SciELO - Scientific Electronic Library Online

 
vol.47 número2La estacionalidad de la enfermedad meningocócica en menores de 1 año.: Cuba, 1983-1990Evaluación de antígenos y antisueros para su utilización en el serodiagnóstico de aspergilosis índice de autoresíndice de materiabúsqueda de artículos
Home Pagelista alfabética de revistas  

Servicios Personalizados

Revista

Articulo

Indicadores

  • No hay articulos citadosCitado por SciELO

Links relacionados

  • No hay articulos similaresSimilares en SciELO

Compartir


Revista Cubana de Medicina Tropical

versión impresa ISSN 0375-0760versión On-line ISSN 1561-3054

Rev Cubana Med Trop v.47 n.2 Ciudad de la Habana jul.-dic. 1995

 

Marcadores fenotípicos en cepas de Aeromonas aisladas en Cuba de niños con enfermedad diarreica aguda

Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí"

Marcadores fenotípicos en cepas de Aeromonas aisladas en Cuba de niños con enfermedad diarreica aguda

Lic. LAURA BRAVO FARIÑAS,1 Lic. SUSANA SAN GERMAN SUAREZ,2 Dr. RAUL MONTE BOADA,3 Lic. AIDA CASTILLO ALVAREZ,4 Dra. MARIA M. RAMIREZ ALVAREZ5 y Téc. BELKYS GARCIA RODRIGUEZ6

RESUMEN

Se estudiaron 27 casos de Aeromonas aisladas de 300 niños menores de 5 años con enfermedad diarreica aguda (EDA), con el objetivo de demostrar la presencia de algunos marcadores fenotípicos asociados con la enteropatogenicidad, entre ellos: descarboxilación de la lisina, producción de acetil metil carbinol, enteroxigenicidad, citoxicidad y hemólisis. El ciento por ciento de las cepas estudiadas poseía 2 o más de los marcadores investigados y 13 (48 %) lisaron los eritrocitos de conejo con títulos mayor de 1:16. Se demostró la presencia de los marcadores en las especies Aeromonas hydrophila, Aeromonas sobria y Aeromonas caviae.

Palabras clave: DIARREA INFANTIL/etiología; AEROMONAS /aislamiento y purificación; AEROMONAS/patogenicidad; FENOTIPO.

INTRODUCCION

Los miembros del género Aeromonas, están siendo reconocidos como importantes patógenos intestinales y extraintestinales, tanto humanos como de una gran variedad de vertebrados e invertebrados.1

Las enfermedades causadas por Aeromonas spp. en el hombre pueden dividirse en 2 grandes grupos: a) infecciones localizadas (gastroenteritis y celulitis) y b) infecciones invasivas (bacteremia, meningitis, peritonitis, necrosis muscular).1

La gastroenteritis es la presentación más común de infección en niños y en adultos, la cual es usualmente autolimitada.1

Las diarreas provocadas por Aeromonas spp. son debidas frecuentemente a cepas toxigénicas las cuales pueden ser investigadas por diferentes pruebas in vitro (células adrenales Y-1, células Vero, inoculación intragástrica en ratones lactantes).2

Basados en ciertos parámetros bioquímicos como: descarboxilación de lisina, producción de acetil metil carbinol y actividad hemolítica, entre otros, se han implicado con la gastroenteritis ciertas cepas de Aeromonas spp. aisladas de pacientes con diarrea.3

De acuerdo con lo antes mencionado, nosotros investigamos la presencia de algunos marcadores fenotípicos asociados con la enteropatogenicidad en cepas de Aeromonas aisladas de niños menores de 5 años con enfermedad diarreica aguda, con el objetivo de contribuir a ampliar los conocimientos de estos microorganismos como posibles agentes entero patógenos en el área del Caribe.

MATERIAL Y METODO

Se estudiaron 27 cepas de bacilos gramnegativos anaerobios facultativos oxidasa positivos, aisladas de 300 niños menores de 5 años con enfermedad diarreica aguda.

Las cepas que presentaban codificación genética para la enzima citocromo oxidasa se les realizaron los estudios fisiológicos correspondientes para ubicarlas en el género Aeromo nas.4-6

Posteriormente se procedió a la determina ción de especies mediante la técnica del factor CAMP descrita por Figura.7

MARCADORES FENOTIPICOS

La producción de lisina descarboxilasa y de acetil metil carbinol (V-P) fueron investigadas por los métodos convencionales.5,6

La actividad hemolítica se determinó por siembra directa en placas que contenían Agar Triptona-Soya suplementada con sangre de carnero al 5 % e incubadas a 37 oC por 48 horas. Las colonias que demostraron una zona de hemólisis de 2 mm se consideraron positivas. Además, la actividad hemolítica se demostró con eritrocitos de conejo en placas de microtitulación, se consideraron positivos los títulos mayores de 1:16.8

La citotoxicidad en células Vero y la enterotoxigenicidad se llevó a cabo según Cumberbatch et al.8

RESULTADOS

De las 27 cepas estudiadas mediante la prueba del factor CAMP, 18 fueron identificadas como Aeromonas hydrophila, 7 como Aeromonas sobria y 2 como Aeromonas caviae (tabla 1).
TABLA 1. Especies identificadas en base a la prueba del factor CAMP
     
Factor CAMP
Especie 
No. de cepas
%
Aerobiosis
Anaerorabiosis
Aeromonas hydrophyla
18
66,7
+
+
Aeromonas sobria
7
25,9
+
-
Aeromonas caviae
2
7,4
-
-
Total
27
100,0
   
Fuente: Investigación realizada.

De los marcadores fenotípicos investigados se observaron valores significativos para la lisina descarboxilasa en A. caviae (100,0 %), la citotoxicidad en A. hydrophila (66,6 %) y la enterotoxigenicidad en A. sobria (100,0 %). Las reacciones de hemólisis y Voges Proskauer alcanzaron valores similares en A. hydrophila y A. sobria (tabla 2).

TABLA 2. Comportamiento de los marcadores fenotipicos en las cepas de Aeromonas SPP. aisladas
Marcadores
Aeromonas hydrophila n=18
Aeromonas sobria n=7
Aeromonas caviae n=2
fenotipicos
No.
%
No.
%
No.
%
Lisina descarboxilasa
8
44,4
5
71,4
2
100,0
Citotoxicidad
12
66,6
4
57,1
1
50,0
Enterotoxigenicidad
14
77,7
7
100,0
1
50,0
Hemolisis
15
83,3
6
85,7
1
50,0
Acetil metil carbinol
16
88,8
7
100,0
0
0,0
n = 27.
Fuente: Investigacion realizada.

En todas las cepas estudiadas se pudo comprobar que al menos 2 de los marcadores investigados estuvieron presentes.

La hemólisis de los eritrocitos de conejo con títulos mayores de 1:16 estuvo presente en 5 cepas de A. sobria y en 8 de A. hydrophila.

DISCUSION

En el presente estudio se pudo demostrar que los marcadores fenotípicos asociados con la enteropatogenicidad estuvieron presentes en la mayoría de las cepas estudiadas. Estos resulta dos ponen de manifiesto la relevancia que cada día adquieren estos microorganismos como causa importante de gastroenteritis.9

Estudios realizados por Janda (1964) y Kokka (1990) han demostrado la importancia de los marcadores de virulencia asociados con la enteropatogenicidad.10,11

Nuestros resultados coinciden con los de Janda et al., quienes, en 1983, estuvieron los marcadores fenotípicos de 12 cepas aisladas de niños con gastroenteritis y encontraron que el 75 % de los aislamientos poseía 2 o más de los 5 marcadores investigados.12 Nosotros comprobamos que el promedio de marcadores fenotípicos para A. hydrophila fue de 72,5 %.

La citotoxicidad y la producción de enterotoxinas son 2 factores que en numerosas investigaciones han estado asociados con las especies A. sobria y A. hydrophila.13

En 1985, Watson et al. realizaron estudios sobre algunos factores de virulencia. Los resultados de esa investigación evidenciaron que de 69 cepas aisladas de heces de niños y adultos con diarrea, 18 se identificaron como A. sobria, de éstas 16 resultaron ser invasivas.14

En nuestro trabajo se demostró que el 50 % de las cepas de A. caviae presentaba reacciones positivas para la citotoxicidad y la enterotoxigenicidad, esto coincide con los resultados recientes de Nandari et al., quienes estudiaron el efecto citotóxico y la producción de enterotoxinas en 22 cepas de A. caviae aisladas de heces, y demostraron citotoxicidad en 21 de ellas.5

Caselitz, en 1958, fue el primer investigador que describió la enteropatogenicidad en cepas de Aeromonas, al aislar estos microorganismos en Jamaica de niños con enteritis y demostrar la presencia de aglutininas en el suero de los pacientes.16 Estudios similares han sido llevados a cabo en diferentes regiones tropicales como India y Tailandia.16,17

Las investigaciones sobre los marcadores fenotípicos se continúan realizando en distintas áreas geográficas, recientemente se han llevado a cabo estudios en los cuales se ha demostrado la presencia de ciertas propiedades fenotípicas y estructurales, entre ellas la presencia del antígeno somático 0:11, asociado entre el 10 y el 30 % con cepas de Aeromonas hydrophila y sobria, aisladas de infecciones intestinales y extraintestinales.18

Consideramos que estudios sobre los marcadores fenotípicos asociados con la enteropatogenicidad, incidencia, características clínicas y epidemiológicas de estos microorganismos en el área del Caribe, pudieran contribuir al esfuerzo que se realiza al nivel internacional, por esclarecer el papel de estos agentes como potenciales patógenos entéricos.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

  1. Altwegg M. Aeromonas as a human pathogen. Crit Rev Microbiol 1989;16:253-86.
  2. Burke V, Robinson J, Atkinson HM, Gracey M.Biochemical of enterotoxigenic Aeromonas spp. J Clin Microbiol 1982;15:48-52.
  3. Burke V, Robinson J, Beaman J, Gracey M, Lesmana M,Rockhill R, et al. Correlation of enterotoxicity and biotype in Aeromonas species. J Clin Microbiol 1983;18:1196-200.
  4. Altwegg M, Steigerwalt AG, Altwegg-Bissig R. Biochemical identification of Aeromonas genospecies isolated from humans. J Clin Microbiol 1990;28:258-64.
  5. Colwell RR, Mac Donell MT, Ley J de. Propose to recognize the family Aeromonadaceae fam. nov. Int J Syst Bacteriol 1986;36:473-7.
  6. Cowan ST, Steel KJ. Manual for the identification of medical bacteria. 2 ed. Cambridge: University, 1974.
  7. Figura N, Guglielmetti P. Differentiation of motile and mesophilic Aeromonas strain into species by testing for a CAMP like Factor. J Clin Microbiol 1987;25:1341-2.
  8. Cumberbatch N, Gurwith MJ, Langston C, Sack RR, Brunton JL. Cytotoxic enterotoxin production of Aeromonas hydrophila: relationship of toxigenic isolation to diarrhoeal disease. Infect Immunol 1979;23:829-37.
  9. Holmberg SD, Schell WL, Fanning GR, Wachsmuth IK, Hickman-Brenner FW, Blake PA, et al. Aeromonas intestinal infections in the United States. Ann Intern Med 1986;105: 683-9.
  10. Janda JM. Aeromonas and Plesiomonas infections. En: Diagnostic procedures for bacterial infection. 7 ed. Washing ton DC: American Public Health Association, 1964:37,44.
  11. Kokka RP, Janda JM. Isolation and identification of autoagglutinating serogrup 0:11 Aeromonas strains in the clinical laboratory. J Clin Microbiol 1990;28:1297-9.
  12. Janda JM, Bottone EJ, Skinnes CV, Calcaterra D. Phenotypic markers associated with gastrointestinal Aeromonas hydrophila isolated from symptomatic children. J Clin Microbiol 1993;17:588-91.
  13. Houston CW, Chopra AK, Rose JM, Kurosky A. Review of Aeromonas enterotoxins. Experientia 1991;47:424-6.
  14. Watson JM. Invasiveness of Aeromonas spp. in relation to biotype, virulence factors and clinical features. J Clin Microbiol 1985;22:48-51.
  15. Namdari H, Bottone EJ. Cytotoxin and enterotoxin production as factors delineating enteropathogenicity of Aeromonas caviae. J Clin Microbiol 1990;28:1796-8.
  16. Caselitz FH. Zur Frage von Pseudomonas aeruginosa und verwandter Mikroorganismen als Enteritiserreger. Z Tropenmed Parasitol 1958;9:269-70.
  17. Helm EB, Stille W. Akute enteritis durch Aeromonas hydrophila. Dtsch Med Wochenschr 1970;95:18.
  18. Kokka RP, Vedror NA, Janda JM. Characterization of classic and atypical serogroup 0:11 Aeromonas: evidence that the surface array in protein is not directly involved in mouse pathogenicity. Microb Pathog 1991;10:71-9.
Recibido: 27 de agosto de 1994. Aprobado: 9 de febrero de 1995.

Lic. Laura Bravo Fariñas. Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí". Apartado 601, Marianao 13, Ciudad de La Habana, Cuba.

1Licenciada en Ciencias Biológicas. Investigadora Agregada. Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí". (IPK).
2Licenciada en Ciencias Biológicas. Universidad de La Habana.
3Epecialista de II Grado en Microbiología. Investigador Auxiliar. IPK.
4Licenciada en Microbiología. Investigadora Agregada. IPK.
5Especialista de I Grado en Microbiología. IPK.
6Técnica en procesos Biológicos. IPK.

Creative Commons License Todo el contenido de esta revista, excepto dónde está identificado, está bajo una Licencia Creative Commons