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Biotecnología Aplicada

On-line version ISSN 1027-2852

Abstract

PUPO, Elder  and  HARDY, Eugenio. Complejidad y soluciones al problema de aislamiento de las especies moleculares de los lipopolisacáridos de las bacterias Gram negativas. Biotecnol Apl [online]. 2009, vol.26, n.1, pp.9-15. ISSN 1027-2852.

Las bacterias Gram negativas sintetizan de manera frecuente un gran número de especies moleculares de lipopolisacáridos (LPS). La elevada heterogeneidad estructural de los LPS y su tendencia a formar agregados moleculares hacen extremadamente difícil el fraccionamiento de sus especies moleculares. La aplicación de métodos cromatográficos de forma individual ha permitido la obtención de fracciones de LPS poco homogéneas. Con la combinación de principios cromatográficos ortogonales, solo se ha logrado la purificación hasta homogeneidad química de los LPS de tipo rugoso más simples. Ello ha determinado que los esfuerzos dirigidos al aislamiento de LPS más homogéneos se centren en el uso de la electroforesis en el gel plano. Los métodos de electroforesis son capaces de separar especies de masas moleculares cercanas de LPS más complejos de tipo liso. Consecuentemente, sobre esta base se ha desarrollado una nueva metodología que permite el aislamiento de LPS intactos de tipo rugoso o liso hasta homogeneidad electroforética. Con ella es posible el análisis estructural sensible por espectrometría de masas y la medición de la actividad LAL (Limulus Amoebocyte Lysate) de especies individuales de LPS, compuestas de unas pocas especies químicas. Esta metodología ha abierto las puertas hacia la posibilidad de combinar la electroforesis con otros principios ortogonales de separación, un próximo paso que podría facilitar la obtención de preparaciones químicamente homogéneas a partir de mezclas de LPS complejas.

Keywords : lipopolisacárido; aislamiento; cromatografía; electroforesis; tinción inversa; elución; espectrometría de masas.

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