Plantas Medicinales

Centro de Química Farmacéutica

Determinación de vitamina (a -Tocoferol) en Pinus Caribaea Morelet y Eucalyptus SP.

Clara Bécquer Romagosa,¹ Rolando Quert Alvarez,¹ Mirta Castiñeira Díaz,² y Raúl Capote Hernández³

1. Licenciado(a) en Química. Investigador(a) Agregado(a). Instituto de Farmacia y Alimentos.
2. Doctora en Ciencias Farmacéuticas. Profesora Titular. Instituto de Farmacia y Alimentos.
3. Licenciado en Ciencias Farmacéuticas. Aspirante a Investigador. Centro de Química Farmacéutica.

RESUMEN

Se presenta un método rápido de cromatografía de capa delgada para la determinación cualitativa y cuantitativa de vitamina E (a -tocoferol) en muestras de Pinus caribaea Morelet y Eucaliptus sp. Los extractos etereos se cromatografiaron en placas preelaboradas con silicagel, para lo cual se empleó cloroformo como fase móvil. La cuantificación se realizó por detección densitométrica de las manchas del compuesto mediante un sistema controlado por computadora en los modos de reflexión/absorbancia a una longitud de onda de 280 nm. Este trabajo constituye el primer reporte de la presencia de esta sustancia en Cuba, encontrándose la vitamina E en concentraciones de 177 y 2 400 mg/kg de droga seca en pino y eucalipto respectivamente.

Palabras clave: VITAMINA E/análisis; EUCALYPTUS; CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA; EXTRACTOS VEGETALES/análisis.

INTRODUCCION

En los últimos años el estudio de plantas medicinales ha ganado importancia creciente y ha aumentado significativamente el empleo de medicamentos que son definidos por el programa de medicina tradicional.

En las especies forestales se encuentra una composición variada de compuestos químicos, muchos de ellos con actividad farmacológica, otros constituyen fuentes de energía para la alimentación tanto humana como animal, y otros sirven como cofactores o coadyuvantes de muchas funciones biológicas y son necesarios para el crecimiento normal y el mantenimiento de la vida en los animales, entre ellos el hombre, éste es el caso de las vitaminas.¹ Estas últimas se dividen en 2 grupos de acuerdo con sus características de solubilidad: hidrosolubles y liposolubles.²

En el grupo de vitaminas liposolubles se encuentra la vitamina E, término con el cual se designan un grupo de 3 compuestos, de funciones biológicas similares, derivados de los tocoferoles. Ellos son el alfa (a ), beta (b ) y gamma (g ) tocoferol, de los cuales el a -tocoferol es el más potente¹ y se emplea para la prevención de la displasia broncopulmonar, en enfermedades cardíacas y hepáticas, así como en el tratamiento de la esterilidad, el aborto habitual y la toxemia del embarazo.

Internacionalmente se reporta la presencia de esta vitamina E en cereales, nueces y hortalizas, así como en algunos aceites vegetales, además, Polis³ y Weichun^4,5 la reportan en el follaje de Pinus silvestris de Europa y Pinus massoniana de China respectivamente.

Debido a que este compuesto se encuentra en cantidades muy pequeñas en nuestros alimentos, y por su importancia, el hombre busca cada día nuevas fuentes para su obtención y administración como suplemento dietético.

El objetivo del presente trabajo es determinar la existencia o no del (a -tocoferol) en el follaje de Pinus caribaea Morelet y Eucaliptus sp. mediante cromatografía en capa delgada (CCD) con detección densitométrica, para su posible utilización en la elaboración de fitofármacos y darle uso a un residuo forestal con grandes beneficios económicos.

MATERIAL Y METODO

Todos los solventes empleados fueron de calidad pura para análisis.

El follaje utilizado para la obtención del extracto alcohólico se recogió en áreas de plantación existentes en la Estación Experimental Forestal de Viñales, provincia de Pinar del Río. El material vegetal se separó de la parte maderable en forma manual, se secó durante 7 días y se molió en un molino de cuchillas con un tamiz de 1 mm. Las muestras de trabajo se obtuvieron por extracción alcohólica del follaje verde durante 8 h y posterior reextracción con éter de petróleo 30-40 ?C.

Se emplearon a -tocoferol (Merck) a una concentración de 100 m g/mL como sustancia de referencia, placas de CCD con silicagel como soporte de 10 x 10 cm con indicador de fluorescencia F₂₅₄ (Merck), y cámaras cromatográficas de 10 x 10 cm (CAMAG). La aplicación de muestras se realizó mediante un aplicador manual Nanomat III (CAMAG), para lo cual se utilizaron microcapilares de volumen fijo de 2 m L.

Como fase móvil se usó cloroformo. La lectura de las placas se realizó en un densitómetro Scanner II (CAMAG), acoplado a una computadora IBM compatible con paquete de programas Cats versión 3,14 para evaluación cromatográfica. La detección se efectuó a 280 nm con una lámpara de mercurio en los modos de absorbancia y reflexión, a una velocidad de búsqueda de 4 mm/s.

En el análisis cualitativo se utilizó el método de adición de estándar a la muestra y un análisis por comparación de espectros UV, realizado a las manchas presentes en las muestras de análisis y a la sustancia de referencia. La determinación cuantitativa se llevó a cabo por el método de estándar externo.

RESULTADOS Y DISCUSION

En la figura 1 se observa el cromatograma de la muestra de pino, con la existencia de 4 picos cromatográficos; como el objetivo de nuestro trabajo consistió en determinar la presencia de la vitamina E en dicha muestra, se enriqueció la misma con un patrón de esta vitamina, y se comprobó que el pico 3 del cromatograma con un valor de Rf = 0,68 similar al del patrón incrementa su tamaño, lo cual indica la presencia de vitamina E en la muestra de análisis (figura 2). Para corroborar esta afirmación se procedió a realizar los espectros UV del pico atribuido a este compuesto en la muestra y en el patrón; como se observa en la figura 3 hay una coincidencia en los espectros UV de ambos picos, con un máximo de absorción de aproximadamente 295 nm que es el reportado en la literatura para la vitamina E (a -tocoferol).

En la figura 4 se presenta el cromatograma de la muestra de eucalipto, con la existencia de 9 picos cromatográficos definidos, para un valor de Rf = 0,68 en uno de sus picos, que coincide con el valor encontrado para la vitamina E en el sistema cromatográfico empleado; el enriquecimiento de la muestra con el patrón de esta vitamina se observa en la figura 5, con la existencia de un pico (pico 7) que incrementa su tamaño, y al comparar el espectro UV de este pico con el espectro del patrón, existe una corespondencia (figura 6), lo que confirma también la presencia de la vitamina E en la muestra de eucalipto.

Para ambas muestras se determinó que la cantidad de vitamina E en las muestras es de 177 mg/kg de droga seca para el pino y 2 400 mg/kg de droga seca para el eucalipto.

A pesar de que en la literatura consultada no aparece ningún reporte de la presencia de esta vitamina en Pinus Caribaea Morelet, existen reportes en otras especies de pino (Pinus silvestris de Europa y Pinus massoniana de China) de Polis³ y Weichum,⁴ en las cuales el nivel de este compuesto se encuentra en el orden de 178 y 704 mg/kg de droga seca respectivamente, y el valor hallado en la especie de estudio está entre los valores reportados para estas 2 especies.

CONCLUSIONES

Se demostró la presencia de vitamina E (a -tocoferol) en los extractos alcohólicos de Pinus caribaea Morelet y Eucalyptus sp.

Se determinó que el Pinus caribaea Morelet contiene 177 mg/kg de droga seca de vitamina E y el Eucalyptus sp. contiene 2 400 mg/kg de droga seca.

SUMMARY

A fast methods of thin layer chromatography for the qualitative and quantitative determination of vitamine E (a -tocopherol) in samples of Pinus caribaea Morelet and Eucalyptus sp. is presented. The ethereal extracts were chromatographied in plates preelaborated with silica gel, for which chloroform was used as a mobile phase. Quantification was carried out by densitometric detection of the compound stains, using a computer controlled system in the modes of reflexion absorbability at a wave longitude of 280 nm. This paper is the first report about the presence of this substance in Cuba. Vitamin E has been found in concentrations of 177 and 2 400 mg/kg of dry drug in pine and eucalyptus respectively.

Key words: VITAMIN E/ANALYSIS; EUCALYPTUS; CHROMATOGRAPHY, THIN LAYER; PLANT EXTRACTS/analysis.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Claus EP. Vitaminas y Drogas que contienen vitaminas. En: Farmacognosia. La Habana: Ed. Cubana, 1986:342-66.
2. Martin W, Fullerton CE, Emerson L. Vitaminas y nutrientes. En: Farmacia práctica de Remington. La Habana: 1965;t2:1026-32. (Edición Revolucionaria).
3. Polis O. Uso del follaje verde en la URSS. Letonia: Asociación Científica Silava, 1986.
4. Weichun Z. Producing technology of feeds from forest waste, Jiangsu. Nanjing: Academic, 1985.
5. _____. Utilization of pine needle and twigs in China. Research Institute of chemical and utilization of chinese forest products. Nanjing: Academy of Forestry, 1989.

Recibido: 24 de noviembre de 1995. Aprobado: 29 de diciembre de 1995.

Lic. Clara Bécquer Romagosa. Centro de Química Farmacéutica. Ave. 200 y 21, Atabey, municipio Playa, Ciudad de La Habana, apartado 16042, Cuba.