INSTITUTO SUPERIOR DE MEDICINA "DR. LUIS DÍAZ SOTO". LABORATORIO DE MEDICINA HERBARIA

Toxicidad en dosis repetidas del Oncidium luridum Lindl.

Lic. Miguel Alonso González,¹ Dra. María Sotolongo Baró,² Téc. Roberto Miranda Flores,³ Téc. María Curí Hernádez,³ Téc. Enrique Pérez Santoya⁴ y Téc. María E. Perdomo Paiba⁵

Resumen

Se realizó un estudio de toxicidad subcrónica en ratas Wistar mediante la administración oral de una tintura de orquídea silvestre. La experiencia duró 45 días; se realizó examen físico diario individual y se controló semanalmente el consumo de agua, alimentos y peso corporal. Se midieron algunas variables sanguíneas al inicio de la experiencia y final de ésta que nos sirvieron como marcadores fisiológicos de órganos y sistemas. Se realizó necropsia a todos los animales, tomando muestras de los principales órganos para su histología. Durante la evolución no se apreciaron signos de intoxicación. Se observó disminución de la variable hemoglobina y aumento de los niveles de glucosa en sangre en todos los grupos, lo cual consideramos que no guarda relación con el producto. Además, se observó que el nivel de colesterol se mantuvo elevado en los grupos controles, no sucedió así con los grupos experimentales. La histología no arrojó lesiones tóxicas.

Descriptores DeCS: TINTURAS/toxicidad; TINTURAS/farmacología; PLANTAS MEDICINALES; DOSIS REPETIDA; HEMOGLOBINAS/efectos de drogas; LEUCOCITOS/efectos de drogas; ALANINA AMINOTRANSFERASA/efectos de drogas; GLUCOSA DE LA SANGRE/efectos de drogas; CREATININA/análisis; BILIRRUBINA/análisis; COLESTEROL/análisis; RATAS WISTAR

Los estudios de toxicidad en dosis repetidas permiten obtener información sobre los daños que puede producir en el organismo la exposición continua a un producto determinado.

Al Oncidium luridum Lindl., conocida vulgarmente como orquídea silvestre u oreja de burro, se le reporta tradicionalmente efectos beneficiosos en pacientes con asma bronquial.

En nuestro laboratorio pudo comprobarse mediante un modelo farmacológico que una tintura elaborada a partir de esta planta, y que se denominó TIOL, posee efecto broncodilatador.

Métodos

La sustancia en estudio es una tintura al 20 %, con menstruo de alcohol al 40 % a partir de las hojas de Oncidium luridum. Lindl.; fue elaborada en el Laboratorio de Medicina Herbaria del ISMM "Dr. Luis Díaz Soto" con las características siguientes:

• pH 6,05
• IR 1,3530
• Densidad 0,9599
• Contenido alcohólico 31,44 %
• Metabolitos presentes: azúcares reductores, aminas, triterpenos y esteroides
• Sólidos totales 2,02 %
• Dosis terapéutica propuesta (Dt) 10,5 mg/kg.

La especie animal empleada fue la rata de la línea Wistar del sexo masculino, suministrada por CENPALAB; fueron seleccionadas 50 con peso corporal de 155 ± 5 g para conformar 5 grupos de trabajo de 10 animales cada uno:

1. Grupos I, II y III se les administró la tintura en dosis de 10,5; 52,5 y 105 mg/kg, respectivamente.
2. Grupos IV (control positivo) y V (control negativo) a los que se les administró menstruo con igual contenido alcohólico que la tintura y no se les realizó ningún tratamiento respectivamente. Para comprobar el estado de salud de los animales se tomaron 10 de éstos, provenientes de la misma camada que los experimentales, a los cuales se les practicó la necropsia para estudio macroscópico e histología de los órganos.

Previo al inicio de la experiencia se realizó extracción sanguínea por el plexo retroorbital del ojo derecho, con pipetas Pasteur heparinizadas para determinar los valores de las variables sanguíneas: hemoglobina, hematócrito, leucocitos con diferencial, glucosa y alanino-amino-transferasa. Estas variables fueron medidas nuevamente al final de la experiencia; se agregó la determinación de las variables creatinina, bilirrubina total, y colesterol total, que no pudieron ser analizadas al inicio por el poco volumen de sangre disponible.

El TIOL fue administrado por vía oral mediante pipeta Eppendorff de volumen variable una vez al día durante 45 días.

La evolución fue diaria con examen físico individual en busca de algún signo de toxicidad, además se midió semanalmente la variación de peso corporal, así como el consumo de agua y alimentos que consistió en pienso comercial suministrado por el centro proveedor de los animales y agua acidulada.

El último día de evolución se procedió a narcotizar las ratas con vapores de tricloroetileno; se le seccionó la arteria femoral con tijera para obtener el volumen de sangre necesario y medir las variables sanguíneas antes mencionadas. La muerte se produjo por la narcosis mantenida; se procedió a la necropsia, tomando muestra de los órganos: cerebro, corazón, pulmones, estómago, intestino grueso y delgado, hígado, bazo, riñones, testículo y piel. Los tejidos fueron conservados en formol neutro al 10 % hasta su posterior inclusión en parafina, cortados y coloreados con hematoxilina-eosina para su análisis histológico.

Todos los datos fueron recogidos convenientemente en los modelos establecidos. El procesamiento estadístico de los datos se realizó de forma automatizada mediante el sistema Microstat (análisis del comportamiento de la variable y análisis de varianza) y de forma manual en los casos que lo requirieron ( test de Duncan y test de Mann Whitney)¹ con un nivel de significación en todos los casos de p<0,05.

Resultados

Los animales que fueron sacrificados para comprobar el estado de salud normal, sólo presentaron congestión visceral generalizada al examen histológico debido a la eutanasia, por lo que consideramos la camada apta para la investigación.

Durante toda la experiencia no se observaron signos de intoxicación en ningún animal. El peso promedio final de cada grupo no presentó diferencias estadísticamente significativas como puede observarse en la tabla 1.

TABLA 1. Peso final de cada grupo  

Grupo	(g)	DE
I	400	7,3214
II	395	5,1054
III	405	10,1121
IV	393	8,3456
V	401	4,6731

: media del peso semanal en gramos DE: desviación estándar.

El consumo de comida y agua se comportó de manera similar en todos los grupos y acorde con lo reportado en la literatura médica,² no hubo diferencia estadísticamente significativa entre ellos (tabla 2).

TABLA 2. Consumo de comida/agua (g/mL)  

	Semanas						Total
Grupos	1	2	3	4	5	6		DE
I	1050	770	994	1141	1092	1211	1043,0	4,823
	245	196	231	273	280	238	243,83	0,172
II	1001	980	966	1085	1148	1120	1050,0	8,357
	239	210	211	264	293	231	241,33	6,218
III	1015	897	823	1176	1210	1217	1056,3	3,325
	233	221	215	255	287	243	242,33	4,814
IV	1024	1005	753	1194	1156	1193	1054,1	5,672
	216	234	238	231	274	251	240,66	2,492
V	1039	943	907	1002	1193	1187	1047,1	4,339
	240	201	228	264	298	243	245,66	8,375

: media del consumo. DE: Análisis de varianza con P < 0,05. Desviación estándar

El resultado del análisis estadístico de las variables sanguíneas fue el siguiente:

• Hemoglobina: al comparar los resultados iniciales y finales se encontró una disminución, que no llega a ser subnormal, de los valores finales para los grupos II, III, IV y V; fue estadísticamente significativa en los grupos II, IV y V; lo contrario sucedió en el grupo I que mostró un incremento significativo estadísticamente (tabla 3).

TABLA 3. Valores inicial y final de hemoglobina (g/L)  

	Inicial		Final
Grupos		DE		DE
I	141,1	7,2793	145,8	7,9134
II	144,1	7,7810	137,6	8,9113
III	146,2	4,5656	141,5	8,2327
IV	152,0	5,8878	137,2	6,8767
V	155,2	9,3429	145,4	6,8670

Análisis de varianza y Duncan para p = 0,05.

• Leucocitos: no se observaron diferencias significativas en las cifras de leucocitos al inicio y final para cada grupo. Al comparar ambos resultados, tampoco existen diferencias significativas, al encontrarse dentro del rango de normalidad (tabla 4).

TABLA 4. Valores iniciales y finales de leucocitos  

	Inicial		Final
Grupos		DE		DE
I	6,490	0,7651	7,530	0,8499
II	6,920	0,6957	7,771	0,9249
III	6,940	0,7152	8,505	0,7776
IV	6,610	0,4864	7,590	0,6657
V	6,590	0,8048	7,440	1,1721

Análisis de varianza para p = 0,05. : Media por grupo. DE: Desviación estándar.

• Alanino-amino-transferasa: los resultados iniciales no presentaron diferencias entre grupos. Los finales muestran diferencia significativa del grupo I en relación con el resto (tabla 5). Se observó una disminución de los resultados finales en todos los grupos, la que se mantiene dentro del rango de normalidad.

TABLA 5. Valores iniciales y finales de alanino-amino-transferasa (U/L)  

	Inicial		Final
Grupos		DE		DE
I	23,39	6,1156	5,88	1,6199
II	21,02	3,3552	7,50	2,0864
III	19,22	3,1333	7,96	2,3397
IV	18,93	7,7594	11,00	4,3228

Análisis de varianza con p < 0,05. : media por grupo. DE: desviación estándar.

• Glucosa: al inicio, todos los valores fueron normales, no hubo diferencia significativa entre grupos. Al final, se encontró un marcado aumento del valor de esta variable en todos los grupos. Como dato curioso, podemos señalar que los grupos tratados con el TIOL presentaron cifras de glucosa más bajas que los controles, esta diferencia fue estadísticamente significativa al comparar los grupos I y II con los controles (tabla 6).

TABLA 6. Valores inicial y final de glucosa (m mol/L)  

	Inicial		Final
Grupo		DE		DE
I	6,600	0,8515	8,400	0,9452
II	5,921	0,6845	8,200	1,2186
III	6,849	0,7868	8,980	0,9117
IV	6,430	0,6667	10,35	1,5601
V	6,599	0,6357	11,42	1,6030

Análisis de varianza y Ducan con p < 0,05. : media por grupo. DE: desviación estándar.

• Creatinina: los valores fueron normales para todos los grupos no hubo diferencias significativas (tabla 7).

TABLA 7. Valores de creatinina (m mol/L)  

Grupos		DE
I	49,320	7,4963
II	60,155	14,5626
III	59,419	17,3158
IV	64,258	8,6297
V	58,898	10,2113

Análisis de vairanza con p < 0,05.

Valores de referencia de nuestro laboratorio: 15,13-63,69 m mol/L.

• Bilirrubina total: todos los valores se hallaron dentro del rango de normalidad establecido en nuestro laboratorio. Se encontró diferencia significativa del grupo I en relación con los grupos II y V; el valor fue menor en el primero (tabla 8).

TABLA 8. Valores de bilirrubina total (m mol/L)  

Grupos		DE
I	3,90	0,5478
II	4,33	0,3230
III	4,50	0,5242
IV	4,30	1,3611
V	4,53	0,5147

Mann Whitney con p < 0,05. Valores de referencia de nuestro laboratorio: 1,46-4,51 m mol/L. : media por grupo. DE: desviación estándar.

• Colesterol: los grupos controles mostraron cifras de colesterol superiores y son estadísticamente significativas con respecto a los grupos I y II.
• Histología de los órganos: las lesiones histológicas encontradas fueron: necrosis focal hepática, infiltrado peribronquial, colitis crónica y congestión visceral entre severa y moderada.

Discusión

Teniendo en cuenta los resultados observados en las tablas 1 y 2 donde se muestra que el consumo de alimentos y la variación del peso corporal se comportaron de forma similar en todos los grupos, pudimos inferir que la administración continuada del TIOL por vía oral no produce lesiones al nivel del sistema nervioso central, que hagan variar la conducta de los animales con respecto a los alimentos, ni tampoco afecta el sistema digestivo, por lo que la adsorción y motilidad se comportan de forma adecuada.

La disminución de los valores finales de la variable hemoglobina (tabla 3) no guarda relación con el producto administrado, ya que este efecto fue observado también en los 2 grupos controles; incluso en el grupo de mayor dosis, la diferencia no es estadísticamente significativa.

El aumento final de los valores de glucosa se debió a que el día antes de la extracción sanguínea fue fin de semana y no se retiraron los alimentos para evitar que el ayuno fuera muy prolongado; no obstante, sí consideramos que el producto ejerce algún efecto hipoglicemiante, ya que los grupos experimentales tuvieron valores de glucosa inferiores a los controles, esta diferencia fue estadísticamente significativa para los grupos I y II (tabla 6).

La variable colesterol mostró valores mayores e incluso un poco fuera del rango de normalidad reportados para la especie,² no sucedió así con los grupos experimentales, por lo que consideramos que este resultado se debe a un ligero efecto hipocolesterolémico del medicamento, que pudiera ser de interés a otras especialidades médicas (tabla 9).

TABLA 9. Valores de colesterol total (m mol/L)  

Grupos		DE
I	1,36	0,3088
II	1,67	0,1850
III	2,38	0,8055
IV	2,53	0,3996
V	2,62	0,6984

Los daños hísticos encontrados en la histología son lesiones de origen multicausal, y que en esta experiencia se presentaron con mayor incidencia en los grupos controles, por lo que no guardan relación con la sustancia probada. La congestión visceral entre severa y moderada observada en todos los grupos es el resultado de la eutanasia (tabla 10). TABLA 10. Hallazgos histológicos  

Grupos	NFH	IPB	CC
I	6 (60 %)	2 (20 %)	3 (30 %)
II	7 (70 %)	3 (30 %)	6 (60 %)
III	5 (50 %)	3 (30 %)	2 (20 %)
IV	8 (80 %)	4 (40 %)	3 (30 %)
V	8 (80 %)	5 (50 %)	6 (60 %)

NFH: necrosis focal hepática. IPB: infiltrado peribronquial. CC: colitis crónica.

Conclusiones

1. La administración diaria por vía oral durante 45 días de TIOL, en niveles de 10,5; 52,5 y 105 mg/kg a ratas Wistar del sexo masculino no produce signos de intoxicación.
2. La disminución de los valores de hemoglobina observada al final de la experiencia, consideramos que no guarda relación con la sustancia administrada.
3. El incremento final de los valores de glucosa no guarda relación con la administración del TIOL.
4. La administración de extracto fluido de Oncidiun luridum Lindl. en las condiciones utilizadas en esta experiencia no causó lesiones en los órganos estudiados.

Recomendaciones

Realizar estudios farmacológicos con el TIOL para analizar su posible efecto hipoglicemiante e hipocolesterolémico.

Agradecimientos

A la técnica Odalys Matos Reyes por su colaboración brindada en esta experiencia.

Referencias Bibliográficas

1. Sigarroa A. Biometría y diseño experimental. La Habana: Editorial Pueblo y Educación, 1985: 354-360.
2. Guide to care and use of experimental animals. En: Ernest D. ed. Olfert. 2 ed. Canada: CCAC, 1993; vol.1:172-176.

Recibido: 7 de julio de 1997. Aprobado: 10 de julio de 1997.

Lic. Miguel Alonso González. Instituto de Medicina Militar "Dr. Luis Díaz Soto". Avenida Monumental y Carretera de Asilo, Habana del Este, CP. 11700, Ciudad de La Habana, Cuba.

¹ Licenciado en Bioquímica. Aspirante a Investigador.
² Especialista de II Grado en Anatomía Patológica. Aspirante a Investigadora.
³ Técnico(a) en Laboratorio Clínico.
⁴ Técnico Veterinario.
⁵ Técnica en Anatomía Patológica.