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Revista Cubana de Hematología, Inmunología y Hemoterapia

versión On-line ISSN 1561-2996

Rev Cubana Hematol Inmunol Hemoter v.22 n.3 Ciudad de la Habana sep.-dic. 2006

 

Artículos originales

Instituto de Hematología e Inmunología

Estudio de las subpoblaciones linfocitarias T en pacientes pediátricos con anomalías tronco-conales cardiovasculares

Lic. Bertha Beatriz Socarrás Ferrer,1 Lic. Lázaro O. del Valle Pérez,1 Dra. Vianed Marsán Suárez,1 Dra. Miriam Sánchez Segura,1 Lic. Julio C. Merlín Linares,1 Dr. Glicerio Ceballos Fuentes2 y Dra. Consuelo Macías Abraham1

Resumen

Se estudiaron en 20 pacientes pediátricos con anomalías tronco-conales cardiovasculares las subpoblaciones de linfocitos T mediante el método de la fosfatasa alcalina antifosfatasa alcalina con los anticuerpos monoclonales específicos anti-CD3, anti-CD4 y anti-CD8. Se tomó como grupo control a 25 individuos supuestamente sanos. Se obtuvieron diferencias significativas para las subpoblaciones T CD3 y CD4 positivas (p < 0,05). El déficit inmunológico celular encontrado en estos pacientes indica la necesidad de incluir en el tratamiento de los mismos a inmunomoduladores para prevenir las complicaciones sépticas.

Palabras clave: subpoblaciones linfocitarias T, anomalías tronco-conales cardiovasculares, inmunidad celular.

El estudio y tratamiento de las cardiopatías congénitas muestra un progreso acelerado en los últimos 50 años. El ecocardiograma permite observar gran cantidad de características de estas anomalías y el cateterismo tiene un carácter primordialmente terapéutico, por lo que la cirugía cardíaca es cada vez más temprana y con intenciones correctivas. En la actualidad hay una mayor supervivencia de estos pacientes que llegan a la vida adulta.1,2

En los últimos años, el avance en las técnicas de citogenética molecular de los cromosomas (hibridización in situ) permite un mayor conocimiento de las causas de algunas malformaciones congénitas. Entre estas se destacan: la anomalía de Di George (ADG), el síndrome velocardiofacial (SVCF) y el síndrome facies-anomalía conotruncal (SFAC), que tienen una etiología común y presencia de una deleción en la región 11,2 del brazo largo del cromosoma 22 (del 22q11.2) con una incidencia de 1 de cada 4000 nacidos vivos y habitualmente no son visibles por las técnicas de citogenética convencional.3-5

La ADG fue descrita en 1965 y se caracteriza por una aplasia o hipoplasia del timo con alteraciones variables en la cantidad y/o función de los linfocitos T, hipocalcemia debida a hipoparotiroidismo y defectos cardíacos del conotronco, como la interrupción del arco aórtico tipo B, el tronco arterioso, la tetralogía de Fallot y los defectos septales ventriculares, entre otros.6

EL SVCF o síndrome de Sprintzen descrito en 1978; se caracteriza por incluir fisura palatina, anomalías cardíacas conotruncales, fenotipo facial característico y problemas de aprendizaje. El SFAC o síndrome de Takao, descrito en Japón, presenta anomalías conotruncales, boca pequeña, anomalías auriculares y fisura palatina, entre otras alteraciones.7,8

Estos defectos cardiovasculares están asociados con un alto índice de procesos infecciosos recurrentes y gran variedad de manifestaciones clínicas, a consecuencia de lo cual estos pacientes son valorados por distintos especialistas, lo que permite un adecuado diagnóstico y un manejo multidisciplinario de la enfermedad. Por tal motivo, nos propusimos en nuestro trabajo estudiar la cuantificación de subpoblaciones linfocitarias T en estos pacientes, en los cuales se sospecha una posible inmunodeficiencia celular.

Métodos

Se estudiaron un total de 20 pacientes diagnosticados con un defecto cardiovascular troncoconal por ecocardiografía y/o cateterismo, 10 del sexo femenino y 10 del masculino, con un rango de edad de 8 días a 5 meses, procedentes del Servicio de Cardiopediatría del Cardiocentro “William Soler”. Como grupo control se utilizaron muestras de 25 niños supuestamente sanos con características similares en cuanto a edad y sexo. Tanto en el grupo control como en los pacientes, se cuantificaron las subpoblaciones linfocitarias T CD3, CD4 y CD8 mediante la utilización del método inmunocitoquímico de la fosfatasa alcalina antifosfatasa alcalina ( APAAP), modificado en nuestro laboratorio.9

Se realizaron extendidos de sangre provenientes de punción digital en láminas portaobjetos de cristal. El área de frotis se delimitó con lápiz con punta de diamante. Las láminas fueron fijadas en acetona pura por 10 min a temperatura ambiente (TA). Fueron añadidos los anticuerpos monoclonales específicos para los antígenos a estudiar, previamente diluidos (1:20) (tabla); el antisuero de conejo anti-ratón (linking) (1:50) y anticuerpos conjugados con la enzima fosfatasa alcalina (complejo APAAP). Se realizaron lavados en solución amortiguadora de tris hidroximetilaminometano 0,5 M, pH 7,6 en cada uno de los pasos. Las láminas fueron procesadas en cámara húmeda. Finalmente se llevó a cabo la coloración con naftol (200 mL), levamisol (5 mL), rojo violeta (1 mL) y la contracoloración con hematoxilina de Gill (200 mL). La lectura se realizó en un microscopio óptico Dialux 20 EB (Leitz, RFA). Se contaron al menos 200 células en cada lámina.

Tabla. Panel de anticuerpos monoclonales (AcMo) para el inmunofenotipaje celular

CD Dirigidos contra células T
cMo
Fuente

CD3

OKT3

Hosp. Clín. Barcelona, Barcelona, España

CD4

OKT4

Filatov Ins titute of Immunology, Rusia

CD8

OKT8

Filatov Institute of Immunology, Rusia

Se determinó la media aritmética y la desviación estándar para los diferentes grupos estudiados. Para la comparación se empleó la t de Student para muestras independientes para un nivel de significación de p<0,05.

Resultados

Al comparar los resultados entre los pacientes y controles se encontraron diferencias significativas para las subpoblaciones T CD3 y CD4 positivas para una p< 0,05. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas en el subtipo T CD8 positivo (figura).

Figura. Cuantificación de subpoblaciones de linfocitos T en enfermos con anomalías troncoconales y en individuos sanos.

Discusión

El síndrome de microdeleción 22q11.2 es una enfermedad frecuente y una de las causas más comunes de malformaciones congénitas múltiples que, por lo general, tienen una presentación neonatal. Se caracteriza por defectos cardíacos diferentes, hipoparotiroidismo, retraso del desarrollo e inmunodeficiencia.8-14

La presentación neonatal que predomina es la ADG con una alta mortalidad y una gran susceptibilidad a las infecciones. Desde el punto de vista inmunológico, el espectro de la enfermedad abarca una disminución desde leve a moderada de linfocitos T circulantes con timo pequeño o de localización ectópica, hasta aquella con alteración funcional mayor y recuento muy bajo de linfocitos T asociada con aplasia tímica e inmunodeficiencia celular persistente.15,16

En la mayoría de nuestros enfermos se evidenció una amplia variabilidad de los linfocitos T. La disminución del recuento de linfocitos T CD3, CD4 y CD8 positivos en el período neonatal fue de leve a moderado. Esto corrobora lo planteado por otros investigadores. 6,17,18 Otros autores han reportado disminución de la diversidad del repertorio Vb del receptor de linfocitos T CD4 y CD8 atribuida a una alteración de la función tímica o aumento de la activación de linfocitos T.18

El déficit inmunológico cuantitativo celular encontrado en estos pacientes indica la necesidad de incorporar el uso de inmunoestimulantes al tratamiento de estos, para disminuir la frecuencia y la severidad de las infecciones y de las complicaciones sépticas que se derivan de las intervenciones quirúrgicas que se requieran.

Summary

Study of the T-lymphocyte subpopulations in pediatric patients with conal-truncal cardiovascular abnormalities

The T-lymphocyte subpopulations were studied in 20 pediatric patients with conal-truncal cardiovascular abnormalities by the alkaline phosphatase alkaline antiphosphatase method with the anti-CD3, anti-CD4, and anti-CD8 specific monoclonal antibodies. 25 apparently sound individuals were selected as the  control group. Significant differences were obtained for the CD3- and CD4-positive T cell subpopulations (p< 0.05). The cellular immunological deficit found in these patients shows the need to include immunomodulators in their treatment to prevent septic complications.

Key words: T-lymphocyte subpopulation, conal-truncal cardiovasuclar abnormalities, cellular immunity.

Referencias bibliogáficas

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2. Mossallem TM, Guedes F, Fernández ER, Pagliari C, Andrade HF Jr, Duarte MI, et al. Characterization of cellular phenotypes and cytokine expression in balt from children with congenital heart diseases. Pediatr Pathol Mol Med 2003;22:449-59.

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9. Socarrás BB, Marsán V, Sánchez M, Gramatges A, Villaescusa R, Macías C. Comparación del ultramicrométodo (UMICIQ) con el de la fosfatasa alcalina anti-fosfatasa alcalina (APAAP) para la cuantificación de subpoblaciones linfocitarias T. Rev Cubana Hematol Inmunol Hemoter 2002;18:63-6.

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Recibido: 30 de septiembre del 2006. Aprobado: 15 de octubre del 2006.
Lic. Bertha Beatriz Socarrás Ferrer. Instituto de Hematología e Inmunología. Apartado Postal 8070, Ciudad de La Habana, CP 10800, Cuba. Tel. (537) 6438268, 6438695, 6434214, Fax (537) 442334. e-mail: ihidir@hemato.sld.cu

1Instituto de Hematología e Inmunología.
2Cardiocentro del Hospital Pediátrico Docente “William Soler”.

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