Instituto de Hematología e Inmunología

Aplicación de la citometría de flujo en el diagnóstico inmunológico de los linfomas  cutáneos T

Application of flow cytometry in the immunological diagnosis of cutaneous T-cell lymphomas

Lic. Berta Beatriz Socarrás Ferrer,1 Lic. Lázaro O. del Valle Pérez,1 Dra. Vianed Marsán Súarez,1 Dra. Miriam Sánchez Segura,1 Lic. Ruby Alonso Ramírez2 y DraC. Consuelo Macías Abraham 2

1Instituto de Hematología e Inmunología. La Habana, Cuba
2Centro de Inmunología Molecular. La Habana, Cuba

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Resumen

Se comunican las características inmunofenotípicas de 7 pacientes (5 del sexo masculino y 2 del femenino) con el diagnóstico clínico-morfológico de linfomas cutáneos de células T, atendidos en la consulta de Hematología del Instituto de Hematología e Inmunología. La edad de los pacientes osciló entre 17 y 88 años. El inmunodiagnóstico se realizó por inmunofluorescencia directa, con un panel de anticuerpos monoclonales que incluyó marcadores linfoides B y T: CD2, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, CD19, CD22 y CD25. La lectura se realizó en un clitómetro de flujo FaCScan (Becton-Dickinson). Cada marcador se consideró positivo si un porcentaje mayor al 20 % de los linfocitos expresaba el antígeno. Nuestros resultados mostraron que en la mayoría de los pacientes predominó el patrón general de los linfocitos T con función auxiliadora (CD3+, CD4+, CD8-). Se  corrobora que la citometría de flujo es un procedimiento más rápido y menos laborioso que otros métodos de inmunofenotipaje celular, que nos permite un diagnóstico de certeza y la aplicación de una terapia efectiva.

Palabras clave: linfomas cutáneos T, citometría de flujo.

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Summary

The immunophenotypic characteristics of 7 patients (5 males and 2 females) with the clinical-morphological diagnosis of cutaneous T-cell lymphoma that received attention at the Hematology service of the Institute of Hematology and Immunology were reported. The patients were between 17 and 88 years old. The immunodiagnosis was made by direct immunofluorescence with a panel of monoclonal antibodies that included B and T lymphoid markers: CD2, CD3, CD4; CD5, CCD7, CD8, CD19, CD22 and CD25.   The reading was obtained in a FaCScan (Becton-Dickinson) flow cytometer. Every marker was considered positive if a percentage over 20 % expressed the antigen. Our results showed the prevalence of the general pattern of T lymphocytes with auxiliary function (CD3+, CD4+, CD8-). It was proved that flow cytometry is a faster and less laborious than other methods of cellular phenotyping, allowing an accurate diagnosis and the application of an effective therapy.

Key words: Cutaneous T-cell lymphomas, flow cytometry.

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Los linfomas cutáneos (LC) son procesos linfoproliferativos malignos cuyo órgano diana es la piel. Según su origen, se clasifican en T o B.1-3 La incidencia global de los linfomas cutáneos de células T (LCCT) es de alrededor de 0,36 casos por 100 000 habitantes al año, lo que constituye una proporción pequeña dentro de los linfomas no hodgkinianos.4,5 Estas neoplasias aparecen fundamentalmente entre los 45 y los 65 años y son 2,2 veces más frecuentes en el sexo masculino que en el femenino. Las presentaciones clínicas más reportadas son la micosis fungoides (MF) y el síndrome de Sézary (SS).5-9

 La MF es la forma más común de LCCT y, a la vez, es la que presenta mayores dificultades diagnósticas, particularmente en la fase inicial de su desarrollo. Su incidencia es de 0,29 casos por 100 000 habitantes al año y su etiopatogenia se desconoce.10,11

Por otro lado, el síndrome de Sézary, es considerado como la expresión leucemizada de la MF; se caracteriza por eritrodermia, poliadenopatías y elevado número de linfocitos atípicos en sangre periférica (células de Sézary). Otras manifestaciones clínicas que se pueden presentar son: hiperpigmentación progresiva, hiperqueratosis palmoplantar y la pérdida  de pelos y uñas.3,12

Tradicionalmente, el diagnóstico de cualquier lesión cutánea está basado en criterios clínicos e histopatológicos. Ninguno de estos criterios es absoluto, de ahí que se destaque la trascendencia de los estudios citogenéticos, inmunológicos y moleculares para un diagnóstico de certeza y pronóstico de la enfermedad, por lo que nos propusimos aplicar la citometría de flujo para el inmunodiagnóstico de 7 pacientes con LCCT atendidos en la consulta de Hematología del Instituto de Hematología e Inmunología.

Métodos

Se estudiaron 7 pacientes (5 del sexo masculino y 2 del femenino), con un rango de edad que osciló entre 17 y 88 años, con diagnóstico clínico-morfológico de LCCT. Las muestras se obtuvieron de sangre periférica y se depositaron en tubos con EDTA al 10 %.

Marcadores inmunológicos

El estudio inmunofenotípico se realizó por un método de inmunofluorescencia directa con un panel de anticuerpos monoclonales (AcMo) que detectan antígenos en linfocitos B y T. El análisis se realizó por citometría de flujo en un FaC Scan (Becton-Dickinson, EE.UU.) mediante el examen de la reacción con los AcMo en la ventana de la población linfoide.13 El panel utilizado incluyó: CD2, CD3,  CD4, CD5, CD7, CD8, CD19, CD22 y CD25. Algunos AcMo estaban conjugados con ficoeritrina (RPE) y otros con isotiocianato de fluoresceína (FITC) (tabla 1). Todas las muestras fueron fijadas con una solución de paraformaldehído al 1 %. La lectura se realizó mediante la adquisición de 10 000 células en cada tubo. Cada marcador se consideró positivo si un porcentaje superior al 20 % de los linfocitos expresaban el antígeno.

Tabla 1. Panel de anticuerpos monoclonales (AcMo) utilizados en la citometría de flujo  

Antígeno	Clon	Productor
CD2 RPE	T11	Coulter
CD3 FITC	UCHT1	Dako
CD4 FITC	Leu-3A	Becton-Dickinson
CD5 RPE	DK 23	Dako
CD7 RPE	3 A1	Coulter
CD8 RPE	DK25	Dako
CD19 RPE	Leu-12	Becton-Dickinson
CD22 RPE	4KB 128	Dako
CD25 RPE	IL-2R	Becton-Dickinson

Resultados

La distribución de los casos diagnosticados con LCCT se describe en la tabla 2. En la mayoría de los pacientes predomina el patrón general de los linfocitos T con función auxiliadora CD3+, CD4+, CD8-  (71,40 %). En la minoría (1 paciente) se expresan los marcadores con función citotóxica CD3+,  CD4-, CD8+  (14,3 %). Un caso diagnosticado con SS mostró predominio de linfocitos T CD4+ (14,3 %).  

Hay otros marcadores con fines diagnósticos de células T como CD5 y CD7, que fueron variablemente positivos. Los marcadores B (CD19, CD22) y el de activación CD25 resultaron negativos en la población celular T.

Tabla 2. Inmunofenotipaje celular en los linfomas cutáneos T

Formas clínicas	Marcadores de membrana (distribución por paciente)
	CD2	CD3	CD4	CD5	CD7	CD8	CD19	CD22	CD25	%
MF (predominio C50D4+)	7/5	7/5	7/5	7/3	7/1	7/0	7/0	7/0	7/0	71,4
MF (predominio CD8+	7/1	7/1	7/0	7/0	7/1	7/1	7/0	7/0	7/0	14,3
SS Predominio CD4+ >90 %	7/1	7/1	7/1	7/1	7/0	7/0	7/0	7/0	7/0	14,3

MF: micosis fungoides; SS: síndrome de Sézary.

Discusión

Los LCCT constituyen un grupo de enfermedades neoplásicas caracterizados por infiltrados de células T malignas. Dentro de estos se encuentran la MF y el SS, que son entidades que aunque difieren en sus manifestaciones clínicas, se cree que son variantes de un mismo trastorno linfoproliferativo del linfocito T CD4.

El estudio inmunofenotípico en sangre periférica mostró la presencia de linfocitos T con predominio de T cooperadores CD3+, CD4+, CD8,  y en el caso del paciente con SS se apreciaron cifras de CD4 superiores al 90 % y disminución de las células CD3. Estos resultados corroboraron lo planteado por otros investigadores.4,5,14

Un adecuado tratamiento depende de un diagnóstico de certeza morfológico, citogenético, inmunológico y molecular. En la actualidad se utiliza la aplicación intravenosa de anticuerpos monoclonales contra antígenos de diferenciación de células T y se trabaja en proposiciones experimentales para el tratamiento de los linfomas cutáneos que incluyen vacunación, terapia génica y trasplante antólogo de células madre,15,16 lo que permitiría una rápida curación, una mayor sobrevida y la incorporación de estos individuos a la vida útil de la sociedad.

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Recibido: 15 de agosto del 2007. Aprobado:25 de agosto del 2007.
Lic. Berta Beatriz Socarrás Ferrer. Instituto de Hematología e Inmunología. Apartado 8070, Ciudad de La Habana, CP 10800, Cuba. Tel [phone],  6438695, 6434214, Fax [phone]. e-mail: [e-mail]