Comunicación corta

Centro Nacional de Investigaciones Científicas

Apoptosis: experiencias en la anatomía patológica experimental

Dr. Nelson Merino García

Resumen

Se evaluó la efectividad del método Túnel y se comparó con la técnica convencional de hematoxilina-eosina. Se estudió por ambas técnicas la histopatología de un carcinoma epidermoide y se observó que el método Túnel redujo los índices de apoptosis.

DeCS: APOPTOSIS; MUERTE CELULAR; HEMATOXILINA; CARCINOMA DE CELULAS ESCAMOSAS/patología; RATONES; ANIMALES DE LABORATORIO.

La apoptosis es un proceso donde las células mueren de una manera controlada, en respuesta a estímulos específicos y en apariencia siguen un programa intrínseco. La apoptosis ocurre, pero no exclusivamente, en situaciones donde se les ha dado el término de "muerte celular programada".1 Es diferente de la necrosis donde la célula pierde su control homeostático y se torna hinchada por líquido, y produce la lisis y la liberación del contenido intracelular con la estimulación de una respuesta inflamatoria. La apoptosis, en contraste, produce la contración y fragmentación de la célula con las membranas intactas y la subsecuente remoción por fagocitosis antes de que se produzca la liberación del contenido.

La significación de la apoptosis en muchas situaciones fisiológicas y patológicas ha ido aumentando desde su descripción hace 20 años1 y muchas de las patologías observadas en una variedad de enfermedades han sido atribuidas a defectos en las vías de la apoptosis.

Los métodos más ampliamente utilizados en la detección de la apoptosis son la microscopia óptica y electrónica,2 la citometría de flujo y la electroforesis en agar de agarosa. Hace poco se ha desarrollado el método TÚNEL,3 que se fundamenta en el marcaje de los terminales 3-0H de fragmentos oligonucleosómicos del DNA y que pueden ser identificados por la inmunohistoquímica mediante la incorporación de trifosfatos de nucleósidos marcados con digoxigenina.

Como parte de la experiencia del autor en el estudio y reconocimiento de la apoptosis, se evaluó la efectividad de este método, comparándolo con la técnica convencional de hematoxilina-eosina. Así, se estudió por ambas técnicas la histopatología de un carcinoma epidermoide trasplantado al ratón atímico y tratado con un anticuerpo monoclonal (AcM) antirreceptor de factor de crecimiento endotelial (EGF). Se determinaron los índice de mitosis y apoptosis por cada método en conteos de 1 000 células por sección de tejido de cada animal y se ajustaron finalmente a porcentajes. Se observó que el método TÚNEL redujo los índices de apoptosis, por causa de una mayor especificidad o por errores de interpretación en la identificación de las estructuras celulares por la técnica convencional.

La confiabilidad de los métodos inmunohistoquímicos para el estudio y la cuantificación de la apoptosis ha sido un tema muy discutido en la literatura internacional. Muchos autores concluyen que estos métodos no marcan todas las etapas morfológicas de la apoptosis y que finalmente el especialista debe adquirir una gran experiencia visual en su reconocimiento por la técnica convencional de hematoxilina-eosina, por ser la más confiable.4

En la patología toxicológica se estudió la apoptosis en la autorregeneración hepática, después de la intoxicación por tetracloruro de carbono a una dosis subletal. El mayor índice de apoptosis fue obtenido a las 48 h posinoculación, y descendió bruscamente a partir de las 72 h.

Summary

The effectiviness of the TUNEL method was evaluated and compared with that of the conventional hematoxylineosin technique. The histopathology of a squamous cell carcinoma was studied by using both techniques and it was observed that the TUNEL method reduced the apoptosis indices.

Subject headings: APOPTOSIS; CELL DEATH; HEMATOXYLIN; CARCINOMA, SQUAMOUS CELL//pathology; MICE; ANIMALS, LABORATORY.

Referencias bibliográficas

1. Arends MJ, Wyllie AH. Apoptosis: mechanisms and roles in pathology. Int Rev Exp Pathol 1991;32:223-54.
2. Gaffney EF, O´neill AJ, Stanton MJ. In situ endlabelling, light microscopic assesment and ultrastructure of apoptosis in lung carcinoma. J Clin Pathol 1995;48:1017-21.
3. Gavrielly Y, Sherman Y, Ben-Sanson SA. Identification of programmed cells death in situ via specific labelling of nuclear DNA fragmentation. J Cell Biol 1992;119:493-501.
4. Kerr JF. Apoptosis: a basic biological phenomenom with wideranging implications in tissue kinetics. Br J Cancer 1972;26:239.

Recibido: 26 de diciembre de 1997. Aprobado: 10 de mayo de 1998.
Dr. Nelson Merino García. Centro Nacional de Investigaciones Científicas. Avenida 25 y 158, Apartado postal 6990, Cubanacán, Ciudad de La Habana, Cuba.