Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí"

Utilización del medio de cultivo UIT-A en la obtención de biomasa para la identificación bioquímica micobacteriana

Lic. LILIAN M. MEDEROS CUERVO,<1> Dra. CARIDAD FERRA SALAZAR<2> y Dr. JOSE A. VALDIVIA<3>

RESUMEN

Se compara el medio de cultivo sólido UIT-A con el Lowenstein Jensen, para la obtención de biomasa en el montaje del test bioquímico de identificación de micobacterias "no tuberculosas" (MNT), con el objetivo de valorar la posibilidad de utilización como medio de cultivo para el montaje y análisis de dichas pruebas bioquímicas. Los resultados obtenidos en los 2 medios de cultivo utilizados fueron iguales, por lo que se recomienda el uso del medio de cultivo UIT-A fundamentalmente para aquellas cepas con crecimiento pobre o escaso.

Palabras clave: MEDIOS DE CULTIVO/métodos.

INTRODUCCION

Mediante la nutrición los organismos extraen del ambiente todas las sustancias que requieren para satisfacer sus demandas de materia prima para la biosíntesis y generación de energía, estas sustancias son denominadas nutrientes.1,2

Este tema ha sido desarrollado por muchos autores por su vital importancia para lograr un buen crecimiento microbiano. Diversos investi gadores han determinado que al variar las condiciones de nutrición podrían producirse variaciones en el desarrollo bacteriano y en sus respuestas a determinadas pruebas bioquími- cas.3-6

En 1982, nuestro laboratorio formuló un medio de cultivo sólido denominado UIT-A, para el crecimiento de cantidades significativas de biomasa micobacteriana.7,8

Para la clasificación e identificación de micobacterias "no tuberculosas" (MNT) es necesario realizar diferentes pruebas bioquími cas a partir del cultivo y crecimiento en medio de Lowenstein Jense modificado (UIT) de las cepas objeto de estudio.9,10

El presente estudio tiene como objtivo comprobar si al utilizar el medio de cultivo UIT-A para obtener biomasa en el montaje de estas pruebas no se producen variaciones con los resultados obtenidos con el medio UIT.

MATERIAL Y METODO

Se analizaron 7 cepas de referencias pertenecientes a la colección de Laboratorio Nacional de Referencia de Micobacterias y Tuberculosis del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" (IPK): Mycobacterium flavescens, Mycobactyerium xenopi, Mycobacterium scrofula ceum, Mycobacterium fortuitum y Mycobacterium avium-intracellulare.

Las cepas fueron cultivadas simultáneamente en los 2 medios de cultivo seleccionados: Lowenstein Jensen modificado (UIT) y UIT- A.7-10

A partir de la obtención dela biomasa procedente de los medios de cultivo anterior mente mencionados, se elaboraron los patrones de 1 mg/mL, para montaje de las pruebas bioquímicas de identificación según la técnica descrita.9,10 Las pruebas bioquímicas utilizadas fueron: ureasa, hidrólisis del Tween, toleran cia al NaCl 5 %, catalasa semicuan- titativa > 45 mm, arylsulfatasa 3 y 14 días y reducción del telurito de potasio.

RESULTADOS Y DISCUSION

Al observar los resultados obtenidos en los medios de cultivos seleccionados, vemos que la cantidad de biomasa obtenida en el medio UIT-A es mayor. La respuesta bioquímica fue la misma en los 3 medios de cultivo seleccionados para este estudio, loque comprueba la posibili dad de utilización para estos fines del medio de cultivo sólido UIT-A (tablas 1 y 2).

Se evaluó positivamente la eficacia del medio UIT-A mediante los resultados obtenidos con el medio UIT, y quedó demostrado que las características de las propiedades nutricionales del medio UIT-A cumple con las exigencias nutricionales, lo cual se pone de manifiesto con la cantidad de biomasa micobacteriana obtenida en este medio. Los resultados con respecto a la producción de masa obtenida superior al medio UIT ya se han discutido en otros estudios realizados.7,8 Por lo cual recomendamos la utilización del medio UIT-A como medio de cultivo para la identificación bioquímica de las MNT.

TABLA 1. Resultados de las pruebas bioquimicas realizadas a las cepas cultivadas en medio UIT

Medio de cultivo	Hidrolisis Ureasa	Tolerancia del Tween	Catalasa al NaCl 5 %	Arylsulfatasa semicuantitativa	Arylsulfatasa	Telurito	Especie
M. flavescens	UIT	+	+	+	+	-	+	-
M. xenopi	UIT	-	-	-	-	+	+	-
M. seroflaceum	UIT	+	-	-	+	-	+	-
M. szulgae	UIT	-	+/-	-	+	+	+	-
M. gordonae	UIT	-	+	-	+	+	+	-
M. fortuitum	UIT	+	+	+	+	+	+	+
M. avium intracellulare	UIT	-	-	-	-	-	D	D

D: Dudoso. M.: Mycobacterium.

TABLA 2. Resultados de las pruebas bioquimicas realizadas a las cepas cultivadas en medio UIT-A

Medio de cultivo	Hidrolisis Ureasa	Tolerancia del Tween	Catalasa al NaCl 5 %	Arylsulfatasa semicuantitativa	Arylsulfatasa	Telurito	Especie
M. flavescens	UIT-A	+	+	+	+	-	+	-
M. xenopi	UIT-A	-	-	-	-	+	+	-
M. seroflaceum	UIT-A	+	-	-	+	-	+	-
M. szulgae	UIT-A	-	+/-	-	+	+	+	-
M. gordonae	UIT-A	-	+	-	+	+	+	-
M. fortuitum	UIT-A	+	+	+	+	+	+	+
M. avium intracellulare	UIT-A	-	-	-	-	D	D	+

D: Dudoso.
M.: Mycobacterium.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Pazos VC, Rojas NM, Jorge DE. Temas de Bacteriología. La Habana: Pueblo y Educación, 1985.
2. Martínez J, Sánchez AI, Quintana M, Pazos V. Microbiología General. La Habana: Pueblo y Educación, 1985.
3. Tsukamura M. Identification of mycobacteria. Mycobacteriosis Research Laboratory of the National Chubu Hospital, Obu, Aichi 474, 1984.
4. Larsson L, Valero-Guillen P, Luengo Martín H, Pacheco F. Influence of culture medium and incubation time on the fatty acids composition of some rapid-growing mycobacteria as analysed by packed and capillary column gas chromatography. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand 1985;93 Sect B:354-7.
5. Ratledge C. Nutrition, growth and metabolism. En: Ratledge C, Stanford J, eds. Biology of the Mycobacteria. London: Academic, 1992;vol 1:186-212.
6. Wheeler PR, Ratledge C. Metabolism in Mycobacterium leprae, Mycobacterium tuberculosis and other pathogenic mycobacteria. Br Med Bull 1988;44(3):547-61.
7. Mederos LM, Jiménez CA, Valdivia JA. Ensayo del medio UIT modificado UIT-A en estudios cromatográficos. Rev Cubana Med Trop 1982;34:70-4.
8. . Estudio comparativo de diferentes medios de cultivo incluyendo la modificación UIT-A. Rev Cubana Med Trop 1986;38:25-8.
9. Kantor I. Bacteriología de la tuberculosis humana y animal. Buenos Aires: Centro Panamericano de Zoonosis, 1979.
10. Casal M. Microbiología clínica de las enfermedades por micobacterias (tuberculosis, lepra y micobacteriosis). Córdova: Universidad de Córdova, 1990.

Recibido: 18 de agosto de 1994. Aprobado: 30 de diciembre de 1994.

Lic. Lilian M. Mederos Cuervo. Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí". Apartado 601, Marianao 13, Ciudad de La Habana, Cuba.

<1>Licenciada en Microbiología. Investigadora Auxiliar.

<2>Especialista de II Grado en Microbiología.

<3>Epecialista de II Grado en Microbiología. Jefe del Laboratorio Nacional de Referencia de Micobacterias y Tuberculosis.