Revista Cubana de Medicina Tropical, enero-junio, 1995

Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí"

Estudio de la susceptibilidad en cepas de Mycobacterium avium-intracellulare empleando el método de macrodilución en caldo

Lic. LILIAN M. MEDEROS CUERVO,<1 Dra. CARIDAD FERRA SALAZAR,1 Lic. CARLOS A. JIMENEZ MISAS<2 y Dr. JOSE A. VALDIVIA ALVAREZ 2

RESUMEN

Se utilizó el método de macrodilución en caldo para determinar la resistencia y/o sensibilidad de 10 cepas de micobacterias no tuberculosas (MNT) pertenecientes al Complejo Mycobacterium avium-intracellulare (MAI), aisladas de pacientes sintomáticos respiratorios. Las drogas empleadas fueron: isoniacida, ethambutol, rifampicina, estreptomicina, pirazinamida, gentamicina y amikacina. Con respecto a la susceptibilidad de las cepas en estudio, encontramos la mayor sensibilidad frente a las drogas ethambutol, amikacina y gentamicina. Se analizó la posibilidad de sustitución del medio de cultivo líquido Middlebrook 7H9, por el medio de cultivo líquido UIT-L. Se logró la normalización del método y se obtuvo acortamiento en el tiempo de lectura al utilizar el medio UIT-L.

Palabras clave: RESISTENCIA MICROBIANA A LAS DROGAS; MYCOBACTERIUM AVIUM/aislamiento & purificación; ENFERMEDADES RESPIRATORIAS/microbiología; ISONIACIDA; ETAMBUTOL; RIFAMPIN; ESTREPTOMICINA; PIRACINAMIDA; GENIAMICINA; AMICACINA.

INTRODUCCION

El avance más importante en la terapia de las enfermedades infecciosas fueron los antibióticos, término introducido por Waksman en 1945, para denominar algunas sustancias de origen biológico que actúan sobre los microorganismos.1

Con el desarrollo de la terapéutica infecciosa en general, muchos han sido los productos que inhiben el crecimiento de los diferentes géneros microbianos, hasta llegar a la aparición de drogas antimicobacterianas, entre éstas se destacan: isoniacida, estreptomicina, ethambutol, PAS, rifampicina, pirazinamida y otras, empleadas con gran eficacia para el tratamiento del Mycobacte rium tuberculosis. En la medida que han aumenta do las micobacteriosis producidas por micobacterias no tuberculosas (MNT) tanto pulmonares como extrapulmonares, se han tenido que introducir otras drogas como son las cefalosporinas, aminoglucósi dos y penicilinas. Estas MNT se han aislado de pacientes sintomáticos respiratorios, con lesiones ulcerosas en piel, con infecciones genitourinarias y desde hace algunos años se han encontrado vinculadas a pacientes inmunocomprometidos y con el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), de aquí la importancia en estos momentos de los estudios de sensibilidad a estas especies micobacterianas.2-10

Para el Mycobacterium tuberculosis el sistema más utilizado es el método proporcional de Canetti, el cual determina qué proporción de la población bacteriana es resistente a la droga utilizada. Como parte del desarrollo de métodos rápidos se incursiona en otros métodos con resultados promisorios, como macro y microdilución en caldo (utilizado preferentemente en micobacterias atípicas), el método radiométrico (BACTEC) y más reciente mente la bioluminiscencia. Todos estos métodos han sido aplicados a diferentes especies de MNT, principalmente las pertenecientes al Complejo MAI y Complejo Mycobacterium fortuitum pues éstas son las que con mayor frecuencia se aíslan en pacientes.11-20

El presente estudio tiene como objetivo aplicar el método de macrodilución en caldo, para conocer la sensibilidad y/o resistencia a diferentes drogas en un grupo de cepas aisladas de pacientes, pertenecientes al Complejo MAI, con la utilización de forma comparativa de los medios de cultivo líquidos Middlebrook 7H9 con solución enriquece dora de ácido oleico, albúmina bovina, dextrosa, catalasa (OADC), y el medio de cultivo UIT-L reportado en nuestro laboratorio, pues sería una nueva utilización para este medio de cultivo del cual ya hemos obtenido resultados satisfactorios, para la obtención de biomasa y pruebas bioquímicas de identificación.21-23

MATERIAL Y METODO

Se estudiaron 10 cepas aisladas de pacientes, pertenecientes al Complejo MAI, todas del Laboratorio Nacional de Referencias de Micobacterias y Tuberculosis del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" (IPK).

Las drogas utilizadas fueron: isoniacida, ethambutol, rifampicina, estreptomicina, pirazinamida, gentamicina y amikacina.

Se realizó el estudio por el método de macrodilución en caldo, descrito por Sanders et al. y Trimble et al.11,18

Se elaboraron los medios de cultivo selecciona dos, éstos fueron Middlebrook 7H9 con OADC y el medio UIT-L, estos medios se utilizaron simultáneamente para poder establecer la compara ción.21-23

Las diluciones utilizadas de las drogas antibacilares seleccionadas, fueron la concentración inicial de 128 mg/mL hasta 0,125. Posterior mente se adiciona la suspensión bacteriana de la cepa en estudio a una concentración de 1 mg/mL, según patrón 1 de la escala de Macfarland. Se incuba a 37 oC y se realizan las lecturas cada 7 días hasta el término de 4 semanas.

RESULTADOS Y DISCUSION

Los resultados con respecto a la drogorresisten cia de las cepas fueron: frente a la isoniacida las 10 cepas presentan sólo sensibilidad en la concen tración de 128 mg/mL. Las 10 cepas presentaron resistencia total a la pirazinamida. Todas las cepas con respecto al ethambutol presentaron sensibilidad hasta la concentración de 64 mg/mL.

Dos cepas presentaron sensibilidad a la estreptomicina a la concentración más alta, 128 mg/mL; el resto de las cepas fueron resistentes a esta droga. Con respecto a la rifampicina presentaron sensibilidad en la concentración 128mg/mL.

Frente a la amikacina, 9 cepas fueron sensibles a 128 mg/mL y 1 cepa fue sensible a todas las concentraciones. La gentamicina se comportó de forma similar, 8 cepas sensibles a la concentración de 128 mg/mL y 2 cepas hasta 64 mg/mL (figura 1).

Los resultados obtenidos en ambos medios de cultivo coinciden. La resistencia a la pirazinamida, isoniacida y estreptomicina en las cepas de MNT ya es conocida; sin embargo, es una droga recomendada para M. tuberculosis. 2,14,18

En nuestro estudio encontramos la mayor sensibilidad frente a las drogas ethambutol, amikacina y gentamicina, esto se corresponde con los resultados reportados por otros investigadores, principalmente en las cepas pertenecientes al Complejo MAI.3,4,17,20

De los resultados obtenidos simultáneamente en ambos medios de cultivo debemos señalar que en el caso donde la cepa presentaba resistencia a la droga en estudio, en el medio UIT-L se obtuvo un acortamiento en el tiempo de crecimiento (7 días), crecimiento mayor por lo que los resultados se podían observar desde la primera lectura (7 días), los resultados en el medio Middlebrook 7H9 se observaron a partir de la segunda lectura (14 días).

Por último, de acuerdo con nuestros resultados pudimos realizar la valoración e incorporación novedosa del medio UIT-L en este método, así como el reporte de patrones de susceptibilidad a las diferentes drogas seleccionadas de las cepas objeto de estudio (figuras 2 y 3).

<1Investigadora Auxiliar.
<2Investigador Titular.

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Recibido: 18 de agosto de 1994. Aprobado: 28 de noviembre de 1994.

Lic. Lilian M. Mederos Cuervo. Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" Apartado 601, Marianao 13, Ciudad de La Habana, Cuba.