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Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos

Ensayo de disolución para las tabletas de pentoxifilina 400 mg de liberación controlada

Alfredo Fernández Serret,1 Reynaldo García Pereira,2 Maricela Lara Castro,3 Rafael León Rodríguez 4 y Esther Alonso Jiménez5

Resumen

Se desarrolló y validó un método por espectrofotometría ultravioleta para evaluar los perfiles de disolución de las tabletas de pentoxifilina de liberación controlada. Se comprobó la condición de insaturación de la pentoxifilina en el medio de disolución empleado y se evaluaron los parámetros de especificidad, linealidad y precisión, así como la influencia de la filtración y la estabilidad del principio activo. Los resultados alcanzados demuestran la fiabilidad del método y su posibilidad de empleo en el control de la calidad del medicamento.

Palabras clave: Pentoxifilina, validación, ensayo de disolución, liberación controlada.

El ensayo de disolución constituye quizás el método más importante en el desarrollo de una forma sólida oral. Es empleado desde el comienzo del desarrollo de la formulación y utilizado en fases posteriores a este. Permite el estudio de los mecanismos de liberación de la droga en las formulaciones de liberación controlada y la obtención de un perfil de disolución predeterminado y reproducible. Es también utilizado para evaluar los procesos de fabricación e identificación de las variables críticas de este, permite el estudio de la calidad intralotes e interlotes, el estudio de estabilidad del preparado farmacéutico y en algunos casos predice la biodisponibilidad y bioequivalencia de productos sólidos orales.1, 2

Diferentes compañías farmacéuticas reportan métodos para evaluar la liberación in vitro de pentoxifilina en tabletas de liberación controlada. Las condiciones establecidas consisten en emplear agua destilada desgasificada como medio de disolución y un volumen equivalente a 900 mL. Utilizan indistintamente el aparato I (cesta rotatoria) o el aparato II (paleta) con velocidades de agitación de 100 y 75 min-1 respectivamente. La cuantificación del principio activo la realizan por espectrofotometría UV o por cromatografía líquida de alta eficiencia.3-6

Como en todo método analítico, es indispensable efectuar la validación de este, para facilitar la utilización rutinaria con la fiabilidad adecuada. La USP 247 plantea para el ensayo de disolución (categoría III) el estudio de la precisión, mientras que los restantes parámetros se realizarán en dependencia de la naturaleza específica del ensayo. Sin embargo, en la literatura especializada se incluyen aspectos tan importantes como: la comprobación de la condición de insaturación, la especificidad con respecto al placebo, la linealidad y precisión, la influencia de la filtración y la estabilidad del principio activo.8, 9

La pentoxifilina y sus metabolitos mejoran la fluidez de la sangre disminuyendo su viscosidad y favoreciendo la flexibilidad eritrocitaria. Es empleada en el tratamiento de enfermedades oclusivas de las arterias periféricas y alteraciones circulatorias de origen aterosclerótico, inflamatorio o funcional, úlceras de piernas y gangrena, y se comercializa en forma de tabletas de liberación controlada.10

El presente trabajo tuvo como objetivo el desarrollo y la validación del método de disolución empleado para estudiar y controlar los perfiles de liberación de las tabletas de pentoxifilina 400 mg de liberación controlada.

Métodos

Como sustancia de referencia se empleó materia prima de pentoxifilina de la firma japonesa SHIRATORI Pharmaceutical Co., Ltd, perteneciente al lote 3000503 y valorada previamente en el Departamento de Patrones de los Laboratorios del Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM).

Para la realización de este estudio se emplearon placebos revestidos y muestras correspondientes a los lotes 99001 y 99002 de tabletas de pentoxifilina. El agua destilada empleada responde a la calidad requerida para este tipo de análisis.

Las condiciones del ensayo de disolución utilizadas para la evaluación de los perfiles fueron:

Aparato: cesta, 100 r.p.m.
Medio: agua destilada degasificada, 900 mL.
Tiempo: cada 1 h hasta 12 h.
l: 275 nm.
Equipo: disolutor Erweka DT 6 RE de 6 plazas.

Las mediciones se realizaron en un espectrofotómetro UV-Vis de la marca Spectronic Genesys 2 PC.

Validación del ensayo de disolución

Condición de insaturación

Se comprobó la condición de insaturación tomando en consideración la solubilidad de la pentoxifilina en agua a 37 °C reportada en la literatura.11 Debe cumplirse que Cs £ 0,15 S, donde Cs representa la concentración máxima de pentoxifilina disuelta en las condiciones de ensayo y S es la solubilidad de la pentoxifilina en agua a 37 °C.

Especificidad

Este estudio se realizó con el empleo de 6 unidades del placebo revestido y según el procedimiento descrito para el ensayo de disolución.

Linealidad

Se comprobó la linealidad mediante la preparación de una curva de calibración en un intervalo de concentración desde 0,64 hasta 19,2 mg/mL (3,6-108,0 %) de la cantidad teórica declarada que incluyó 8 concentraciones diferentes.

Precisión

En este estudio se emplearon muestras de 6 unidades de los lotes 99001 y 99002, y se evaluaron en 2 días diferentes.

Influencia de la filtración

Con el objetivo de probar la posible interferencia del sistema de filtración empleado, se analizaron 6 unidades del lote 99002 y se compararon entre sí los resultados de las muestras filtradas con papel de filtración medio-rápida con las muestras centrifugadas a 3 000 min-1 por espacio de 10 min.

Estabilidad del principio activo

Para este estudio se analizó la estabilidad de la curva de calibración de la pentoxifilina, con concentraciones de 5, 10 y 15 mg/mL, las mediciones se realizaron antes y después del tratamiento (24 h a 37 °C).

Todos los resultados obtenidos fueron evaluados estadísticamente con la ayuda del programa Origin Version 5.0 para Windows.

Resultados

Condición de insaturación

Según reporta la literatura,11 la solubilidad (S) de la pentoxifilina es de 191 mg/mL a 37 °C. Teniendo en cuenta la dosis de la tableta (400 mg) y el volumen empleado del medio de disolución (900 mL), se calculó la condición de insaturación. La concentración máxima que alcanza la pentoxifilina en el ensayo de disolución es de 0,4444 mg/mL, mientras que el valor de 0,15 S es equivalente a 28,65 mg/mL.

Especificidad

En la tabla 1 se presentan los resultados del estudio de especificidad donde se muestra la absorbancia de los placebos a diferentes tiempos.

TABLA 1. Resultados del estudio de especificidad

Tiempo (h)	Absorbancia de los placebos
	1	2	3	4	5	6
1	0,004	0,002	0,001	0,003	0,003	0,001
2	0,003	0,003	0,003	0,004	0,003	0,003
4	0,002	0,003	0,001	0,003	0,003	0,003
6	0,003	0,002	0,001	0,000	0,001	0,000
8	0,000	0,002	0,000	0,000	0,000	0,000
10	0,003	0,003	0,002	0,004	0,002	0,000
12	0,002	0,002	0,000	0,002	0,002	0,002

Linealidad

Al aplicar el método de los mínimos cuadrados a los resultados registrados, se obtuvo la ecuación de la recta que se expresa según: y = 0,00393 + 0,0357x. El coeficiente de correlación lineal fue de 0,9999. Al emplear la prueba de linealidad, el valor de desviación estándar relativa fue del 0,29 %, y al aplicar la prueba de proporcionalidad, el intervalo de confianza del término independiente incluye el cero.

Precisión

En la tabla 2 y 3 se exponen los resultados de este estudio al analizar los lotes 99001 y 99002 en 2 días diferentes. Se reportan además los valores de la prueba de la t de Student calculada para cada hora.

TABLA 2. Resultados del estudio de la precisión. Lote 99001

Tiempo (h)	1er día Concentración en %*	2do día Concentración en % *	t cal
1	17,95	18,12	0,5789
2	28,35	28,32	0,0523
3	36,48	36,70	0,4174
4	46,15	46,94	1,1742
5	52,77	53,74	1,0787
6	59,89	60,80	0,9287
7	66,08	67,02	0,9037
8	71,57	72,44	0,7696
9	76,89	77,64	0,6547
10	80,93	81,50	0,5830
11	85,17	85,29	0,1153
12	88,77	88,94	0,1686
			t tab (0,05; 10) = 2,23

          * Valor promedio de 6 determinaciones.

TABLA 3. Resultados del estudio de la precisión. Lote 99002

Tiempo (h)	1er día Concentración en % *	2do día Concentración en % *	t cal
1	16,62	16,56	0,2451
2	26,18	26,53	0,8165
3	34,25	34,70	0,9573
4	43,94	44,57	0,9570
5	51,23	51,92	0,9679
6	57,74	58,53	1,1474
7	65,87	65,93	0,0712
8	70,82	71,35	0,6098
9	75,82	76,30	0,6051
10	80,48	81,22	1,1328
11	85,58	85,02	0,7126
12	88,60	88,80	0,1696
			ttab (0,05; 10) = 2,23

          * Valor promedio de 6 determinaciones.

Influencia de la filtración

En la tabla 4 se presentan los resultados de las medias de los perfiles obtenidos al analizar el lote 99002 con el empleo de muestras filtradas y muestras centrifugadas, así como los valores de la prueba de la t de Student calculada para cada hora.

TABLA 4. Resultados del estudio de la influencia de la filtración

Tiempo (h)	Muestras filtradas Concentración en % *	Muestras centrifugadas Concentración en % *	t cal
1	17,78	17,65	0,4018
2	27,66	27,85	0,4488
3	36,86	36,49	0,7352
4	46,33	46,25	0,1098
5	53,18	53,22	0,0433
6	59,03	59,44	0,5583
7	65,44	65,34	0,1282
8	71,37	71,19	0,2349
9	75,82	76,24	0,4953
10	81,60	82,20	0,7906
11	85,95	85,49	0,4446
12	90,65	89,25	1,4868
			ttab (0,05; 10 ) = 2,23

          * Valor promedio de 6 determinaciones.

Estabilidad del principio activo

Los resultados de la curva de calibración antes y después del tratamiento se presentan en la tabla 5.

TABLA 5. Estabilidad del principio activo

Inicial		24 h
Concentración (mg/mL)	Absorbancia	Concentración (mg/mL)	Absorbancia
5,0	0,184	5,0	0,186
5,0	0,185	5,0	0,189
5,0	0,187	5,0	0,188
10,0	0,364	10,0	0,368
10,0	0,363	10,0	0,365
10,0	0,366	10,0	0,370
15,0	0,538	15,0	0,540
15,0	0,536	15,0	0,539
15,0	0,539	15,0	0,541
Intercepto = 0,0101 a ± t Sa [0,0060; 0,0141] Pendiente = 0,0352 b ± t Sb [0,0348; 0,0355]		Intercepto = 0,0127 Pendiente = 0,0352

Discusión

Se comprueba que se cumple la condición de insaturación en el ensayo, pues la concentración máxima que alcanza la pentoxifilina (Cs) es de 0,4444 mg/mL, valor muy inferior al 0,15 S equivalente a 28,65 mg/mL.

Los valores de absorbancia obtenidos en el estudio de especificidad para los placebos pueden considerarse despreciables si se tiene en cuenta que una absorbancia de 0,004 representa solamente el 0,6 % de principio activo liberado. Estos resultados permiten afirmar que el método es específico en relación con los excipientes que componen la tableta, ya que prácticamente no se obtiene señal cuantificable en el máximo de absorción.

La curva de calibración a 275 nm se comportó de forma lineal en el intervalo de concentraciones comprendidas entre 0,64 y 19,2 mg/mL Se comprobó el cumplimiento de la ley de Lambert-Beer en el intervalo de concentraciones estudiado por el elevado valor del coeficiente de correlación alcanzado. El valor de la desviación estándar relativa resultó adecuado si se tiene en cuenta que el valor aceptable debe ser menor o igual que 2 %. De igual forma, no hubo significación en el intercepto de la curva. Además, se pudo comprobar que el procedimiento desarrollado permite evaluar niveles tan bajos como el 3,6 % de pentoxifilina liberada.

Los resultados del estudio de la precisión muestran que el método es preciso ya que en todos los casos no existieron diferencias significativas entre las medias para cada hora. Como se observa la tcalc resultó ser menor que la ttab.

No existieron diferencias significativas entre los resultados alcanzados de las medias de los perfiles obtenidos al analizar el lote 99002 con el empleo de muestras filtradas y muestras centrifugadas, ya que en todo momento la tcalc resultó ser menor que la ttab para cada hora. Esto permite asegurar que la filtración por papel no adsorbe el principio activo ni aporta interferencias al filtrado, por lo que es posible su empleo.

El principio activo resultó estable en las condiciones del ensayo, ya que los valores del intercepto y de la pendiente después del tratamiento a 37 °C por 24 h no difieren estadísticamente con respecto a las mediciones iniciales, pues se encuentran comprendidos en los intervalos de confianza respectivos de la curva de calibración inicial (condición necesaria y suficiente para demostrar la estabilidad del principio activo).

El método de disolución de las tabletas de pentoxifilina resultó fiable teniendo en cuenta que los parámetros evaluados cumplieron adecuadamente con los criterios establecidos en la literatura.

Summary

An ultraviolet spectrophotometry method was developed and validated to evaluate the dissolution profiles of the controlled-release pentoxiphillin tablets. The unsaturation condition of pentoxiphillin in the dissolution medium used was proved and the specificity, lineality and accuracy parameters, as well as the influence of filtration and stability of the active principle, were evaluated. The results obtained showed the reliability of the method and the possibility to use it in the quality control of the drug.

Key words: Pentoxiphillin, validation, dissolution test, controlled relea.

Referencias Bibliográficas

1. Murthy KS, Ghebre-Sellasie I. Current perspectives on the dissolution stability of solid oral dosage forms. J Pharm Sci 1993:82(2):113-26.
   
2. Dressman JB, Lennernas H. Oral drug absorption: Prediction and assessment. New York: Marcel Dekker Inc; 2000. p.197-8.
   
3. ANDA 74-962 March 31, 1999 Upsher-Smith Laboratories, Inc. Disponible en: http://www.fda.gov/cder/foi/appletter/1999/74962ltr.pdf.
   
4. ANDA 75-093 August 10, 1999 IMPAX Pharmaceuticals, Inc. Disponible en: http://www.fda.gov/cder/foi/appletter/1999/75093ltr.pdf.
   
5. ANDA 75-107 September 4, 1998 Watson Laboratories, Inc. Disponible en: http://www.fda.gov/cder/foi/appletter/1999/75191ltr.pdf.
   
6. ANDA 74-874 May 25, 1999 Sidmak Laboratories, Inc. Disponible en: http://www.fda.gov/cder/foi/appletter/1999/74874ltr.pdf.
   
7. United States Pharmacopoeial Convention. USP 24. United States Pharmacopoeia. 24 ed. Rockville: Mack Printing; 2000. p.2149-52.
   
8. Hanson WA. Handbook of Dissolution Testing. 2 ed. Eugene: Aster Publishing Co; 1991. p.94-8, 119-21.
   
9. Skoug JW, Halsteat GW, Theis DL, Freeman JE, Fagan DT, Rohrs BR. Strategy for the development and validation of dissolution tests for solid oral dosage forms. Pharm Tech 1996;December:8-15.
   
10. Parfitt K. Martidale. The complete drug reference. 32 ed. London: Pharmaceutical Press; 1999. p.925.
    
11. The Merck Index. 11 ed. New York: Merck; 1989. p.1131.

Recibido: 8 de enero de 2004. Aprobado: 13 de febrero de 2004.
MSc. Alfredo Fernández Serret. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. Ave 26, No. 1 605 entre Boyeros y Puentes Grandes, municipio Plaza de la Revolución, CP 10 600, Ciudad de La Habana, Cuba.

1 Master en Ciencias. Investigador Auxiliar.
2 Master en Ciencias. Investigador Aspirante.
3 Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. Investigador Aspirante.
4 Licenciado en Química. Investigador Auxiliar.
5 Técnica en Tecnología Farmacéutica.