Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos

Incremento de la actividad timolítica del clobetasol en forma liposomal

Juana I. Tillán Capó,1 Xiomara Pérez Gutiérrez2 y Carmen Carrillo Domínguez3

Resumen

Se realizó la evaluación comparativa de la acción timolítica de una jalea de clobetasol en forma liposomal en relación con una jalea de clobetasol libre de una formulación convencional, para lo cual se emplearon ratas adrenolectomizadas. Se aplicó el método de 6 puntos para la determinación de su potencia biológica y se pudo demostrar que la forma liposomal de la jalea de clobetasol tiene una acción 2,35 veces superior a las formulaciones de jalea de clobetasol libre. Esto permite disminuir la dosificación del clobetasol de la formulación liposomal.

Palabras clave: Clobetasol, ratas adrenolectomizadas, liposomas, actividad timolítica.

Los glucocorticoides se derivan del ciclopentanoperhidrofenantreno, se aíslan de la corteza suprarrenal y tienen acción antiinflamatoria en la artritis reumatoidea. Su aplicación tópica en forma de éster presenta efectos antiinflamatorios, antipruriginosos y vasoconstrictores.1

El propionato de clobetasol es un corticosteroide sintético para uso tópico dermatológico, utilizado en tratamientos cortos de dermatitis resistentes como psoriasis. Como todos los corticosteroides tópicos, una vez absorbido presenta un perfil farmacocinético similar a los corticosteroides sistémicos.1,2

En ratas y ratones jóvenes tratados con glucocorticoides se produce una disminución del tamaño y el peso del timo, conocida como involución del timo. Debido a esto la valoración biológica puede ser determinada mediante el peso del timo de ratas jóvenes suprarrenolectomizadas, donde la acción timolítica de los corticoides endógenos ha disminuido.1

Las formas liposomales en formulaciones dérmicas son útiles para lograr una liberación controlada del principio activo y disminuir los efectos adversos que se presentan en las formulaciones convencionales, ocasionadas por una mayor absorción en un menor tiempo del principio activo y una menor duración del efecto farmacológico.2

Las formulaciones en forma de liposomas resultan ser más efectivas con una mayor duración de dicho efecto en el tiempo en relación con las formulaciones convencionales, esto posibilita alcanzar efectos terapéuticos semejantes con menor dosificación del principio activo.

Es nuestro objetivo evaluar el efecto de una jalea liposomal de clobetasol comparativamente con una formulación convencional que contiene el clobetasol libre, con el fin de disminuir las dosificaciones y los efectos adversos reconocidos del clobetasol.

Métodos

Sustancia de ensayo: se evaluó una crema convencional de clobetasol al 0,05 %, producida por el Laboratorio Farmacéutico "Roberto Escudero" lote 9002, para la obtención de una curva dosis-efecto en busca de la zona de mayor linealidad y posteriormente realizar los ensayos de comparación entre la jalea de clobetasol liposomal y la jalea de clobetasol libre.

Una vez seleccionado el rango de dosis para la evaluación comparativa de las formulaciones, se procedió a trabajar con las jaleas de clobetasol liposomal y libre, con menores concentraciones del principio activo (0,01%), para minimizar los errores de pesada y contenido. Las sustancias de ensayos elaboradas en el Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM), Ministerio de Salud Pública (MINSAP) fueron: jalea de clobetasol 0,01% lote 14; jalea liposomal de clobetasol 0,01% lote 14-1; jalea de liposoma vacío (placebo) LP. Las formas liposomales se realizaron según patente WO-02/07702.3

Animales: Se utilizaron ratas machos jóvenes entre 80 y 100 g de peso corporal, procedentes de la colonia del Laboratorio de Control Biológico del CIDEM. Los animales fueron sometidos a una adrenolectomización antes de efectuar los tratamientos con clobetasol y evaluar su acción timolítica.

Las ratas adrenolectomizadas fueron rasuradas en la zona escapular mediante una máquina eléctrica Osser y tratadas durante 5 días con las sustancias de ensayo según el tratamiento establecido para cada caso.

Cinco horas después de la última aplicación se realizó el pesaje y sacrificio de las ratas con sobredosis de éter para narcosis, para la extracción del timo, pesaje y cálculo del peso relativo (x100), según el método descripto por Gilber.4

Con vistas a obtener una curva dosis-respuesta que permitiera seleccionar el rango de dosis de mayor incremento en la respuesta para la evaluación biológica del clobetasol, se realizó el ensayo siguiente:

Se utilizaron 48 ratas adrenolectomizadas divididas en 6 tratamientos: control sin tratamiento y 5 dosis de clobetasol crema 0,05%, para lo cual se pesaron cantidades de crema correspondiente a un equivalente de 5; 37,5; 75; 150 y 300 mg/animal del principio activo.

Del estudio anterior se decidió establecer las dosis para el ensayo comparativo entre jalea de clobetasol libre y jalea liposomal de clobetasol por debajo de 75 mg/animal.

Las dosis de clobetasol seleccionadas fueron: 5, 15 y 45 mg/animal, tanto para la jalea de clobetasol liposómica como para la jalea de clobetasol libre (utilizada como referencia). En ambas formulaciones la concentración de clobetasol se encontraba al 0,01 %.

Para el cálculo de potencia biológica de la forma liposomal del clobetasol se utilizó un programa computarizado de "Seis Puntos", tomando como base el sistema de cálculo de potencia establecido en la USP 24.5 También se utilizó el método de los Probits6 de ensayo indirecto para comparar la dosis efectiva cincuenta de ambas formulaciones y calcular la potencia relativa por esta vía.

Resultados

En la figura 1 se muestra la curva dosis-efecto de la crema de clobetasol sobre el peso relativo del timo de las ratas adrenolectomizadas, en la que se puede observar que los mayores cambios de peso relativo (respuesta) se alcanzan con las dosis más bajas de clobetasol (menor de 75 mg/animal), constituyendo este el rango de dosis seleccionado para el ensayo de valoración de potencia biológica.

FIG. 1. Curva dosis-efecto de la crema de clobetazol 0,05 %.

Las curvas dosis-respuestas de las formulaciones de jalea de clobetasol libre y jalea de clobetasol liposomal se observan en la figura 2. Ambas formulaciones muestran los mayores cambios del peso relativo del timo en los mismos rangos de dosis.

FIG. 2. Curva dosis-respuesta de jalea de clobetazol libre y clobetazol liposomal.

En la curva se observa un mayor efecto de la jalea de clobetasol liposomal, corroborado con el cálculo de la potencia relativa de la formulación liposomal, realizado por el método de 6 puntos, cuyo resultado fue 2,32 veces más potente que la jalea de clobetasol libre, con un límites de confianza entre 79 y 126 %.

En la comparación de las dosis efectivas cincuenta de las 2 formulaciones, se obtuvo una potencia relativa de la jalea de clobetasol liposomal 2,35 veces mayor que la jalea de clobetasol libre, con límite de confianza entre 91 y 109 %. Se encontró diferencia significativa entre las 2 curvas de dosis-respuesta y entre los 3 niveles de dosis de clobetasol estudiadas 5, 15, 45 mg/animal (p < 0,001). Dichas curvas mostraron paralelismo entre ellas (Par X2 = -0,3947< 6.31).6

El peso relativo del timo de los animales adrenolectomizados tratados con jalea de liposoma vacío y los que no recibieron tratamiento fue comparado; no existió diferencia entre ellos y presentaron pesos relativos medios de 0,366 y 0,356 respectivamente.

Discusión

Las curvas realizadas con las 3 formulaciones de clobetasol demostraron el efecto dosis dependiente del clobetasol sobre la disminución del peso del timo en los rangos de dosis seleccionados, lo que corroboró el efecto timolítico del clobetasol reportado y quedó claro el efecto de dicha sustancia a dosis muy bajas, por lo cual se hizo necesario disminuir las concentraciones de clobetasol en las formulaciones de jalea de clobetasol libre y liposomal a comparar. La figura 1 muestra su mayor pendiente con dosis por debajo de 75 mg/animal.

La jalea de clobetasol liposomal muestra una mayor disminución del tamaño del timo cuando se compara con igual dosis de jalea de clobetasoll ibre, esto se puede apreciar en la figura 2 donde se observa la tendencia al paralelismo entre ambas curvas.

Se debe señalar que los vehículos empleados en ambas jaleas fueron los mismos, con lo cual se descarta un posible efecto de los excipientes sobre la absorción del clobetasol que pudiera afectar la diferencia de la actividad timolítica encontrada entre las formulaciones ensayadas. Los resultados similares alcanzados para el peso del timo de los animales sin tratar y los tratados con placebo (jalea con liposomas vacíos), indican que los vehículos empleados no afectaron los resultados alcanzados con las formulaciones ensayadas.

En nuestro ensayo se apreció un efecto significativamente superior en la jalea de clobetasol liposomal ensayada, lo cual permite disminuir la dosis de clobetasol en las formulaciones de jalea liposomal, por lo menos un 50 %, con el fin de disminuir posibles efectos adversos y obtener resultados semejantes a los alcanzados con la formulación de jalea de clobetasol libre.

Summary

The comparative evaluation between the thymolytic action of clobetasol jelly in liposomal form and a free clobetasol jelly of a conventional formulation was made by using adrenolectomized rats. The 6-point method was applied to determine its biological potency. It was demonstrated that the liposomal form of clobetasol jelly has an action 2.35 times higher than the formulations of free clobetasol jelly. This allows to reduce the dosage of clobetasol from the liposomal formulation.

Key words: Clobetasol, adrenolectomized rats, liposomes, thymolytic activity.

Referencias Bibliográficas

1. Litter M. Farmacología experimental y clínica. 7ma ed. Buenos Aires: El Ateneo1986.p.1128-32.
   
2. Diccionario de Especialidades farmacéutica. 41 ed. México: Editorial PLM; S. 1995 .p. 665.
   
3. Pérez X, De la Paz N, García L. Formulación liposómica de propionato de clobetasol. 2002. (Patente WO-02/07702.)
   
4. Gilber RH, Arcese PS. Animal techniques for evaluating adrenocortical drugs. In: Nodine JH, Siegler PE. Animal and Clinical Techniques in Drug Evaluation. Chicago: Year Book. Medical Publishers; 1964. p.542.
   
5. United States Pharmacopeia and National Formulary. 24 ed. Rockville: Mark Printing; 2000. p.1837-40.
   
6. Litchfield JR, Wilcoxon F. Asimplified method of evaluating dose-effect experiments. J PharmacolExp Ther 1949;96:99.

Recibido: 5 de enero de 2004. Aprobado: 7 de febrero de 2004.
Lic. Juana I. Tillán Capó. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. Ave 26, No. 1605 entre Boyeros y Puentes Grandes, municipio Plaza de la Revolución, CP 10 600, Ciudad de La Habana, Cuba. E-mail: [e-mail]

1 Doctora en Ciencias Veterinarias. Investigadora Auxiliar.
2 Licenciada en Ciencias Farmacéutica. Investigadora Agregada.
3 Técnica en Farmacia.