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El sistema de antígenos leucocitarios humanos (HLA, del inglés human leukocyte antigens) además de participar en la respuesta contra infecciones, se asocia a algunas enfermedades con base inmunológica. En particular, el HLA-B*27 es uno de los antígenos relacionados con enfermedades tales como la espondilitis anquilosante, la enfermedad de Reiter, la uveítis anterior aguda y la enfermedad inflamatoria intestinal.1 , 2
La detección del HLA-B*27 se realiza rutinariamente para apoyar el diagnóstico de la espondilitis anquilosante, pues 90 % de los pacientes con esta enfermedad, son positivos a ese antígeno, en comparación con el 8 % de las personas sanas. Por lo que se infiere que la determinación del HLA-B*27 es de suma importancia, aunque por sí sola no permite el diagnóstico de certeza.3
El HLA-B*27 puede identificarse por varios métodos de laboratorio. Uno de ellos es la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC), que se basa en incubar los linfocitos del sujeto con sueros que contengan anticuerpos contra el HLA. Como los anticuerpos son policlonales se incluyen algunos que reconozcan antígenos similares al HLA-B*27 de forma que se pueda identificar un falso positivo debido a una reacción cruzada.4
El primer método de biología molecular que se utilizó con verdadera utilidad práctica para identificar HLA-B*27, se conoce como reacción en cadena de la polimerasa con cebadores específicos de secuencia (PCR-SSP, del inglés de polimerase chain reaction - specific sequence primers), que se basa en utilizar los cebadores correspondientes para que la enzima TAQ polimerasa amplifique de forma selectiva los genes del HLA-B*27, los cuales se verifican en una etapa pos-PCR mediante una electroforesis.5
Una variación de esta metodología se puede adaptar a los sistemas de PCR en tiempo real, en los cuales la identificación de los genes del HLA-B*27 no se hace por punto final mediante una electroforesis, sino a medida que van ocurriendo los ciclos de amplificación. Para ello se requiere un equipamiento más costoso, que normalmente no se adquiere solo para esta genotipificación, sino también para ejecutar otras técnicas de biología molecular cuantitativas.1 , 6
Actualmente existe otro sistema de tipificación HLA, basado en oligonucleótidos específicos de secuencia o SSO (del inglés equence-specific oligonucleotides), los cuales se hibridan de forma complementaria con el ADN humano previamente amplificado por PCR. Las tipificaciones HLA por PCR-SSO se interpretan en un fluoroanalizador multiparamétrico Luminex.5 , 7
Este sistema es costoso, al igual que el PCR en tiempo real, pero no detecta solo el HLA-B*27, sino que, en un pozo de reacción, se hace una tipificación completa del locus HLA-B. Por lo tanto, tiene la ventaja de identificar los dos alelos HLA-B, cualesquiera que estos sean y de resolver las posibles incongruencias de los otros métodos.5
Las pruebas realizadas por CDC o por metodología basada en biología molecular, generalmente requieren de personal especializado y procedimientos de control de calidad, que muchos laboratorios de diagnóstico pueden no tener. Por estas razones se ha utilizado ampliamente la detección de HLA-B27 por citometría de flujo.8
Los reactivos para la identificación del HLA-B*27 por citometría de flujo incluyen un anticuerpo monoclonal específico conjugado con un fluorocromo como el isotiocianato de fluoresceína o la ficoeritrina. Para descartar falsos positivos puede utilizarse al mismo tiempo otro monoclonal contra un antígeno que tenga reacción cruzada con el HLA-B*27 como lo es el HLA-B*07. Algunos sistemas también incluyen un anti-CD3 para identificar los linfocitos T.8
Para analizar el ensayo en el citómetro de flujo se identifica una población de linfocitos o linfocitos T. Esto se puede hacer usando las propiedades intrínsecas de las células como tamaño y complejidad, o extrínsecas como la unión a CD3. A partir de la población de linfocitos, la unión del anticuerpo anti-HLA-B27 se determina en comparación con los controles negativos y positivos.8
La principal desventaja de la detección de HLA-B*27 por citometría de flujo, es la citada reactividad cruzada del anticuerpo anti-HLA-B*27 con el llamado grupo de antígenos de reacción cruzada (CREG, del inglés cross-reactive group) B7, que incluyen HLA-B*07, HLA-B*13, HLA-B*22, HLA-B*37 y HLA-B*42.8
Si el individuo presentara uno de estos antígenos del CREG B7, no siempre es posible la resolución de las ambigüedades y prácticamente se hace obligatorio aplicar la biología molecular para confirmar la presencia o ausencia del HLA-B*2. Por lo que un centro que incluya esta determinación como servicio, de forma ideal necesita de un laboratorio HLA de referencia.8
La detección de HLA-B*27 por citometría puede abaratar costos, particularmente cuando el número de muestras es elevado, pero debería aplicarse solo como un método de tamizaje. Para mantener una elevada calidad de los resultados, ante una citometría de HLA-B*27 positiva, se puede utilizar como confirmatorio el PCR en tiempo real.6
Por otra parte, sería ideal contar con una técnica adicional que permita una tipificación completa del locus HLA-B, lo que ayudaría a resolver los casos de curvas dudosas y a identificar el HLA-B*07 que se ha relacionado con espondilo artopatías indiferenciadas y otras enfermedades autoinmunes en poblaciones HLA-B*27 negativas.9
Finalmente, para el uso racional de los recursos no basta con la implementación de las tecnologías más eficientes, sino que, la indicación del HLA-B*27 se debe hacer aplicando pensamiento clínico. Solo cuando el médico de asistencia y el laboratorio van de la mano, los pacientes que verdaderamente lo necesitan pueden beneficiarse de los medios diagnósticos de mayor complejidad.
