Centro de Investigaciones Científicas de la Defensa Civil

Detección de anticuerpos al VIH en mezclas de sueros

Lic. GRICEL LÓPEZ, Dr. CARLOS SILVA y Lic. JESÚS BENÍTEZ

RESUMEN

Se estudió el empleo de mezclas de sueros para la detección de anticuerpos al VIH en una población de baja prevalencia (0,006 %), utilizando los sistemas diagnósticos de producción nacional: UMELISA HIV Recombinant y RECVIH 1+2. Los sistemas fueron evaluados con muestras individuales y mezclas de 5 y 10 sueros de donantes de sangre sanos y de personas positivas e indeterminadas al VIH-1 y/o VIH-2. Se observó que la utilización de mezclas de 10 sueros no es factible; sin embargo, el empleo de las mezclas de 5 no afecta la especificidad ni la sensibilidad de los sistemas estudiados.

Descriptores DeCS: ANTICUERPOS HIV/sangre; SERODIAGNOSTICO DEL SIDA/métodos.

INTRODUCCIÓN

El costo de las pruebas de detección de anticuerpos del VIH es elevado para muchos países. Una propuesta que se ha encontrado para reducirlos es la utilización de mezclas de sueros. En los últimos años se han reportado estudios donde se utilizan mezclas desde 3 hasta 25 sueros.^1-10

Con esta propuesta, los sueros de personas diferentes son mezclados y sólo necesitan ser analizadas individualmente las mezclas reactivas, es necesario no afectar la sensibilidad, ni la especificidad de la prueba empleada y que sólo se requieran cambios mínimos en los procedimientos del ensayo recomendado por el fabricante. Esta técnica es sobre todo de bajo costo en las pruebas en gran escala, como estudios de vigilancia epidemiológica y de donantes de sangre, especialmente en áreas de baja prevalencia, menor que el 2 %.¹¹

Debido a que los sistemas de diagnóstico de producción nacional, para la detección de anticuerpos del VIH, UMELISA HIV Recombinant (CIE) y RECVIH 1+2 (CIGB), se exportan y pueden ser utilizados en países con limitaciones financieras, en el presente trabajo se estudió la utilización de mezclas de sueros con el empleo de dichos sistemas en una población de baja prevalencia (0,006 %).

MÉTODOS

Muestras. Se estudiaron muestras frescas de donantes del Banco de Sangre de Marianao, no reactivas al VIH y muestras positivas e indeterminadas al VIH-1 y/o VIH-2, pertenecientes al Banco de Referencia del Laboratorio de Investigaciones del SIDA (LISIDA), confirmadas por inmunoelectrotransferencia (DAVIH BLOT).

UMELISA RECVIH
- Muestras de donantes	1 010	1 080
- Muestras del Banco de referencia del LISIDA:	225	224
• Positivas VIH-1	209	205
• Positivas VIH-2	-	3
• Indeterminadas VIH-1	16	16

 

Ensayo. Se utilizaron los sistemas diagnósticos de producción nacional, de tipo indirecto: UMELISA HIV Recombinant con tecnología SUMA (Silva C, Solis R. UMELISA con antígenos recombinantes para el pesquisaje de anticuerpos anti-VIH. III Reunión Iberolatinoamericana de Hematología, La Habana, 1989), que utiliza antígenos recombinantes del VIH-1 (p24, gp41 y gp120), y conjugado de fosfatasa alcalina y RECVIH 1+2, basado en el uso de antígenos recombinantes del VIH-1 (p24, gp41 y gp120) y VIH-2 (gp36)¹² que emplea como sistema de revelado, conjugado de proteína A-peroxidasa.

Método. Todas las muestras fueron estudiadas individualmente y en mezclas de 5 y de 10 sueros.

Las muestras de donantes fueron enumeradas consecutivamente a partir de 1. Las mezclas de 5 se realizaron con 100 mL de 5 sueros; por ejemplo, la mezcla de 1 está integrada por los sueros del 1 al 5, la 2 por los sueros del 6 al 10 y así sucesivamente. Con posterioridad, las mezclas de 5 se agruparon de 2 en 2 (200 mL cada una), la 1 y 2, la 3 y 4, etcétera, para formar las mezclas de 10.

Las muestras del Banco de Referencia (positivas e indeterminadas al VIH-1 y/o VIH-2) fueron codificadas consecutivamente. Para obtener las mezclas de 5, se unieron 50 mL de cada muestra con 200 mL de una combinación de 4 sueros de donantes sanos (10 mL de cada uno); para las mezclas de 10, se unieron 100 mL de cada mezcla de 5 con 100 mL de una combinación de 5 sueros de donantes sanos (5 mL de cada uno).

Para mantener la dilución final de cada muestra 1:20, como se indica en las instrucciones de los fabricantes, se analizaron 5 mL de muestra con 95 mL de diluente en el caso de las muestras individuales, 25 mL de cada mezcla de 5 con 75 mL de diluente y 50 mL de las mezclas de 10 con 50 mL de diluente.

A las muestras individuales que resultaron repetidamente reactivas se les realizó otro ELISA, Vironostika (Organon Teknica) y se confirmaron por inmunoelectrotransferencia, DAVIH BLOT (DAVIH Laboratorios).

Los datos obtenidos por el RECVIH 1+2 en diferentes corridas fueron homogeneizados; en lugar de emplear el valor de absorbancia se empleó la relación (R), definida como el cociente del valor de absorbancia (Abs) obtenido para cada muestra y el valor límite (VL) calculado para la correspondiente corrida (R = Abs/VL), de este modo los valores de R &sup3; 1 corresponden a resultados de muestras reactivas y los R < 1 a resultados de muestras no reactivas.

Para el UMELISA HIV Recombinant las muestras se consideran reactivas cuando la fluorescencia es mayor o igual que 0,3 y se consideran en el umbral de reactividad cuando se encuentran en una zona comprendida entre el nivel de corte y el 15 % por debajo de éste (zona gris).

RESULTADOS

De los 1 010 sueros de donantes estudiados mediante el UMELISA HIV Recombinant no se obtuvieron valores reactivos, ni para las muestras de sueros procesadas individualmente, ni para las muestras mezcladas en grupos de 5. La media de la población fue mayor para las muestras procesadas individualmente (0,055), pero la especificidad del sistema no se afectó (figura 1).

FIGURA 1. Frecuencias de las muestras de donantes de sangre empleando el sistema UMELISA HIV Recombinant.
Cuando las muestras fueron mezcladas en grupos de 10 los resultados no fueron satisfactorios, ya que los valores estuvieron más próximos al nivel de corte (la media fue de 0,183) y en algunos casos se obtuvieron lecturas reactivas en mezclas de muestras que al elaborarse individualmente fueron no reactivas.

Las 225 muestras positivas e indeterminadas pertenecientes al Banco de Referencia se clasificaron como reactivas, tanto las estudiadas individualmente como en mezclas (figura 2), alcanzaron una sensibilidad del 100 %; en este caso la media de la población se desvió de 1,323 (muestras individuales) a 1,243 (mezclas de 5) y 1,163 (mezclas de 10).

FIGURA 2. Frecuencias de las muestras del panel de referencia empleando el sistema UMELISA HIV Recombinant.

De los 1 080 sueros de donantes de sangre estudiados individualmente sólo 1 fue repetidamente positivo por RECVIH 1+2 y fue no reactivo por Vironostika y negativo por DAVIH BLOT. Al realizar las mezclas de 5 y 10 no se afectó la especificidad (figura 3), aunque se observa un discreto desplazamiento de los valores de R, la media de la población se desvió de 0,423 (muestras individuales) a 0,556 (mezclas de 5) y 0,694 (mezclas de 10).

FIGURA 3. Frecuencias de las muestras de donantes de sangre empleando el sistema RECVIH 1+2.

Las muestras de personas positivas e indeterminadas pertenecientes al Banco de Referencia fueron correctamente clasificadas por el RECVIH 1+2 al ser estudiadas individualmente y en mezclas de 5 y 10, y se observó que al aumentar la dilución (mezclas de 5 y 10) ocurre un ligero desplazamiento de los valores de R hacia 1 (figura 4), sin obtenerse resultados falsos negativos, la media de la población se desvió de 5,73 a 4,60 y 4,166. Se alcanzó una sensibilidad del 100 %.

FIGURA 4. Frecuencias de las muestras del panel de referencia empleando el sistema RECVIH 1+2.

DISCUSIÓN

En países en desarrollo donde los recursos son limitados, el financiamiento es el principal problema para llevar a cabo un programa de detección de la infección por VIH, pues los costos de estos programas son elevados, por lo cual se han utilizado las mezclas de sueros,^2,3,6,9 de esta forma se facilita el estudio de la sangre previa transfusión, así como los estudios de vigilancia epidemiológica.

En nuestro estudio, para ambos sistemas diagnósticos de producción nacional (UMELISA HIV Recombinant y RECVIH 1+2) se encontró que la mezcla de 5 sueros es un método efectivo para la detección de anticuerpos al VIH, sin afectarse la especificidad, ni la sensibilidad de éstos, lo cual coincide con lo reportado en la literatura.^4,7,8 La única modificación que se realizó en relación con la técnica original consistió en la preparación de las mezclas de 5 sueros y su dilución posterior 1:4, lo que permitió procesar un número mayor de muestras con los mismos recursos y sin afectar la calidad de los resultados. En caso de obtener resultados positivos en algunas de las muestras que integran las mezclas, debe evaluarse individualmente cada una de las 5 muestras que forman parte de dichas mezclas; no obstante, el gasto de reactivos es mucho menor que con el procedimiento habitual, como fue señalado anteriormente por otros autores.^1,5

El empleo de mezclas de sueros requiere de laboratorios de ensayo que posean un adecuado aseguramiento de la calidad. Este método no es práctico si se necesita el resultado de la prueba inmediatamente, o si el número de muestras que se va a investigar es pequeño; además, no es económico en poblaciones de alta prevalencia de VIH. Si una mezcla tiene resultado reactivo, entonces requiere que se estudien por separado los componentes de ésta, por lo que el resultado de la muestra individual se retarda y se encarece. Sin embargo, para estudios masivos en poblaciones de baja prevalencia de VIH, la utilización de las mezclas de sueros resulta económica.

Por todo lo anterior se puede concluir que los sistemas diagnósticos UMELISA HIV Recombinant y RECVIH 1+2 se observó, en estudios realizados en una población de baja prevalencia, que el uso de las mezclas de 5 sueros es efectivo para la detección del VIH, sin afectar la sensibilidad, ni la especificidad de éstos.

SUMMARY

The use of sera mixtures for the detection of HIV antibodies was studied in a population of low prevalence (0,006 %), using the diagnosis systems of national production: Recombinant HIV UMELISA and RECHIV 1 + 2. The systems were evaluated with individual samples aned mixtures of 5 and 10 sera from sound blood donors and from HIV-1 and/or HIV-2 positive and undetermined persons. It was observed that the utilization of mixtures of 10 sera is not feasible; however, the use of mixtures of 5 affects neither the specificity nor the sensitivity of the systems studied.

Subject headings: HIV ANTIBODIES/blood; AIDS SERODIAGNOSIS/methods.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Behets F, Bertizzi S, Kasali M, Kashamuka M, Atikala L, Brown C, et al. Successful use of pooled sera to determine HIV-1 seroprevalence in Zaire with development of cost-efficiency models. AIDS 1990;4:737-41.
2. Cahoon-Young B, Chandler A, Livermore T, Gaudino J, Benjamin R. Sensitivity and specificity of pooled versus individual sera in human immunodeficiency virus antibody prevalence study. J Clin Microbiol 1989;27(8):1893-5.
3. Constantine NT, Callahan JD, Watts DN. Técnicas de laboratorios. En: Mitchell S, Gringle R, eds. Pruebas para la detección del VIH y control de la calidad. Guía para el personal de laboratorio. Carolina del Norte: Family Health International, 1991:148-9.
4. Emmanuel JC, Bassett MT, Smith HJ, Jacobs JA. Pooling of sera for human immunodeficiency virus (HIV) testing an economical methods for use in developing countries. J Clin Pathol 1988;4(5):582-5.
5. Frösner G, Dobler G, Falkner Von Sonnernburg FJ. Cost reduction of unlinked testing for anti-HIV investigation of pooled sera. AIDS 1990;4:73-5.
6. Kline RL, Brothers TA, Brookmeyer R, Zeger S, Quinn TC. Evaluation of human immunodeficiency virus seroprevalencia in population surveys using pooled sera. J Clin Microbiol 1989;27(7):149-52.
7. Monzon OT, Paladin FJE, Dimaandal E, Balis AM, Samson C, Mitchell S. Relevance of antibody content and test format in HIV testing of pooled sera. AIDS 1992;6:43-8.
8. Patrascu IV. Evaluation of efficacy of pooled sera in a human immunodeficiency virus antibody prevalence in population surveys. Rev Roum Virol 1990;41(1):45-51.
9. Quinn T, Kline R, Brothers T, Zerger S, Viscidi R, Brookmeyer R. Efficient evaluation of human immunodeficiency virus (HIV) seroprevalence in population surveys using pooled sera. IV International Conference on AIDS. Stockholm, Sweden, June 12-16, Stockholm: International Fairs, 1988;t.2:264.
10. Seymour E. Use of both pooled saliva and pooled serum sample for the determination of HIV-1/HIV-2 antibodies by both conventional and Rapid EIA Techniques. VIII International Conference on AIDS/III STD World Congress. Amsterdam, July 19-24; Amsterdam: CONGRESS Holland BV, 1992;t.3:194.
11. OMS. Recomendaciones para el testaje de anticuerpos del VIH en mezclas de sueros. IV Reunión de Directores de Laboratorios de Referencia sobre el SIDA en las Américas. Documento 2. 1991 oct. 22-25; San José de Costa Rica.
12. Benítez J, Leal V, Novoa L. Estudio de la especificidad del sistema RECVIH para la detección de anticuerpos contra el VIH-1 y VIH-2. Biotecnología Aplicada 1992:9(1):66-9.

Recibido: 13 de octubre de 1994. Aprobado: 23 de octubre de 1995.

Lic. Gricel López. Centro de Investigaciones Científicas de la Defensa Civil. Carretera de Tapaste y Ocho Vías, San José de Las Lajas, provincia de La Habana, Cuba.