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Revista Cubana de Medicina Tropical
versión On-line ISSN 1561-3054
Rev Cubana Med Trop v.54 n.2 Ciudad de la Habana Mayo-ago. 2002
Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí
Hospital Pediátrico Pedro Borrás
Susceptibilidad antimicrobiana y serotipaje de Pseudomonas aeruginosa aisladas de pacientes VIH/SIDA
Lic. Daniel Salasar Rodríguez,1 Lic. Aileen González Rizo,2 Dra. Sara Palma Monroy3 y Téc. Teresa Reyes4
Resumen
Se analizaron 68 cepas aisladas de pacientes seropositivos atendidos en el hospital del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí, durante el período comprendido desde octubre de 1996 hasta septiembre de 1997. Se les realizaron pruebas de susceptibilidad antimicrobiana por el método de Kirby-Bauer y estudio antigénico mediante aglutinación en placa del antígeno somático. Los serogrupos con mayor frecuencia de aislamiento fueron O1 (27,9 %), O11 (10 %), O6 (8,8 %) y O5 (7,3 %); 21 cepas de 68 aislamientos (30,9 %) no pudieron ser agrupadas por serotipaje. Todas las cepas resultaron sensibles a gentamicina y azlocilina, la mayoría de los aislamientos fueron susceptibles a ceftazidime (n=66), ciprofloxacina (n=62). Por otra parte 25 de los 68 aislamientos (35,7 %) mostraron resistencia a cefotaxima. No se pudo demostrar una relación directa entre la resistencia a los antibióticos y los resultados serológicos. De acuerdo con estos resultados, la gentamicina tiene una elevada efectividad contra las cepas analizadas, en los años recientes deberá llevarse a cabo un uso más racional de betalactámicos y quinolonas para evitar el surgimiento de cepas multirresistentes en Cuba.
DeCS: PSEUDOMONAS AERUGINOSA/aislamiento & purificación; VIH; SINDROME DE INMUNODEFICIENCIA ADQUIRIDA; INFECCIONES OPORTUNISTAS RELACIONADAS CON SIDA; RESISTENCIA MICROBIANA A LAS DROGAS; TESTS DE SENSIBILIDAD MICROBIANA; SEROTIPIFICACION.
En las últimas décadas, Pseudomonas aeruginosa se ha erigido como una de las bacterias gramnegativas más problemáticas en el ambiente hospitalario,1,2 que afecta a pacientes en estado crítico, y causa infecciones serias y fatales que van desde una enfermedad sistémica aguda en quemados y pacientes neutropénicos, hasta infecciones crónicas del tracto respiratorio en pacientes con fibrosis quística del páncreas (FQ).3 Pseudomonas aeruginosa es la responsable de 50 % de las neumonías, 25-50 % de las bacteriemias fatales y se presenta con una alta tasa de morbilidad y mortalidad (más de 75 %) en las infecciones nosocomiales.4 Esta bacteria es considerada un patógeno oportunista por excelencia, aunque hace poco se han descrito formas más agresivas que son capaces de infectar individuos virtualmente sanos. Ejemplo de esto lo son las afecciones de la córnea, en especial en personas que usan lentes de contacto.5
En los últimos años la infección por esta bacteria ha sido reportada en los pacientes infectados con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH),6 ocupando el tercer lugar después de Staphylococcus aureus y Streptococcus pneumoniae.7,8
Esta bacteria es usualmente resistente a una amplia variedad de agentes antibacterianos que van desde antibióticos betalactámicos, aminoglucósidos y más recientemente, las nuevas quinolonas ipenemen y cilostina.9,10
En el presente trabajo se estudió el comportamiento de cepas de Pseudomonas aeruginosa frente a 5 antibióticos antipseudomonas, su clasificación serológica según el sistema internacional de tipificación serológica11 y su relación con el comportamiento frente a estos antimicrobianos.
Métodos
Cepas
Cepas controles
Escherichia coli ATCC 25922. Staphylococcus aureus ATCC 25923. Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, donadas por el Instituto Nacional de Higiene, Epidemiología y Microbiología y (INHEM), Cuba.
Se trabajaron 68 cepas de bacilos gramnegativos aislados de pacientes VIH/SIDA que fueron atendidos en el Hospital del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí, durante el período octubre 1996 a septiembre 1997.
Medios y condiciones de cultivos
Las cepas fueron inoculadas en caldo cerebro corazón (BHI) y se incubaron a 35 °C durante 18 h en condiciones de aerobiosis. A partir del medio BHI se realizaron pases a placas con agar Mac Conkey y se incubaron 24 h a 35 °C. El estudio bioquímico se realizó según el esquema de King-Weaver.12 Todos los reactivos utilizados correspondieron a la casa comercial Oxoid (Inglaterra).
Prueba de susceptibilidad antimicrobiana
Discos antibióticos utilizados: cefotaxima (5 µg), ceftazidima (30 µg), gentamicina (10 µg), ciprofloxacina (5 µg) suministrados por el Centro de productos biológicos, Carlos J. Finlay, Cuba. El patrón de susceptibilidad de las 68 cepas de Pseudomonas aeruginosa se determinó con la metodología de Kirby-Bauer modificado.13
Estudio antigénico
La determinación del antígeno somático se realizó por el método de aglutinación en placa, con 4 sueros polivalentes y 16 antisueros monovalentes policlonales de Pseudomonas aeruginosa (CEBI, Cuba), de acuerdo con el Sistema Internacional de Tipificación Antigénica (IATS).11,14
Resultados
En la tabla 1 se evidencia la procedencia de las 68 cepas estudiadas, que se confirmaron por su biofenotipo como Pseudomonas aeruginosa según el esquema de clasificación de King-Weaver.12 Los resultados del estudio de susceptibilidad in vitro de las cepas de Pseudomonas aeruginosa frente a 5 antimicrobianos evidencian que los antibióticos más efectivos fueron gentamicina y azlocilina con 100 % de las cepas sensibles, y el antimicrobiano frente al cual estas cepas desarrollaron más resistencia fue cefotaxima (con 8,8 % de cepas sensibles) (tabla 2).
Tabla 1. Procedencia de las cepas de Pseudomonas aeruginosa aisladas de pacientes VIH/SIDA
Procedencia | Cantidad de cepas |
Esputos | 50 |
Exudado faríngeo | 9 |
Secreciones bronquiales | 2 |
Exudado ótico | 6 |
Coprocultivo | 1 |
Total de cepas | 68 |
Tabla 2. Resultados de la prueba de susceptibilidad in vitro de las cepas de Pseudomonas aeruginosa
Discos de antibiótico utilizados | Sensibles | Intermedias | Resistentes | ||||
N | % | N | % | N | % | ||
Aminoglucósidos | Gentamicina | 68 | 100 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Beta lactámicos | Azlocilina | 68 | 100 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Ceftazidima | 66 | 97,0 | 1 | 1,4 | 1 | 1,4 | |
Cefotaxima | 6 | 8,8 | 37 | 54,4 | 25 | 35,7 | |
Quinolonas | Ciprofloxacina | 62 | 91,8 | 5 | 7,3 | 1 | 1,4 |
Desde el punto de vista serológico se pudieron agrupar 47 cepas y 21 no se pudieron agrupar (10 cepas poliaglutinables, 9 cepas no agrupables, 2 cepas autoaglutinables) (fig). Se confirmaron 9 patrones serológicos y resultaron más frecuentes los serogrupos O1 seguido por el O11 y O6 (tabla 3). Se observó una similitud en el comportamiento de estos aislamientos frente a los antimicrobianos ensayados, exceptuando la cepa perteneciente al serogrupo 012, que mostró resistencia a ciprofloxacina, cefotaxima y ceftazidima.
Fig. Agrupabilidad de las 68 cepas de Pseudomonas aeruginosa aisladas de pacientes VIH+.
Tabla 3. Distribución serológica de las cepas agrupables de Pseudomonas aeruginosa
Serogrupos | O1 | O2 | O4 | O5 | O6 | O8 | O11 | O12 |
Cantidad de cepas1 | 9 | 2 | 3 | 5 | 6 | 1 | 7 | 1 |
Porcentaje | 27,9 | 2,9 | 4,4 | 7,3 | 8,8 | 1,4 | 10,2 | 1,4 |
Discusión
Pseudomonas aeruginosa ha sido aislada con frecuencia en diferentes muestras de origen respiratorio obtenidas de pacientes infectados con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH).6,9,10 En este estudio también se encontraron con mayor frecuencia los aislamientos procedentes de esputos bacteriológicos.
En el estudio serológico se encontró 30,9 % de cepas no agrupables, se pudo alcanzar solo 69,1 % de indentificación, pero coincide con lo reportado por otros autores en cuanto al predominio de los serogrupos O1,O11,O6.15-21
Dentro de los 6 antibióticos utilizados, la azlocilina y la gentamicina fueron las drogas de mayor sensibilidad y la cefotaxima la que mostró mayor nivel de resistencia ante las cepas de Pseudomonas aeruginosa. Los aminoglucósidos, con excepción de la estreptomicina, siguen siendo drogas con elevada actividad antipseudomonas, aunque se han reportado altos niveles de resistencia por transconjugación, con excepción de gentamicina,22 el antibiótico utilizado en el estudio perteneciente a este grupo mostró una alta efectividad antipseudomonas en las cepas estudiadas. En Europa se ha encontrado asociación de la resistencia a gentamicina con el serogrupo O12,15 en las cepas analizadas este serogrupo mostró sensibilidad a este antibiótico pero fue resistente a ciprofloxacina, cefotaxima y ceftazidima.
Dentro del grupo de los antibióticos betalactámicos, la azlocilina mostró mucho más efectividad que la ceftazidima, pues 100 % de las cepas fueron sensibles a azlocilina, aunque en otros trabajos se ha reportado el hallazgo de cepas de Pseudomonas aeruginosa (0,3%) con resistencia asociada con la presencia de enzimas PSE 1 o PSE 423 con concentración mínima inhibitoria >16 µg/mL.24 Kolar y Pfaller encontraron cepas de Pseudomonas aeruginosa con altos niveles de resistencia a cefotaxima,25,26 al igual que lo encontrado en este estudio. Aunque en este trabajo solo se encontró una cepa resistente a ciprofloxacina y 5 cepas de las estudiadas con valores intermedios de susceptibilidad, los autores consideran que este fenómeno constituye una señal de alerta; por tal motivo se hace necesario vigilar el surgimiento y la propagación de cepas resistentes a las nuevas quinolonas (ciprofloxacina, ofloxacina, norfloxacina), por los reportes de altos niveles de resistencia a las fluorquinolonas.27-31
Summary
Sixty-eight strains from seropositive patients seen at Pedro Kourí Tropical Medicine Hospital from October 1996 to September 1997 were analyzed in this study. Antimicrobial susceptibility tests by the Kirby-Bauer method and antigenic study through slide agglutination of the somatic antigen were performed in such strains. The most frequent isolated serogroups were 01(27.9%), 011(10%), 06(8.8%) and 05(7.3%); twenty-one strains of 68 isolates (30.9%) could not be serotyped. All the strains were susceptible to gentamycin and azlocylin; most of isolates were susceptible to ceftazidime (n=66), and ciprofloxacin (n=62). On the other hand, 25 of the 68 isolates (35.7%) showed resistance to cefotaxime. No direct relation between antibiotic resistance and serologic results could be proved. According to these results, gentamycin is highly effective for treating analyzed strains. In the forthcoming years, beta-lactams and quinolones should be more rationally used so as to prevent the emergence of multi-resistant strains in Cuba.
Subject headings: PSEUDOMONAS AERUGINOSA/isolation & purification; HIV; ACQUIRED IMMUNODEFICIENCY SYNDROME; AIDS-RELATED OPPORTUNISTIC INFECTIONS; DRUG RESISTANCE, MICROBIAL; MICROBIAL SENSITIVITY TESTS; SEROTYPING.
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Recibido: 15 de noviembre de 2000. Aprobado: 11 de abril de 2001.
Lic. Daniel Salasar. Hospital Pediátrico "Pedro Borrás. F y 27, El Vedado, Ciudad de La Habana, Cuba.
1 Licenciado en Biología. Hospital Pediátrico Pedro Borrás.
2 Licenciada en Microbiología. Instituto de Medicina Tropical Pedro Kouri (IPK).
3 Especialista de I Grado en Microbiología. IPK.
4 Técnica en Microbiología. IPK.