Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí"

Aislamiento y axenización de Giardia lamblia en niños procedentes de círculos infantiles de Ciudad de La Habana

Lic. Dinorah Torres, Dr. Fidel Núñez y Dr. Carlos Finlay

RESUMEN

Se reporta el aislamiento de Giardia lamblia procedentes de niños de 3 círculos infantiles de Ciudad de La Habana. El 2,8 % de los aislamientos fue logrado utilizando la desenquistación in vitro, mientras que utilizando al gerbil como modelo animal para la desenquistación del parásito se logró el 97,2 %, lo que demostró la superioridad de este último método.

Palabras clave: GIARDIA LAMBLIA/aislamiento y purificación; MEDIOS DE CULTIVO; NIÑO. INTRODUCCION

La Giardia lamblia es un protozoo parásito que afecta al hombre y otras especies. Durante mucho tiempo el estudio de las características de este microorganismo se vio limitado por las dificultades con su cultivo, sin embargo, en los últimos 20 años se han reportado métodos que permiten su aislamiento y cultivo axénico.^1,2 Estos avances han posibilitado un mejor conocimiento de las características fenotípicas y genotípicas de este protozoo.^3,4

Los estudios de caracterización de los aislamientos de pacientes procedentes, tanto de áreas geográficas distantes como de la misma área, reportan diferencias en las características de los mismos.^5,6 Estas variaciones hacen que sea de gran interés el estudio de parásitos provenientes de pacientes con características clínicas diferentes, para determinar la relación que pueda existir entre estas diferencias y el variado cuadro que se presenta en la giardiasis.

En el presente trabajo se compara la efectividad de 2 métodos de aislamiento y axenización de G. lamblia, ya que el contar con un método adecuado que permita obtener un número significativo de aislamientos resulta de gran importancia en el estudio de las características de este protozoo en un área determinada.

METODOS

Los aislamientos se realizaron de un grupo 185 niños de 3 círculos infantiles de Ciudad de La Habana que fueron estudiados coproparasitológicamente por un período de 2 años, con toma de muestra cada 6 meses. De estos niños, 66 resultaron parasitados al menos una vez durante el estudio y en 56 casos se realizó el intento de aislamiento, no así en los 10 restantes por presentar un número muy bajo de quistes en las heces (menos de un quiste por campo al examen microscópico).

El aislamiento de los parásitos se realizó mediante la desenquistación in vitro según reporta Hautus M. et al.² (1988) con la utilización del gerbil (Meriones unguiculatus) como modelo animal, siguiendo la metodología descrita por Wallis et al. ⁷(1986).

Los gerbils fueron infectados con cantidades entre 1 y 2 x 10⁵ quistes/animal y como medio de cultivo para ambos métodos se utilizó el medio TYI-S-33 suplementado con bilis.⁸

RESULTADOS Y DISCUSION

Se logró el aislamiento y cultivo axénico del parásito en 36 casos por uno u otro método. Las características de los pacientes de los cuales proceden los aislamientos se presentan en la tabla.

TABLA. Algunos datos clínicos de los pacientes

Aislamiento	Características
C-3	edad 5 años, signos alérgicos, (++++)
C-4	edad 4 años, (- -+-)
C-5	edad 2 años, episodios diarreicos, (+-++)
C-6	edad 2 años, episodios diarreicos,(++++)
C-7	edad 4 años, episodios diarreicos,(++++)
C-8	edad 4 años, asintomáticos, (- -++)
C-9	edad 3 años, asintomático, ( -+ -+)
C-10	edad 2 años, (-+ -+)
C-11	edad 3 años, episodios diarreicos, (++ -+)
C-12	edad 2 años, (- + - -)
C-13	edad 3 años, (- - + -)
C-14	edad 3 años, (- - + +)
C-15	edad 4 años, (+ + - -)
C-16	edad 2 años, (- - - +)
C-17	edad 2 años, (- - - +)
C-18	edad 2 años, episodios diarreicos, (+- -+)
C-19	edad 3 años, episodios diarreicos, (++ - +)
C-20	edad 3 años, asintomático, (- + - +)
C-21	edad 2 años, asintomático, (- + + +)
C-22	edad 4 años, asintomático, (- - + +)
C-23	edad 4 años, (+ - - +)
C-24	edad 4 años, asintomático, (++ - +)
C-25	edad 4 años, signos alérgicos, (++++)
C-26	edad 3 años, asintomático, (- - - +)
C-27	edad 4 años, asintomático, (- - - +)
C-28	edad 4 años, asintomático, (- - - +)
C-29	edad 5 años, asintomático, (- - - +)
C-30	edad 3 años, (+ + - +)
C-31	edad 3 años, asintomático (- + + +)
C-32	edad 3 años, asintomático, (+ + + +)
C-33	edad 4 años, asintomático, (- - + +)
C-34	edad 2 años, (+ + - +)
C-35	edad 4 años, asintomático, (- - + +)
C-36	edad 2 años, cuadros diarreicos, (++ -+)
C-37	edad 2 años, (- + + +)
C-38	edad 4 años, episodios diarreicos, (++++)

+ Examen parasitológico positivo a Giardia lamblia (examen semestral). -- Examen parasitológico negativo a Giardia lamblia (examen semestral).

Por el método de desenquistación in vitro se logró la desenquistación en 36 casos para un 64,2 %. No obstante sólo se pudo establecer el cultivo en un 2,8 % de ellos. El factor principal que motivó la pérdida de los cultivos fue la aparición de contaminación con levadura, la que no pudo ser eliminada ni siquiera con la utilización de anfotericín B en dosis de hasta 20 mg/mL. Otro factor de menor importancia fue la aparición de divisiones incompletas, lo que ocasionó la aglutinación de parásitos y la pérdida final del cultivo, ya observada por otros autores.⁹

Con la utilización del gerbil como modelo experimental se logró la infección de los animales en el 71,4 % de los intentos de aislamiento y se estableció el cultivo en 35 casos, lo cual representa el 87,5 % de los intentos y el 97,2 % del total de aislamientos. Como se puede observar, este método es muy superior a la desenquistación in vitro, teniendo en cuenta que el número de casos en que se puede establecer el cultivo es muy superior. En esto influye, en primer lugar, la obtención por esta vía de una mayor cantidad de parásitos, lo que posibilita la eliminación de la contaminación por cambios de medio, debido a que las pérdidas de parásitos son menos importantes al contar con un mayor número de éstos y en segundo lugar, que las contaminaciones son menores y por tanto más fáciles de eliminar.

Sin embargo, se presentan aún pérdidas por contaminaciones con levaduras, aunque en menor escala, fundamentalmente motivadas por las divisiones incompletas y por un ritmo decreciente de multiplicación en algunos casos, lo que ocurre en los primeros 7 días del cultivo. La causa pudiera estar relacionada con la fase en que haya sido tomada la muestra, pues se reporta que puede ocurrir cuando se toma en fase no logarítmica de crecimiento.¹⁰

El estado de cultivo axénico le fue dado después de realizadas las pruebas micológicas y bacteriológicas. Los 36 aislamientos logrados fueron criopreservados utilizando dimetilsulfoxido al 10 % y una temperatura final del proceso de -196°C en nitrógeno líquido.

Por los resultados obtenidos en el presente trabajo es posible sugerir la utilización del gerbil como un modelo animal satisfactorio para el aislamiento y axenización de G. lamblia, pues presenta ventajas que lo hacen muy superior al método de desenquistación in vitro.

SUMMARY

It is reported the isolation of Giardia lamblia in children from three day care centers in Havana City. The 2,8 % of the isolations were obtained by using the disencystment in vitro, whereas using gerbil as an animal model for the parasite disencystment 97,2 % was attained. This result shows the superiority ot he latter.

Key words: GIARDIA LAMBLIA/isolation and purification; CULTURE MEDIA; CHILD.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Gasser RB, Eckert J, Rohrer L. Infectivity of Swiss Giardia lamblia isolates to jirds and mice and in vitro cultivation of trophozoites originating from sheep. Parasitol Res 1987;74:103-11.
2. Hautus MA, Korbee KLM, Vetter JCM, Laarman JJ. In vitro excystation and subsequent axenic growth of Giardia lamblia. Trans R Sos Trop Med Hyg 1988,82:858-61.
3. Proctor EM, Isaac-Renton JL, Boyd J, Wong Q, Bowie WR. Isoenzyme analysis of human and animal isolates of Giardia duodenalis from British Columbia, Canada. Am J Trop Med Hyg 1989;41:411-15.
4. Hopkins RM, Thomson RC, Hobbs RP, Lymbery AJ, Villa N, Smithyman TM. Differences in antigen expression within and between 10 isolates of Giardia duodenalis. Acta Tropica 1993;54:117-24.
5. Meloni BP, Thompson RC, Straden AM, Koler P, Eckert J. Critical comparison of Giardia duodenalis from Australia and Siwtzerland using isoenzymes electrophoresis. Acta Trop 1992;50:115-24.
6. Meloni BP, Lymbery AM, Thomson RC. Characterization of Giardia by DNA and isoenzymes analysis. Am J Trop Med Hyg 1989;40:629-37.
7. Wallis PM, Wallis HM. Excystation and culturing of human and animals Giardia sp. by using gerbils and TYI-S-33 medium. Appl Environ Microbiol 1986;51:647-51.
8. Keister DB. Axenic culture of Giardia lamblia in TYI-S-33 medium supplement with bile. Trans R Soc Trop Med Hyg 1983;77:487-8.
9. Boreham PF, Phillips RE, Shepherd BW. The sensitivity of Giardia intestinalis to drugs in vitro. J Antimicrob Chemother 1984;14:449-61.
10. Baveja UK. Isolation and axenization of fresh strains of Giardia lamblia in India. Indian J Med Res 1987;85:32-6.

Recibido: 8 de agosto de 1995. Aprobado: 20 de diciembre de 1995.

Lic. Dinorah Torres. Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí". Apartado 601, Zona 13, Ciudad de La Habana, Cuba.