Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" (IPK)

Reporte cubano del comportamiento de las inmunoglobulinas M, G y A en el curso de la infección por VIH y su relación con el conteo absoluto de linfocitos T CD4+

Dr. Alejandro Álvarez García, Lic. Liliana Pérez Toledo, Lic. Lucía Díaz Pérez, Lic. Randelys Molina Castro y Téc. Yondel Torranzo Soto

Resumen

Con el objetivo de evaluar el comportamiento de las inmunoglobulinas (lgs) en pacientes VIH+ y su utilidad como marcadores evolutivos de la progresión de dicha infección, se cuantificaron las lgM, lgG e IgA en sueros de pacientes seropositivos y la subpoblación linfoide T CD4+. La población estudiada fue dividida en 3 grupos de 50 individuos, acorde con el conteo absoluto de linfocitos T CD4+: grupo 1 (³ 500 cel/µL), grupo 2 (200 a 499 cel/µL) y grupo 3 (<200 cel/µL). En el estudio se observó un incremento de los niveles de lgs entre los grupos estudiados al disminuir el número de linfocitos T CD4+. La media de los valores del lgM se encontraba dentro del rango de valores normales para los 3 grupos de pacientes, la de los valores de lgG estaba por encima del rango normal en los 3 grupos de estudio y la de lgA sobrepasaba los normales solo en el grupo 3, lo cual es útil como indicador de estadio de la infección. Se observó una relación directa entre el aumento de las lgs, así como una inversa entre estas y el conteo absoluto de linfocitos T CD4+.

DeCS: IGM/análisis; IGG/análisis; IGA/análisis; VIH; LINFOCITOS T CD4-POSITIVOS; SINDROME DE INMUNODEFICIENCIA ADQUIRIDA.

La infección por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) causa gradualmente importantes anormalidades en el sistema inmunitario del hospedero, las que conducen, en la mayoría de los casos, al desarrollo del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Esta infección afecta virtualmente a todos los componentes del sistema inmune y principalmente a su elemento orquestador, el linfocito T CD4+.1,2

Con posterioridad a la fase aguda de la infección por VIH, aparece una hipergammaglobulinemia y una hiperactivación de los linfocitos B. La hipergammaglobulinemia involucra a todas las inmunoglobulinas (Igs). Al inicio de la infección, la gran mayoría corresponde a la respuesta de anticuerpos específica contra los antígenos del VIH.1,3 La habilidad de responder específicamente contra el VIH se va perdiendo en el transcurso de la infección como consecuencia, en parte, de la pérdida de los linfocitos T CD4+ cooperadores. Se produce un aumento del patrón de linfocitos CD4+ Th2 (estimulador de la secreción de Igs), con respecto al de los linfocitos CD4+ Th1 (favorecedor de una respuesta inmune a predominio celular) presente en los inicios de la infección.3-6

En Cuba no se han reportado estudios que describan el comportamiento de las Igs en el curso de la infección por VIH, ni su asociación con los indicadores de progresión de la infección.

Actualmente, los marcadores evolutivos de la infección por VIH más útiles son, el conteo de linfocitos T CD4+ y la carga viral. No obstante, el alto costo de esta última imposibilita su realización a todas las personas infectadas por VlH.5,6

Algunos estudios han demostrado que la utilización combinada de diversos marcadores inmunológicos y serológicos, incrementa el valor predictivo de cada uno de ellos.5 Varios investigadores han evaluado las variaciones séricas de Igs en grupos específicos de pacientes VIH+ y, en ocasiones, han determinado ciertas correlaciones entre estas y la progresión de la enfermedad.6-9

La identificación de marcadores de laboratorio capaces de predecir la progresión clínica de la infección por el VIH, constituye un importante eslabón para la rápida instauración de medidas profilácticas y terapéuticas, así como para el monitoreo y evaluación de la eficacia de un tratamiento antivírico.10,11

Teniendo en cuenta estos precedentes, nos propusimos describir las variaciones de las Igs (M, G y A) y su asociación con el conteo absoluto de células T CD4+, en un grupo de pacientes VlH seropositivos (VlH+) cubanos, así como de evaluar su empleo como marcadores evolutivos en la progresión de la infección.

Métodos

Población estudiada

Se estudió un total de 150 individuos VIH seropositivos (VIH+) seleccionados al azar, provenientes del IPK y del Sanatorio de Santiago de las Vegas, que acudieron al labotatorio clínico del IPK realizarse determinaciones de rutina para estos casos: hemoglobina, hematócrito, eritrosedimentación, conteo de linfocitos CD4+, LDH, glicemia, creatinina, TGP, TGO y leucograma con diferencial. Dichos pacientes se dividieron en 3 grupos de 50 individuos, de acuerdo con el conteo absoluto de células T CD4+: grupo 1³ 500 cel/µL, grupo 2 de 200 a 499 cel/µL y grupo 3<200/µL.

Colección de la muestra

Se extrajeron 4 mL de sangre periférica: 2 mL fueron colectados en tubos Vacutainer (Becton Dickinson VACUTAINER Systems Franklin Lakes, NJ) con EDTA K3 para la obtención de los valores absolutos de linfocitos y la cuantificación de la subpoblación linfocitaria T CD4+; a partir de los 2 mL restantes se obtuvo suero que se empleó en determinaciones hemoquímicas de rutina, y el restante se almacenó en el banco de suero del laboratorio clínico, a -70 °C (congelador CFCFree; Sanyo) hasta ser empleado en la cuantificación de IgM, IgG e IgA.

Cuantificación de subpoblación linfoide T CD4+

Los valores relativos de linfocitos T CD4+ se cuantificaron por técnicas de citometría de flujo para triple marcaje,12 usando anticuerpos monoclonales de Becton Dickinson (anti CD3, CD45, CD4) y se analizaron en un citómetro de flujo FACScan (Becton Dickinson). Los valores absolutos de linfocitos T CD4+ se determinaron a partir del conteo global de linfocitos, que fue obtenido mediante el analizador hematológico de 18 parámetros (COBAS MICROS; Roche).

Cuantificación de Igs

Los niveles séricos de IgM, IgG e IgA se determinaron mediante un ensayo inmunoturbidimétrico comercializado por Boehringer Mannheim, Roche Diagnostic GmhH-D-68298, Mannheim, Alemania, mediante un analizador automático (BM/Hitachi 704). Se tomaron como valores normales, los recomendados en el estuche diagnóstico (referencia internacional).

Análisis estadístico

Se aplicó el test de Kolomogorov-Smirnov para el análisis de la normalidad de las variables (niveles de Igs y conteo global de linfocitos T CD4+). Se determinó la media y la desviación estándar de los valores de las Igs para cada grupo de pacientes estudiado. Se confeccionaron gráficos de cajas y bigotes para representar estos estadígrafos. Se utilizó el test de Kruskal-Wallis para comparar los niveles de Igs en los diferentes grupos de pacientes. Se determinó el coeficiente de correlación de Spearman entre los valores de las Igs y, entre estos y el conteo absoluto de linfocitos T CD4+.

Resultados

El análisis de normalidad de las variables mostró que solo los valores de IgA tenían un comportamiento normal, por lo que fueron usados métodos no paramétricos para el análisis de los resultados.

La media de los valores de IgM se encontraba dentro del intervalo normal para los 3 grupos de pacientes, aunque se observó un incremento significativo (p < 0,05) de los valores de IgM desde el grupo 1 al 3, o sea, al disminuir el conteo absoluto de linfocitos T CD4+ [p entre grupo 1 y 2 (p 1-2 = 0,0232; p 2-3 = 0,6952; p 1-3 = 0,0008)] (fig. 1).

Fig.1. Media y desviación estándar de los niveles séricos de lgM en los grupos de pacientes infectados por VIH. Grupo 1 (n=50):³ 500 células T CD4+/mm3; grupo 2 (n=50): de 200 a 499 células T CD4+/mm3; grupo 3(n=50): < 200 células T CD4+/mm3.

La media de los valores de IgG estaba por encima del intervalo normal en los diferentes grupos. Los valores de IgG al igual que los de IgM, mostraron un aumento significativo al decrecer el conteo de linfocitos T CD4+ (p 1-2 = 0,2488; p 2-3 = 0,0321; p 1-3 = 0,0043) (fig. 2).

Fig.2. Media y desviación estándar de los niveles séricos de lgG en los grupos de pacientes infectados por VIH. Grupo 1 (n=50):³ 500 células T CD4+/mm3; grupo 2 (n=50): de 200 a 499 células T CD4+/mm3; grupo 3 (n=50): < de 200 células T CD4+/mm3.

Los valores de IgA, en los diferentes grupos, igualmente muestran un incremento significativo en la medida que disminuye el conteo de linfocitos T CD4+ (p 1-2 = 0,0005; p 2-3 = 0,2772; p 1-3 = 0,0000). Solo en el grupo 3, la media estaba por encima del intervalo normal, a diferencia de la de los grupos 1 y 2 (fig. 3).

Fig. 3. Media y desviación estándar de los niveles séricos de lgA en los grupos de pacientes infectados por VIH. Grupo 1 (n=50):³ 500 células T CD4+/mm3; grupo 2 (n=50) de 200 a 499 células T CD4+/mm3; grupo 3 (n=50): < 200 células T CD4+/mm3.

El análisis estadístico en la comparación de cada par de grupos, demostró diferencias significativas (p < 0,05) en las 3 clases de inmunoglobulinas estudiadas.

Como se muestra en la tabla, se observó una relación directa entre las Igs estudiadas, así como una relación inversa entre estas y el conteo absoluto de linfocitos T CD4+.

Tabla. Coeficiente de correlación de Spearman (R) entre las variables

Variables	IgM	IgG	IgA	CGLCD4
IgM		R = .341129 p = .001001	R = .364383 p = .000414	R=-.300471 p = .000414
IgG			R = .299237 p = .004169	R =-289199 p = 005700
IgA				R = -.543138 p = .000000
CGLCD4

CGLCD4: conteo global de linfocitos T CD4+.
R significativo cuando p < 0,05.

Discusión

En este trabajo se estudiaron las variaciones séricas de las Igs M, G y A en el curso de la infección por VlH y su relación con el conteo de linfocitos T CD4+.

El incremento de las Igs séricas (significativo para p < 0,05) entre los 3 grupos de pacientes estudiados al disminuir el número de linfocitos T CD4+, concuerda con lo reportado en la literatura consultada a que se hace referencia al inicio de este trabajo.1,3,4 Es necesario señalar que la literatura revisada adolece de estudios recientes con dicha temática.

Otros factores involucrados en la activación policlonal de los linfocitos B son:

• La replicación del VlH en monocitos y macrófagos que induce la producción de IL-6, potente activador de células B.4,13
• La activación de infecciones latentes como las de los virus Epstein Barr y citomegalovirus, potentes activadores de las células B como consecuencia de la disminución de los linfocitos T CD4+.13
• La acción de superantígeno de la glicoproteína (gp) 160 del VIH sobre los linfocitos B.14-16
• Los inmunocomplejos formados por los altos niveles de Igs en el suero, que hacen que en el proceso de solubilización mediando C3, se genere C3b y C3d. Estos ligandos del CR2 presente en las células B, al interactuar, generan la activación de éstas; además, la interacción de los inmunocomplejos circulantes expresando C3d con CR2 podría tener un efecto sinérgico en la estimulación de células B.17-19

Consideramos que el incremento en los niveles séricos de IgM, IgG e IgA, está influenciado, además, por la respuesta específica de anticuerpos que se produce contra las proteínas virales en los comienzos de la infección5 en los estadios más avanzados, la hiperactivación de los clones de memoria contra diferentes agentes patógenos como Toxoplasma gondii, Citomegalovirus, Herpesvirus, Epstein Barr Virus, pudieran estar incidiendo también.13

La activación crónica del sistema inmune, así como el incremento en la secreción de citoquinas estimuladoras de la síntesis de IgA, al disminuir el número de linfocitos T CD4+, nos explicaría el aumento de los niveles de IgA en el grupo 3 por encima del intervalo normal.7,20 Es por ello, que el valor de IgA podría ser utilizado como indicador del estadio de la infección por VIH y en el establecimiento del estado inmunológico del paciente.

La relación directa encontrada entre las Igs (tabla) evidencia la activación policlonal que se produce en los linfocitos B en el curso de la infección por VIH. Por otra parte, la relación inversa entre los niveles de linfocitos T CD4+ y las Igs (tabla), corrobora lo expuesto anteriormente en relación con el desencadenamiento de factores que contribuyen a la activación policlonal de las células B al disminuir el número de linfocitos T CD4+.

Dado el comportamiento no normal de las Igs, no fue posible el uso de estudios de regresión para la evaluación de estas como predictoras de los valores absolutos de linfocitos T CD4+. No obstante, esta investigación nos permitió describir el comportamiento de las Igs en un grupo de pacientes VIH/SIDA en Cuba.

Summary

To evaluate the behaviour of immunoglobulins (Igs) in HIV-positive patients and their usefulness as markers of the progression of the infection, IgM, IgG and IgA were quantified in sera from seropositive patients and the CD4+ T lymphoid subpopulation. The studied population was divided into 3 groups of 50 individuals according to the absolute CD4+ T lymphocyte count: group 1 (³ 500 cel/µL), group 2(200 a 499 cel/µL) and group 3 (<200 cel/µL). It was observed in the study that the levels of immunoglobulins increased as the number of CD4+ T lymphocytes reduced. The mean of IgM values was within the range of normal values for the 3 groups of patients; the mean of IgG values was over the normal range in the 3 study groups whereas that of the IgA values was over the normal ones only in group 3, which is a useful indicator of the infection staging. Also, a direct relation was observed in the increase of immunoglobulins but there was a reverse relation between Igs and the absolute CD4+T lymphocyte count.

Subject headings: IGM /analysis; IGG/analysis; IGA/analysis; HIV; CD4-POSITIVE LYMPHOCYTES; ACQUIRED IMMUNODEFICIENCY SYNDROME.

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Recibido: 14 de marzo del 2002. Aprobado: 25 de junio del 2002.
Dr. Alejandro Álvarez García. Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kouri". Apartado 601, Marianao 13, Ciudad de la Habana, Cuba. Tel. [phone]. e-mail: [e-mail].