasta estos momentos.

Summary

Technological development and study of 0.1 % Idoxuridine (eyedrops)

Idoxyuridine just like the Thymidine, inhibits thymidyl-phophorylase and DNA-specific polymerases, needed for Thymidine incorporation in virus-DNA. Idoxyuridine, added to defective DNA, renders unfit virus to infect or destroys tissues or for its reproduction. Aim of present paper was achieve technological development of a Idoxyuridine-formulation administered by ocular route, which meet all quality criteria called for the product, e.g. organoleptic features, pH, assessment and sterility, a 2 years useful lifetime, temperature of 2-8 °C, and with its invariable physical, chemical and microbiologic features over stability study performed by means of accelerated stability study to 25 °C, and support-life of 2-8 °C during 6 months and 24 months, respectively.

Key words: Idoxyuridine, formulation, stability.

Referencias bibliográficas

1. Vademécum Internacional. Especialidades farmacéuticas y biológicas. 7ma ed. Buenos Aires: ECSA; 2001. p. 256-75.

2. The Index Merck. An Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and Biologicals. 12 ed. Rahway: Merck; 996.

3. Faulí, Trills. Tratado de Farmacia Galénica. Madrid. 2004. p. 124-236.

4. Aulton ME. Pharmaceutics. The Science of Dosage Form Design. New York: Churchill Livingston; 2000.

5. Remington: The Science and Practice of Pharmacy. 20th ed. Philadelphia: Philadelphia Collage of Pharmacy and Science; 2000. p. 829-56.

6. Ansel, HC, Allen, LV, Popovich NG. Pharmaceutical Dosage Forms and Drugs Delivery. 7ma ed. New York: Lippincutt Williams. E. Wilkins; 1999. p. 469.

7. United State Pharmacopeia Convention 26 and National formulary XVII. United State Pharmacopeia. Rockville: Marck Printing; 2004.

8. ICH/CPMP/380/95. Guidance on stability testing of new drug active substance and medicinal products: Maxium shelf-life for sterile products alter first opening or following reconstitution. Londres. 1996.

9. García Peña C. Validación de los métodos analíticos para el control de la calidad y el estudio de estabilidad del colirio de idoxiuridina 0,1 %. Revista Cubana Farm 2005;39(2). Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_issuetoc&pid=0034-751520050002&lng=es&nrm=iso

10. Iraizoz, A. Conferencias de Tecnología Farmacéutica II. La Habana: Universidad de La Habana; 1990. p. 162-268.

11. Guidelines for stability testing of Pharmaceutical products containing well establish drug substance in conventional dosage forms. Expert Committee on Specifications for Pharmaceutical Preparations, Thirty-first Report. Thecnical Report . Ginebra: WHO; 1996.

12. Resolución 16-2000. Requerimientos de los estudios de estabilidad para el registro de productos farmacéuticos nuevos y conocidos. La Habana: Centro Estatal para el Control de Medicamentos (CECMED); 2000.

Recibido: 8 de enero de 2007.  Aprobado: 9 de febrero de 2007.
MC. Martha Botet García. Empresa Laboratorio Farmacéutico "Julio Trigo". Avenida Independencia km 7,5, Boyeros, La Habana, Cuba.

1 Master en Ciencia, Tecnología y Control de Medicamentos. Empresa Laboratorio Farmacéutico "Julio Trigo".
2 Master en Ciencia, Tecnología y Control de Medicamentos. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM).
3 Doctora en Ciencias Farmacéuticas. Universidad de La Habana-Instituto de Farmacia y Alimentos (UH-IFAL).
4 Técnica en Análisis Químico. Empresa Laboratorio Farmacéutico "Julio Trigo".
5 Técnica en Tecnología Farmacéutica. CIDEM.