Resumen

LEYVA, Alberto et al. Desarrollo, validación y aplicación de un nuevo ELISA para el control del proceso del antígeno de superficie el virus de la hepatitis B recombinante. Biotecnol Apl [online]. 2011, vol.28, n.4, pp.228-234. ISSN 1027-2852.

Se desarrolló y validó un ensayo inmunoenzimático en fase sólida (ELISA) de tipo sándwich para la cuantificación del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B (VHB), obtenido por vía recombinante de la levadura metilotrófica de Pichia pastoris. La cuantificación se efectuó con el anticuerpo monoclonal (AcM) CB.Hep-1, utilizado como inmunoligando para su purificación. Los estudios de validación siguieron la guía ICH Q2 (R1) y la regulación No. 41, de 2007 del Cecmed. Se cuantificaron hasta 11.9 ng/mL, y se analizaron los parámetros de linealidad, especificidad, precisión y exactitud. El AcM CB.Hep-1, usado como recubrimiento y conjugado en el ELISA, fue específico en el reconocimiento del antígeno de superficie del VHB (AgsHB) recombinante, por lo que la cuantificación fue exacta. En el análisis de varianza para el ensayo de interferencia, el valor de probabilidad para cada tampón de las muestras del proceso de producción fue mayor que 0.1, para un nivel de confianza de 99%. La variabilidad intraensayo fue entre 0.77 y 7.47%, e interensayo fue entre 1.19 y 19.41%. Para cada muestra fue menor del 10 y el 20%, respectivamente. Se obtuvo un recobrado entre 98.18 y 100.31%, con un coeficiente de variación por debajo del 20%. El ELISA es específico para este anticuerpo monoclonal en el rango de concentraciones estudiadas. La curva de calibración es lineal entre 191.7 y 11.9 ng/mL. Por su precisión, especificidad y exactitud, este ELISA se convierte en una poderosa herramienta en el control del proceso de la vacuna recombinante contra el VHB.

Palabras clave : AgsHB; validación; control de procesos; ELISA.

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