ARTICULOS ORIGINALES

 

Evaluación de diferentes matrices cromatográficas para la determinación del tamaño molecular del polisacárido C de Neisseria meningitidis mediante HPLC.

Evaluation of Different Chromatographic Matrixes for Molecular Size Determination of the Neisseria meningitidis Polysaccharide C by HPLC.

 

Matilde Cuevas, Ileana Martínez, Ismael Martínez, Yaima Merchán, Esther Mª Fajardo.

Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, Cuba.
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RESUMEN

Las propiedades inmunológicas del polisacárido C de Neisseria meningitidis se correlacionan con su tamaño molecular, parámetro físico-químico que se determina mediante cromatografìa convencional en filtración en gel, según lo recomendado por la Organización Mundial de la Salud (OMS). Sin embargo, la determinación del coeficiente de distribución (Kd) mediante este método, consume mucho tiempo y requiere relativamente grandes cantidades de muestra del producto. La Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) es más eficiente y podría sustituir el método convencional. Para ello en el presente trabajo se evaluaron diferentes columnas cromatográficas y condiciones de corrida. En todos los casos se determinó el volumen muerto y el volumen total, así como el factor de capacidad, la eficiencia, la asimetría del pico y la repetibilidad. Se empleó como fase móvil NaCl 0,2 mol/L. La columna de Sepharose CL 4B (Pharmacia, Suecia) resultó ser la escogida para la determinación de Kd del polisacárido C mediante HPLC ya que fue la de mayor capacidad para retener la muestra; aunque resultó menos eficiente que la TSK G3000PW (Tosohaas, Japón), mostró igual asimetría del
pico, mejor repetibilidad, y menor costo. Se estudiaron diferentes velocidades de flujo, concentraciones y volúmenes de muestra con el fin de determinar las mejores condiciones para el análisis, que resultaron ser las siguientes: Una inyección de 100 μl de muestra (0,1 mg) a 0,3 mL/min de flujo.

Palabras claves: Polisacárido C, HPLC, Kd

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ABSTRACT

The immunological properties of N. meningitidis Polysacharide C are closely related to its molecular size, a physicochemical parameter determined by conventional Gel filtration chromatography (GFC) as recommended by the World Health Organization (WHO). Nevertheless, the distribution coefficient (Kd) determination by this method is timeconsuming and requires a relatively large quantity of sample. The High Performance Liquid Chromatography (HPLC) is more efficient, so it could substitute the conventional method. For that purpose, we evaluated different chromatographic columns and run conditions to determine Kd by (GFC) HPLC. In all cases the void and the total volumes, and also the capacity factor, the column efficiency, the peak asymmetry and the repeatability were determined. The mobile phase was 0,2 mol/L NaCl. The Sepharose CL 4B (Pharmacia, Sweden) resulted the best choice, because it had more capacity to retain the sample; although it was less efficient than the TSK G3000PW (Tosohaas, Japan) column, it showed the same peak asymmetry, the best repeatability and it was cheaper. Different flow rates, sample concentrations and sample volumes were studied to determine the best analysis conditions, which resulted in: an injections of 100 μl of sample (0,1 mg) with a 0,3 mL/min of flow.

Keywords: Polysacharide C, HPLC, Kd

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