SciELO - Scientific Electronic Library Online

 
vol.33 número3Pasteurización de soluciones de inmunoglobulinas de uso intravenoso: 2. El ph ácido como elemento estabilizanteDiseño de la formulación de glucagón inyectable índice de autoresíndice de materiabúsqueda de artículos
Home Pagelista alfabética de revistas  

Servicios Personalizados

Revista

Articulo

Indicadores

  • No hay articulos citadosCitado por SciELO

Links relacionados

  • No hay articulos similaresSimilares en SciELO

Compartir


Revista Cubana de Farmacia

versión impresa ISSN 0034-7515versión On-line ISSN 1561-2988

Rev Cubana Farm v.33 n.3 Ciudad de la Habana sep.-dic. 1999

 

Centro de Histoterapia Placentaria (Planta)

Empleo de placas filtrantes cubanas en el proceso de producción de melagenina loción

Guillermo Lago Mendoza,1 Patricia Melgares Hernández,2 Gabriel Coto Valdés,3 Loida Oruña Sánchez4 y María de los Ángeles Jiménez Gómez5

RESUMEN

La melagenina loción es un medicamento extraído de la placenta humana e identificado como una lipoproteína de bajo peso molecular, que ha demostrado su eficacia en la cura del vitiligo. Durante el proceso productivo de obtención de dicho extracto se emplea un sistema de placas de celulosa en la estación de filtración del Centro de Histoterapia Placentaria, Planta. El presente trabajo tiene como objetivo el empleo y evaluación de placas de producción nacional modelo Filtec 00 producidas en la Unión Investigación Producción Cuba 9 para la obtención del producto, para ello se evaluó el filtro teniendo en cuenta algunos criterios de operación además de los parámetros de control de la calidad del medicamento.

Descriptores DeCS: LIPOPROTEINAS; EXTRACTOS PLACENTARIOS; CALIDAD DE LOS MEDICAMENTOS; FILTRACION; INDUSTRIA FARMACEUTICA.

 La melagenina loción es un extracto alcohólico de placenta al 50 %, cuyas propiedades bioestimulantes le confieren una notable eficacia en el tratamiento del vitiligo. La historia de este aporte científico cubano a la ciencia mundial se inició cuando el doctor Carlos Miyares Cao encontró "de forma casual" una sustancia que al administrarse a los animales de experimentación, les producía un aumento de la pigmentación.

El vitiligo es una enfermedad en la cual se pierde progresivamente el color de la piel, se caracteriza por la aparición de manchas blancas en el rostro, las extremidades y la región genital.1 Se conoce que en la melagenina loción existe un factor melanocitopoyético identificado como una lipoproteína de bajo peso molecular que ha demostrado su eficacia en la cura del vitiligo.1

El presente trabajo tiene como objetivo la posibilidad de empleo de placas filtrantes de producción nacional, modelo Filtec 00, elaborada en la Unión Investigación Producción (UIP) Cuba 9, Quivicán, en la estación de filtración de la Planta de Histoterapia Placentaria para la producción de la melagenina loción.

MÉTODOS

En el presente trabajo se hace una valoración de laboratorio y más tarde se procede a evaluar las placas cubanas a nivel industrial en 2 lotes de melagenina loción. Se tuvo en cuenta algunos parámetros de operación del filtro y como criterio los análisis de control de proceso, control químico, análisis cromatográfico y las pruebas de control biológico.

Se emplearon placas de 34 x 34 cm de celulosa tipo Filtec 00 que según criterios del fabricante presentan las especificaciones técnicas siguientes:

Filtrabilidad: 1 300 L/m2 min

Agua: 1 atm

Espesor: 2,5 mm

Peso básico: 950 g/m2

Trabajo preliminar de laboratorio: Se tomaron 100 mL de un extracto de melagenina loción y se filtraron a través de las placas filtrantes de referencia. Se realizó el análisis de residuos secos por evaporación antes y después de filtrado; la diferencia obtenida de los residuos secos da una medida de la cantidad de sólidos insolubles retenidos en la placa. La relación con respecto a los sólidos totales multiplicados por 100 permite calcular el porcentaje de remoción de sólidos insolubles empleando la placa filtrante cubana según la ecuación:

% Remoción= (Rs(0)-Rs (1)*100/Rs(0)

donde: Rs(0) y Rs(1) son los residuos por evaporación de 5 mL de solución obtenidos antes y después de filtrado por la placa. Se tiene en cuenta el análisis mediante espec-troscopia de absorción UV a 2 longitudes de onda de 263 y 410 nm, característico del espectro de la melagenina, donde se midió la absorbancia antes y después de filtrar, haciendo el análisis por sextuplicado.

Proceso tecnológico. El proceso en cuestión constó de 3 etapas de extracción y 3 de filtración, en el que se emplearon alcohol etílico comercial como solvente y decalite como medio filtrante.

Las etapas de filtración se realizaron en un filtro prensa modelo Wolhfarth con 24 placas de celulosa de producción nacional fabricadas en la UIP Cuba 9.

Se midieron como parámetros de operación, la presión manométrica del equipo (bar), el tiempo de filtración (minutos), el volumen de fluido a filtrar y el extracto filtrado en litros.

El proceso descrito se realizó para 2 lotes de melagenina loción con el empleo del mismo tipo de placa.

Técnicas analíticas de control

Control del proceso. Este se realizó para cada producto extraído del filtro y la unión de los 3 extractos; se analizaron parámetros como pH, porcentaje de etanol, densidad y las pruebas a-amino y L-dopa de acuerdo con las técnicas de control de proceso validadas por el Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM) que se emplean en la producción de la melagenina loción.

Control químico. Este se realizó para cada producto extraído del filtro como es pH, densidad (g/mL), porcentaje de alcohol, residuos de evaporación (mg/100mL), L-do-pa (L-dihidroxifenilalanina) (mg/mL), nitrógeno total (mg/100mL).2-4 Estos resultados se compararon con los rangos límites establecidos para el producto y una melagenina tomada como referencia.

Control biológico. Para corroborar la efectividad del medicamento se realizaron algunos ensayos biológicos, y con este fin se montaron y trataron 3 grupos de animales, donde se midió una media en el conteo de melanocitos/mm2 para cada grupo. Estos datos se procesaron estadísticamente según la prueba de Kruskal-Wallis y la prueba complementaria de Student-Newman-Kesels (SNK)5 para un nivel de significación de 0,001.

Fraccionamiento proteico con el empleo de cromatografía líquida. Como medida de comparación entre las diferentes fracciones proteicas que forman parte del medicamento obtenido con el empleo de las placas cubanas, se realizó un fraccionamiento proteico mediante una técnica de filtración por gel, para lo cual se utilizó una columna rellena con Sephadex LH-20 preparada con un sistema de solventes etanol: agua (1,8:1). Este trabajo se realizó en un equipo de cromatografía líquida a bajas presiones conocido como FPLC de la firma Pharmacia-LKB con las condiciones experimentales siguientes:

  • Forma de ejecución: manual.
  • Forma de elución: isocrática.

RESULTADOS

En la tabla 1 se dan a conocer los resultados de los ensayos preliminares de laboratorio para valorar la factibilidad de empleo de las placas.

TABLA 1. Resultados de ensayos de laboratorio
No. 
Rs(0)
Rs(1)
Ab263(0)
Ab410(0)
Ab263(1)
Ab410(0)
1
0,0042
0,0008
2,675
1,050
2,421
0,690
2
0,0040
0,0008
2,717
1,038
2,542
0,742
3
0,0040
0,0008
2,712
1,015
2,414
0,663
4
0,0040
0,0008
2,879
1,046
2,238
0,697
5
0,0041
0,0008
2,876
1,059
2,275
0,742
6
0,0041
0,0008
2,869
1,065
2,657
0,799
0,0041
0,00073
2,788
1,0455
2,4245
0,7155
Rs (0) y Rs(1): residuos por evaporación obtenidos a partir de 5 mL de solución.
Ab263(0) y Ab410(0): valores de absorvancia de la solución cruda antes de filtrar.
Ab263(1) y Ab410(1): valores de absorvancia después de filtrar.

En la tabla 2 se reportan los parámetros de operación del filtro para el primero y segundo lotes de melagenina con el empleo de placas filtrantes cubanas.

TABLA 2. Parámetros de operación del filtro en el primero y segundo lote de melagenina con el empleo de placas filtrantes cubanas
I Filtración
II Filtración
III Filtración
 
Lote
Lote
Lote
Lote
Lote
Lote
 
1
2
1
2
1
2
No. de placas
24
24
24
24
24
24
Tiempo de filtración
(min)
20
20
15
10
15
20
Presión (bar)
1,0
1,1
1,8
1,4
1,2
1,2
Volumen de fluido crudo (L)
208
167
160
128
167
130
Volumen de fluido filtrado (L)
175
140
159
127
156
125

El análisis de control de proceso se comportó muy similar para ambos lotes con valores iguales a los obtenidos cuando se emplean otros sistemas de filtración con-vencionales (tabla 3).

TABLA 3. Análisis de control de proceso
 
pH
% etanol
Densidad
a -amino
L-dopa
1 Lote
2 Lote
1 Lote
2 Lote
1 Lote
2 Lote
1 Lote
2 Lote
1 Lote
2 Lote
I Filt
7
7
70
67
0,9
0,9
p
p
p
p
II Filt
7
8
90
86
0,8
0,8
p
p
p
p
III Filt
7
7
85
81
0,9
0,9
p
p
p
p
M
7
7
85
81
0,9
0,9
p
p
p
p
p: ensayo positivo; M: valores medios obtenidos; Filt: filtración.

El análisis de control químico permitió establecer criterios acerca de los productos filtrados a través de las placas cubanas. En la tabla 4 se presentan algunos análisis de control químico, así como sus rangos permisibles tanto para el lote 1 como para el 2.

TABLA 4. Análisis químico de control
  
Producto
 
Rangos permisibles
Lote 1
Lote 2
CaracterísticasLíquido transparente  
organolépticaspuede presentar  
 precipitado, color a-
Cumple
 marillo, olor carac-  
 terístico  
Densidad (g/mL)
0,83-0,904
0,85
0,85
pH
6,5-7,9
7,34
7,34
Residuos de evapo-   
ración (mg/100mL)
0,2-0,5
0,308
0,35
Nitrógeno total (mg/100mL)
10-20
10,64
 
L-dopa (mmol/mL)
0,0025 ± 0,0007
0,0020
0,00182
L-dopa: es L-dihidroxifenilalanina.

No obstante, el primer lote obtenido se sometió a ensayo biológico para ver su efectividad como medicamento (tabla 5).

TABLA 5. Resultados de ensayos biológicos


 
Melanocitos/mm2
Rangos muestrales
GI placebo
30,82
-
GII M-Ind
40,25
-
GIII primer lote
37,34
-
Pb
-
2 533
Primer lote
-
5 062
M-Ind
-
5 954,5

Pb: placebo; GII M-Ind y M-Ind: melagenina industrial tomada como referencia interna.

En la tabla 5 se refleja el conteo de melanocitos/mm2 y los rangos muestrales comparando el placebo (alcohol sin principio activo) GI, el primer lote experimental GII y la melagenina industrial tomada como referencia GIII.

DISCUSIÓN

De acuerdo con la tabla 1 y tomando en consideración las medias obtenidas de los 6 experimentos, se llega a 82,19 % de remoción de sólidos y un efecto de disminución de la absorbancia al eliminar la turbidez por el empleo de la placa filtrante cubana que incide de forma favorable en el producto terminado.

Durante el control del proceso al comparar ambos lotes entre sí, se observa similitud en los tiempos de filtración a pesar de que los volúmenes a filtrar son ligeramente diferentes. Esto es una medida de la reproducibilidad en el nivel de compactación de la torta de decalite en las placas para cada lote.

De acuerdo con los análisis de control químico se observan resultados similares en los diferentes controles realizados entre ambos lotes.

La efectividad como medicamento se comprobó al realizarse el análisis biológico. Según éste no hay diferencias significativas entre este lote y el lote industrial tomado como referencia interna, lo que permite su empleo en el tratamiento del vitiligo.

En los cromatogramas obtenidos del lote industrial tomado como referencia y el primer lote obtenido con el empleo de placas cubanas (fig.), se observan diferentes fracciones de proteínas que se pueden superponer de un lote a otro. Hay 3 fracciones bien definidas y un hombro que coinciden en ambos lotes. Estas fracciones presentan similares tiempos de retención.

Figura1

FIG. Perfil proteico de 2 cromatogramas: 1) con el empleo de melagenina obtenida por medio de placas cubanas y 2) con melagenina industrial de referencia.

La evaluación realizada en el filtro prensa tomando en consideración el control que se realiza durante el proceso, permitió llegar a la conclusión de que las placas filtrantes cubanas modelo Filtec 00 pueden emplearse con buenos resultados en el proceso de filtración de la melagenina loción.

Se obtuvieron 2 lotes cuyos parámetros de control analítico coinciden con el medicamento obtenido al emplear las placas convencionales de importación.

Se logró realizar un fraccionamiento proteico en uno de los lotes obtenidos con el empleo de las placas filtrantes cubanas y se comparó con el patrón de referencia industrial interna mediante un sistema de filtración por gel; los resultados obtenidos fueron similares.

SUMMARY

Melagenine lotion is a drug extracted from human placenta. It is identified as a low molecular weight lipoprotein that has proven its efficiency to cure vitiligo. A system of cellulose plates is used during the productive process of obtention of this extract at the station of filtration of the Center of Placental Histotherapy. The present paper is aimed at studying the use and evaluation of plates of national production model Filtec 00 made at the Cuban 9 Union of Research and Production for obtaining the product. To this end, the filtre was evaluated taking into account some operational criteria in addition to drug quality control parameters.

Subject headings: LIPOPROTEINS; PLACENTAL EXTRACTS; DRUG QUALITY; FILTRATION; DRUG INDUSTRY.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

  1. Osa JA de la. Desafiando lo incurable. Revelaciones del Dr. Carlos Miyares Cao. Aporte cubano al tratamiento del vitiligo. Madrid:Editorial Sangura;1996:23-4.
  2. Clark JM, Fremn WH. Determination a-aminos libres. Experimental Biochemistry 1964;20:563.
  3. Boehringer Mannhein Gubh. Diagnostic Watson D. Test combination colesterol. Clin Chem Acta 1960;5:10.
  4. The United State Pharmacopeia 23. Tautan: Rand Mc Nallv;1995:1745. Sigarroa A. Biometría y diseño experimental I parte. La Habana:Editorial Pueblo y Educación;1985:29.
Recibido: 4 de mayo de 1999. Aprobado: 4 de junio de 1999.

Lic. Guillermo Lago Mendoza. Centro de Histoterapia Placentaria (Planta). Ciudad de La Habana, Cuba.
 

1 Licenciado en Química. Investigador Auxiliar.
2 Licenciada en Química.
3 Doctor en Ciencias Veterinarias. Investigador Titular.
4 Médico Veterinario.
5 Ingeniera Química.

Creative Commons License Todo el contenido de esta revista, excepto dónde está identificado, está bajo una Licencia Creative Commons