ARTÍCULO ORIGINAL

 

Efecto in vitro de la Matricaria recutita L. sobre la respuesta de linfocitos y neutrófilos

 

In vitro effect of Matricaria recutita L. on Lymphocytes and Neutrophils response

 

Lic. Lázaro del Valle-Pérez, DraCs. Consuelo Macías-Abraham, Lic. Bertha Beatriz Socarrás-Ferrer, Dra. Vianed Marsán-Suárez, Dra. Miriam Sánchez-Segura, Lic. Lourdes Palma-Salgado, Dra. Rosa María Lam-Díaz

Instituto de Hematología e Inmunología. La Habana, Cuba.

 

 

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RESUMEN

La manzanilla de Castilla, dulce o cimarrona (Matricaria recutita o Matricaria chamomilla), es una planta herbácea anual de la familia de las asteráceas, nativa de Europa y de regiones templadas de Asia, que se ha naturalizado en algunas regiones de América, África y Australia. Ha sido utilizada por el hombre desde hace miles de años con diferentes fines medicinales. Se estudió el efecto in vitro de un extracto fluido de esta planta sobre los linfocitos de 20 donantes voluntarios de sangre y de 20 enfermos con diagnóstico de inmunodeficiencia celular, mediante la cuantificación de los linfocitos T por las técnicas de formación de roseta espontánea y activa y el ultramicrométodo inmunocitoquímico (UMICIQ), así como la función fagocítica (índice opsonofagocítico) de los neutrófilos. No se hallaron diferencias estadísticamente significativas en los parámetros estudiados entre las condiciones experimentales con Matricaria y sin esta.

Palabras clave: Manzanilla, Matricaria recutita L., roseta activa y espontánea, índice opsonofagocítico, UMICIQ, CD2, CD3.

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ABSTRACT

Castilla Chamomile, sweet, or maroon (Matricaria recutita or Matricaria chamomilla) is an annual herbaceous plant of the Asteraceae family, native to Europe and temperate zones of Asia, which has become naturalized in parts of America, Africa, and Australia. It has been used by man for thousands of years with different medicinal purposes. We studied the in vitro effect of an extract fluid of this plant on lymphocytes from 20 blood donors and 20 patients with a diagnosis of cellular immunodeficiency. We quantified T lymphocytes by the techniques of spontaneous and active rosette formation, and the immunocytochemical ultramicromethod (UMICIQ) as well as the phagocytic function (opsonophagocytic index) of neutrophils. There were no statistically significant differences in the studied parameters between experimental conditions with Matricaria and without it.

Key words: Chamomile, Matricaria recutita L., spontaneous and active rosette, opsonophagocytic index, UMICIQ, CD2, CD3.

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INTRODUCCIÓN

La manzanilla de Castilla, dulce o cimarrona (Matricaria recutita o Matricaria chamomilla) (MR), es una planta herbácea anual de la familia de las asteráceas, nativa de Europa y de regiones templadas de Asia y se ha naturalizado en algunas regiones de América, África y Australia. Es una planta con tallo cilíndrico, erguido, ramoso, de hasta 50 o 60 cm de altura. Presenta hojas alternas y sésiles. En posición terminal, presenta en verano una inflorescencia en forma de capítulo paniculado. Las flores radiales son unas 20, con la lígula blanca, mientras que las del disco son numerosas, hermafroditas; el receptáculo es hueco y carece de escamas. Las flores son un poco amargas y fragantes. Desde hace miles de años, ha sido utilizada por el hombre con diferentes fines medicinales.^1,2

Se emplea medicinalmente como antiinflamatoria, antiespasmódica ansiolítica sin relajación muscular. El aceite esencial se halla entre el 0,4 y el 1,0 % de la planta fresca. Contiene sesquiterpenoides (1-alfa-bisabolol y derivados: bisabolóxidos A, B y C, bisabonolóxido A), antecotulide, camazuleno, lactosas sesquiterpénicas, carburos terpénicos, (cadineno, cis-espiro-éter y trans-espiro-éter, farneseno), flavonoides (apigenina, luteolina, quercetina y patuletina), cumarinas (dioxicumarina, herniarina, umbeliferona), resinas (triacontano, fitosterina), ácido valeriánico y fenoles.^2-10

Se ha informado en la literatura médica de una serie de efectos beneficiosos de la MR en animales y en ensayos in vitro, pero los ensayos clínicos en humanos deben continuarse para llegar a resultados concluyentes.¹¹

La MR llegó a Cuba como droga seca desde Europa hasta que en 1939, el sabio botánico Juan Tomás Roig inició su cultivo de forma experimental para su posterior cultivo en la isla. La MR ha sido empleada en la fabricación de cosméticos, jabones, champús y tintes, a los que añade sus propiedades específicas, sus potencialidades colorantes y bactericidas. Puede provocar dermatitis de contacto en personas sensibles y se han informado casos de anafilaxis entre alérgicos, así como interacciones con la warfarina.^1,12-14

Los estudios de respuesta de genotoxicidad en ensayos in vivo e in vitro con la MR han sido negativos.¹⁵

La MR aparece entre las especies de plantas medicinales aprobadas por el Ministerio de Salud Pública de Cuba y se le reconocen propiedades terapéuticas como sedante, antiinfeccioso, antifúngico y antiinflamatorio, tanto en aplicación tópica como oral.²

Este trabajo se realizó para determinar el efecto in vitro de una tintura de MR sobre los linfocitos y neutrófilos humanos en individuos sanos y con diagnóstico previo de inmunodeficiencia o déficit celular.

 

MÉTODOS

Se estudió el efecto in vitro de la MR sobre los linfocitos procedentes de 20 donantes voluntarios de sangre y 20 enfermos con déficit de la inmunidad celular que no habían recibido medicamento en el mes anterior a la obtención de la muestra. Los 20 pacientes seleccionados para este estudio habían sido diagnosticados previamente en el Instituto de Hematología e Inmunología con un déficit de la inmunidad celular, por presentar en el cuadro clínico infecciones frecuentes y alteraciones de los valores normales de linfocitos T y del índice opsonofagocítico (FF) de los neutrófilos a la Candida albicans.

A cada paciente se les extrajeron 15 mL de sangre heparinizada (15 UI/mL) con jeringuillas plásticas desechables. El aislamiento de células mononucleares se efectuó según el método de Böyum modificado, sobre un gradiente de Ficoll-Paque Plus (densidad 1,077 g/mL) (GE Healthcare, Suecia).¹⁶

 

Preparación de la solución de MR

Tintura de manzanilla 20 %, (Lote 509006, Centro de Producción Local de Medicina del Cerro. Se esterilizaron 10 mL de la tintura (filtro 0,2 m, NALGENE, EE. UU.).

Para evaluar la respuesta de la MR sobre la viabilidad de los linfocitos y neutrófilos se utilizó la técnica de exclusión del azul tripán sin exposición a las diluciones de MR y con diluciones dobles de este producto desde 1:2 hasta 1:4096, durante 24 horas a 4 C. La viabilidad celular estuvo disminuida hasta la dilución 1:128 y a partir de ella fue superior al 95 %. Se ensayaron todos los experimentos con la MR, dilución 1:256, que se consideró como óptima.

La determinación de la expresión de los antígenos de membrana linfocitaria CD2 y CD3, la formación de roseta espontánea (RE) y activa (RA) y el estudio de la función fagocítica (FF) frente a la Candida albicans, se realizó sin la estimulación de MR (dilución óptima 1:256) y con esta, durante 24 horas previas a su evaluación mediante el ultramicrométodo inmunocitoquímico (UMICIQ) introducido y modificado en nuestro laboratorio con el uso de anticuerpos monoclonales específicos, y las técnicas de formación de RE y RA e índice opsonofagocítico, respectivamente.¹⁷

El estudio de la acción de la MR se realizó sin incubación y con incubación con la MR (dilución 1:256) a 4 C, durante las 24 horas previas al estudio.^18,19

Para comparar los resultados obtenidos entre las muestras que se expusieron a la MR y aquellas en que no se usó este producto, se utilizó la prueba estadística t de Student para muestras pareadas. Se utilizó como nivel de significación una p < 0,05.

 

Bioética

A los pacientes y a los donantes se les explicó el objetivo del estudio, los posibles beneficios derivados de los resultados y la ausencia de riesgos asociados. Se confeccionó una planilla para el consentimiento informado de los donantes y enfermos que participaron en el estudio.

 

RESULTADOS

Al comparar la formación de RE y RA, así como el porcentaje de los niveles de expresión de los antígenos de membrana CD2 y CD3 entre los linfocitos estimulados con MR y sin esta, no se hallaron diferencias estadísticamente significativas de los donantes ni en los enfermos con diagnóstico de inmunodeficiencia celular (tablas 1 y 2). Similares resultados fueron hallados con la prueba de FF de los neutrófilos de los donantes y enfermos (tabla 3).

 

DISCUSIÓN

Se han realizado estudios con MR en animales que han demostrado su efecto como antiinflamatorio, espasmolítico, ansiolítico, y su efecto sobre los linfocitos y como inmunomodulador.^20-22

En nuestro estudio se observó que en las condiciones experimentales utilizadas, la MR no ejerce efecto inmunomodulador in vitro sobre los linfocitos y neutrófilos de individuos sanos y en enfermos con inmunodeficiencia celular.

Estos resultados no coinciden con lo hallado en estudios in vivo en animales a los que se les inyectó un extracto de MR e indujo el aumento de leucocitos en sangre periférica y de la celularidad de la médula ósea. También la administración oral o parenteral de heteropolisacáridos de MR en animales de experimentación, parece normalizar la respuesta inmune después de la inmersión o el enfriamiento. Se ha reportado que la MR aumenta la formación de roseta T en pacientes inmunodeficientes.^20-22

La diferencia observada en nuestros resultados podría deberse a que nuestro estudio explora la acción del MR in vitro y los resultados referidos fueron obtenidos in vivo.

En la literatura revisada no hemos hallado el estudio del efecto in vitro de la MR sobre los linfocitos y neutrófilos de enfermos con diagnóstico de inmunodeficiencia celular e individuos sanos.

Teniendo en cuenta que la MR es una planta medicinal que puede constituir una alternativa más de tratamiento como inmunomodulador, consideramos que se debe continuar trabajando en estudios preclínicos y clínicos in vitro mediante citometría de flujo, para el estudio de otras moléculas de activación y la proliferación linfocitaria, así como realizar ensayos clínicos que permitan conocer el papel de la MR sobre otros elementos de la respuesta inmunológica y su potencial terapéutico como inmunomodulador.

 

Agradecimientos

A la Lic. Ana Iris González y a las técnicas Martha Ponce Sandoval y Yamila Junco González, por la colaboración brindada en la realización de este trabajo.

 

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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Recibido: 28 de noviembre del 2011.
Aprobado: 4 de noviembre del 2012.

 

 

Lic. Lázaro del Valle-Pérez. Instituto de Hematología e Inmunología. Apartado 8070, CP 10800. La Habana, Cuba. Tel (537) 643 8695, 8268, Fax [phone]. Correo electrónico: [e-mail]   Website: http://www.sld.cu/sitios/ihi