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Revista Cubana de Farmacia

versión impresa ISSN 0034-7515versión On-line ISSN 1561-2988

Rev Cubana Farm v.34 n.1 Ciudad de la Habana ene.-abr. 2000

 

Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana

Suspensión oral antidiarreica de Psidium guajaba, L.

Yamilet Irene Gutiérrez Gaitén,1 Migdalia Miranda Martínez,2 Ofelia Bilbao Revoredo,3 José de la Paz Naranjo4 y Luis E. Rodríguez Rodríguez5

RESUMEN

Se efectuó la estandarización de la droga cruda de Psidium guajaba, L., así como el diseño y elaboración de una suspensión oral antidiarreica a partir de dicho material vegetal previamente secado y tamizado. En la estandarización de la droga cruda, se encontró que todos los parámetros de calidad evaluados estaban dentro de los límites establecidos por la Norma Ramal de Salud Pública (NRSP) 308,1992. A la formulación diseñada se le determinó su estabilidad física, química y microbiológica, con resultados satisfactorios durante los 270 d de evaluación. Finalmente se desarrolló un estudio preclínico preliminar de la suspensión teniendo en cuenta las pruebas farmacológicas en ratas, y se obtuvo como resultado que la formulación presentaba efecto antidiarreico a las dosis de 3, 6 y 9 mg/kg de peso, bajo condiciones experimentales en los animales evaluados.

Descriptores DeCS: ANTIDIARREICOS/normas; EXTRACTOS VEGETALES/ /normas; PLANTAS MEDICINALES; ESTABILIDAD DE MEDICAMENTOS; CALIDAD DE LOS MEDICAMENTOS.

En los últimos años la medicina tradicional ha tomado notable auge en los países en desarrollo, constituyendo no sólo al rescate de un rico acervo cultural, sino también una alternativa de solución para los numerosos problemas que confrontan en el campo de la salud pública.

Cuba, cuyos planes de salud presentan una cobertura que abarca las más recónditas zonas del país, posee una rica flora y una valiosa tradición en la utilización de las plantas medicinales, caracterizándose por las múltiples propiedades atribuidas, entre ellas, la acción antidiarreica, en la cual nos basamos para la realización de este trabajo, que persiguió como objetivos: la estandarización de la droga cruda de Psidium guajaba, L. mediante la determinación de sus parámetros de calidad; el diseño de una suspensión con características antidiarreicas; el estudio de estabilidad física, química y microbiológica de la formulación diseñada, y un estudio preclínico preliminar con la utilización de pruebas farmacológicas en ratas.

MÉTODOS

Como material vegetal se emplearon hojas adultas de Psidium guajaba, L., recolectadas en horas tempranas de la mañana en la finca "La Quirubina Lazos de la Vega", en Ceiba del Agua, provincia La Habana, encontrándose las plantas en estado fenológico vegetativo. Las hojas se lavaron, escurrieron y se secaron en estufa con recirculación de aire modelo P-SELECTA (30-35 ° C) durante 4 d, posteriormente se pulverizaron en un molino de cuchilla marca PULVEX.

En la determinación de los parámetros de calidad de la droga cruda tuvimos en cuenta: hojas ennegrecidas (%), cenizas totales (%), materia orgánica extraña (%), materia inorgánica extraña (%), humedad residual (%) por el método azeotrópico y sustancias solubles en agua (%). Para dichas determinaciones nos apoyamos en las Normas Ramales de Salud Pública 3081 y 309.2

A la droga cruda se le realizó un análisis químico donde analizamos: tamizaje fitoquímico (según el procedimiento de la Guía Metodológica para la Investigación Fitoquímica en Plantas Medicinales. 1995:16-19); identificación de flavonoides por cromatografía en capa delgada, con el empleo de gel de sílice como soporte y como fase móvil acetato de etilo : ácido fórmico : agua (8:1:1); cuantificación de taninos por el método espectrofotométrico del tungsto-molíb-dico-fosfórico (descrito por Miranda M en el Manual de prácticas de laboratorio de análisis farmacognóstico. 1992:54-5) y cuantificación de flavonoides totales expresados como quercetina (se aplicó el método espectrofotométrico descrito por Méndez G, en su Tesis de Maestría: Estudio farmacognóstico y fitoquímico preliminar de Cymbopogon citratus (DC) stapf y sus extractos; 1996:36-7).

Para preparar la suspensión empleamos el método de dispersión de polvos, según el procedimiento reportado por Bilbao.3 La formulación diseñada estuvo compuesta por: polvo de hojas de guayaba, carboximetilcelulosa de alta viscosidad, rojo # 3, propil y metil parabeno, sacarina sódica, metabisulfito de sodio, glicerina y agua destilada. Para llegar a dicha formulación se efectuó un análisis previo con varios agentes suspensores a diferentes porcentajes, y diversos colorantes. Todos los componentes utilizados fueron de calidad farmacéutica.

A dicha preparación se le realizó una prueba de preferencia o aceptación con 100 jueces no adiestrados para evaluar olor, color y sabor mediante una escala hedónica de 5 puntos: me gusta mucho (5 puntos); me gusta (4 puntos); ni me gusta ni me disgusta (3 puntos) y me disgusta mucho (1 punto). La metodología empleada para llevar a cabo la prueba se basó en lo reportado por Espinosa4 y Newell.5

Los estudios de estabilidad se realizaron durante 270 d en estante.

En la estabilidad física tuvimos en cuenta las características organolépticas olor, color y sabor, variación del pH; factor de sedimentación; redispersabilidad y comportamiento reológico, donde se determinó los valores de áreas tixotrópicas mediante los reogramas obtenidos.

El análisis de estabilidad química se realizó mediante la cuantificación de 2 posibles compuestos responsables de la acción antidiarreica en la guayaba (taninos y el flavonoide quercetina), por los métodos espectrofotométricos antes señalados.

El control microbiológico se efectuó en el Laboratorio de Microbiología del Departamento de Alimento del Instituto de Farmacia y Alimentos IFAL; se realizó un conteo de hongos, bacterias y levaduras a la supensión recién elaborada, a los 180 y 270 d después de su elaboración. Se siguió el procedimiento descrito en la Norma Cubana 26-1216 y en la USP XXII.7 En el estudio farmacológico de la suspensión se utilizaron ratas Wistar machos adultos con peso entre 180 y 200 g, los que fueron escogidos al azar de los existentes en el vivario del Instituto Superior de Medicina Militar "Dr. Luis Díaz Soto". Los animales se distribuyeron aleatoriamente en grupos experimentales de 15 animales cada uno: grupo I correspondió al control; grupo 2 el placebo; grupos 3, 4, y 5 se les administró suspensión por vía oral a las dosis de 3, 6 y 9 mg/kg de peso, respectivamente. Las variables estudiadas fueron: tiempo de aparición de la primera deposición y frecuencia de deposiciones, según Litter8 y Megens.9

Todos los resultados obtenidos fueron procesados de forma automatizada mediante el paquete estadístico MICROSTA y ANOVA 1; se determinó la media aritmética, desviación estándar, límites de confianza y análisis de varianza con comparación de medias. En el caso particular del estudio farmacológico se realizó ANOVA 1 y la prueba de Kruskal Wallis a posteriori para detectar la diferencia entre grupos, con el 95 % de confianza.

RESULTADOS

Con el objetivo de estandarizar la materia prima vegetal utilizada y declararla apta para su posterior utilización en la elaboración del fitofármaco propuesto, procedimos a la determinación de los parámetros de calidad que se reportan en la Norma Ramal de Salud Pública 308 para este tipo de planta (tabla 1). Se obtuvo como resultados el 4,00 % (± 0,02) de hojas ennegrecidas; 1,00 % (± 0,01) de materia orgánica extraña; 0,10 % (± 0,01) de materia inorgánica extraña; 8,50 % (± 0,04) de humedad residual; 28,42 % (± 0,07) de sustancias solubles en agua y 7,15 % (± 0,03) de cenizas totales.

Tabla 1. Parámetros de calidad de la droga cruda de Psidium guajaba, L. y los de la NRSP 308 para esta especie
Parámetros 
Droga cruda
NRSP-308
Hojas ennegrecidas (%)
4,00 (±0,02)
Máximo 5,00
Materia orgánica extraña (%)
1,00 (±0,01)
Máximo 3,00
Materia inorgánica extraña (%)
0,01 (±0,01)
Máximo 1,00
Humedad residual (%)
8,50 (±0,04)
Máximo 10,00
Sustancias solubles en agua (%)
28,42 (±0,07)
Mínimo 10,00
Cenizas totales (%)
7,15 (± 0,03)
Máximo 10,00

En el análisis químico de la droga por tamizaje fitoquímico, se detectó la presencia de taninos, flavonoides, sustancias reductoras, saponinas y aminoácidos.

En la identificación cromatográfica de flavonoides se obtuvieron 6 manchas fluorescentes que oscilaron desde el amarillo hasta el amarillo verdoso; además, se pudo comprobar la presencia de quercetina en la planta por comparación del valor de Rf de un patrón.

En el proceso de cuantificación de los posibles compuestos responsables de la acción antidiarreica en la guayaba, se obutvo una concentración de taninos de 10,26 % (± 0,10) y 13,88 % (± 0,07) de flavonoides totales expresados como quercetina.

A la suspensión oral antidiarreica diseñada se le aplicó una prueba de preferencia o aceptación, la cual brindó valores medios de 3,31 % (± 0,13), 3,47 (± 0,11) y 3,25 (± 0,15) puntos para el olor, color y sabor respectivamente.

En la establidad física de la formulación se evaluó inicialmente las propiedades organolépticas; se obtuvo como resultado un olor a guayaba, color rosado carmelitoso y sabor a guayaba. Otros parámetros determinados se muestran en la tabla 2.

Tabla 2. Resultados de la estabilidad física de las suspensiones
 
Tiempo (d) 
PH
Parámetros
Áreas tixotrópicas(cm2)
Factor de sedimentación
Redispersabilidad (oscilaciones-minutos)
0
5,55 (± 0,034)
1,00 (± 0,056)
-
6,31 (± 0,023)
3
5,56 (±0,082)
0,96 (±0,036)
-
6,31 (±0,029)
7
5,55 (± 0,041)
0,82 (±0,018)
-
6,30 (± 0,018)
15
5,52 (± 0,033)
0,65 (± 0,023)
-
6,28 (±0,030)
30
5,54 (± 0,031)
0,62 (± 0,017)
11-13(±0,030)
6,25 (± 0,015)
90
5,53 (± 0,011)
0,62 (±0,037)
12-14 (±0,038)
6,27 (± 0,031)
180
5,52 (± 0,064)
0,62 (±0,015)
14-16 (±0,043)
6,26 (±0,036)
270
5,51(± 0,043)
0,62(± 0,012)
17-20 (± 0,050)
6,25 (±0,029)

Los resultados del estudio de estabilidad química, donde se determinó el contenido de taninos y flavonoides totales expresados como quercetina, se presentan en la tabla 3.

TABLA 3. Contenido de taninos y flavonoides expresados como quercetina en la suspensión
Tiempo (d)
Contenido de flavonoides totales expresados como quercetina (%)
Contenido de taninos (%)
0
10,74 (± 0,070)
8,79 (± 0,088)
15
10,70 (± 0,067)
8,76 (± 0,072)
30
10,62 (± 0,057)
8,70 (± 0,027)
90
10,59 (± 0,054)
8,69 (± 0,032)
180
10,40 (±0,034)
8,52 (± 0,055)
270
10,20 (± 0,053)
8,49 (± 0,071)

El control microbiológico realizado a la preparación farmacéutica indicó que no hubo crecimiento de hongos ni levaduras, y aunque existió crecimiento de bacterias, éste se encontró por debajo del límite máximo admitido (102) por la Norma Cubana 26-121,6 para preparaciones no estériles. Tampoco se detectó la presencia de patógenos.

En el estudio preclínico preliminar efectuado a la suspensión se obtuvo como resultado una disminución del cuadro diarreico en los animales evaluados con las dosis de 3, 6 y 9 mg/kg de peso.

DISCUSIÓN

Los parámetros de calidad determinados a la droga cruda de Psidium guajaba, L. Se compararon con los informados en la Norma Ramal de Salud Pública (NRSP) 308 para esta especie (tabla 1); se observó que el material vegetal estaba apto para su posterior utilización en la elaboración del fitofármaco propuesto, pues sus índices numéricos se encontraron dentro de los límites máximos y mínimos establecidos.

Al efectuar el tamizaje fitoquímico a la droga cruda se detectó la presencia de los posibles compuestos que según muchas referencias bibliográficas están relacionados con la acción antidiarreica de la guayaba, o sea, taninos y flavonoides, entre ellos la quercetina.

La identificación cromatográfica de flavonoides resulta positiva cuando aparecen manchas fluorescentes que oscilan desde el amarillo hasta el amarillo verdoso, lo cual corresponde con la experiencia realizada, además, se comprueba la existencia de uno de los metabolitos objeto de estudio, el flavonoide quercetina.

Con respecto a la cuantificación es necesario señalar que el contenido de taninos está bastante próximo al valor informado en la literatura, que es aproximadamente el 10 %, sin embargo, para la concentración de flavonoides totales expresados como quercetina no se reportan datos.

Teniendo en cuenta los resultados obtenidos en la prueba de preferencia o aceptación de la formulación diseñada, se puede considerar que ésta fue aceptada desde el punto de vista organoléptico, pues se alcanzaron valores medios ubicados entre las opciones me gusta (4 puntos) y ni me gusta ni me disgusta (3 puntos), para el olor, color y sabor.

Las características organolépticas determinadas en la estabilidad física, permanecieron inalterables los 270 d de estudio.

Según los resultados de la tabla 3 es necesario destacar que para un nivel de significación del 95 % de confianza al aplicar ANOVA 1, no se observaron diferencias estadísticamente significativas en los valores de pH y en los de áreas tixotrópicas durante los 270 d de análisis.

En cuanto al factor de sedimentación, es lógico que éste disminuya en el tiempo hasta un momento en que se mantenga constante, aunque debe estar próximo a la unidad, como es el caso de la experiencia realizada. La redispersabilidad, a pesar de que aumenta su valor, no impidió la fácil redispersión y homogeneidad en la preparación.

Según el estudio de estabilidad química (tabla 3), el contenido de taninos y flavonoides totales expresados como quercetina se mantuvo bastante estable durante los 270 d.

Por su parte, el control microbiológico de la suspensión también indicó buena estabilidad.

En el estudio preclínico preliminar efectuado en ratas, al realizar las comparaciones estadísticas entre grupos control y dosis de 3, 6 y 9 mg/kg de peso, se encontró que la suspensión variaba en forma significativa los valores, tiempo de aparición de la primera deposición y su frecuencia; también se demostró que no existían diferencias estadísticamente significativas entre las 3 dosis ensayadas, y finalmente se obtuvo disminución del cuadro diarreico en los animales evaluados con las 3 dosis.

Teniendo en cuenta todos los resultados de nuestro trabajo podemos plantear que:

  • La droga cruda de Psidium guajaba, L. empleada, cumple con los parámetros de calidad establecidos por la Norma Ramal de Salud Pública 308, correspondiente a esta especie.
  • Según los resultados de la encuesta efectuada a 100 jueces no adiestrados, al realizar la prueba de preferencia o aceptación con la suspensión diseñada, podemos considerar que ésta fue aceptada por su olor, color y sabor.
  • La formulación se puede considerar física, química y microbiológicamente estable durante los 270 d de análisis.
  • La suspensión de Psidium guajaba, L. a la dosis de 3, 6 y 9 mg/kg de peso, administrada por vía oral, posee efecto antidiarreico bajo las condiciones experimentales empleadas en las ratas estudiadas.

SUMMARY

The standarization of a raw drug from Psidium guajaba L. As well as the design and production of an oral antidiarrheal suspension from this plant after drying and sieving were carried out. It was found that all the assesed quality parameters were within the limits set the Public Health Branch Standard 308 of 1992. The physical, chemical and microbiological stability of the designed formulation was determined, with satisfactory results during 270 days of testing. Finally, a preliminary pre-clinical study was conducted, taking the pharmacological tests in rats into consideration, which resulted in the formulation having an antidiarrheal effect with doses of 3,6 and 9 mg per kg of weight under experimental conditions.

Subject headings: ANTIDIARRHEALS/standards; PLANT EXTRACTS/standards; PLANTS, MEDICINAL; DRUG STABILITY; DRUG QUALITY.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

  1. Norma Ramal. NRSP 308. Medicamentos de origen vegetal. Hojas de guayaba. Especificaciones. 1992:13-5.
  2. Norma Ramal. NRSP 309. Medicamentos de origen vegetal. Droga cruda. Método de ensayo. 1992:16-20.
  3. Bilbao O, Fernández E, Iraizos A. Conferencias de tecnología farmacéutica I. La Habana: Editorial Pueblo y Educación; 1989:331-43.
  4. Espinosa JM. Normalización, metodología y control de calidad. La Habana: Universidad; 1986:238-69.
  5. Newell GJ, Farlane JD. Expanded tables for multiple comparison procedures in the analysis of ranked data. J Food Sci 1987;52(6):1721-5.
  6. Norma Cubana 26-121. Medicamentos. Medicamentos no estériles. Determinaciones microbiológicas. NC-26-1, 1993:1-3.
  7. United State Pharmacopeia. USP XXII: 22 ed. Easton: Mark Printing; 1990:1479-83.
  8. Litter M. Farmacología experimental y clínica. 6 ed. Buenos Aires: El Ateneo; 1983:904-9.
  9. Megens AAHP, Awouters FAL, Niemgers CJE. Normalization of small intestinal propultion with loperamide like antidiarrheals in rats. Eur J Pharmacol 1990;178(3):357-64.

Recibido: 31 de agosto de 1999. Aprobado: 4 de octubre de 1999.
M. Yamilet Irene Gutiérrez Gaitén. Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana. Ave 23 No. 21422 entre 214 y 222, La Coronela, municipio La Lisa, Ciudad de La Habana, Cuba.
 
 

1 Master en Tecnología y Control de Medicamentos. Aspirante a Investigadora.
2 Doctora en Ciencias Químicas. Profesora Titular.
3 Doctora en Ciencias. Profesora Titular.
4 Licenciado en Bioquímica. Investigador Agregado.
5 Master en Tecnología y Control de Medicamentos. Profesor Instructor.
 

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