Instituto Nacional de Angiología y Cirugía Vascular

Estudio de algunos parámetros bioquímicos y de la actividad angiogénica del omentum

Dra. Ana María Quintela, Dr. Pedro de Fránquiz, Dr. José Ignacio Fernández, Dra. María Eugenia Triana, Dr. Orfilio Peláez y Dra. Marta Hernández

RESUMEN

Se estudió el efecto angiogénico y la composición de proteínas y lípidos del omentum humano a partir de la inoculación intraestromal en la córnea de conejo de los extractos obtenidos tras homogeneizar el material biológico. Se encontraron valores muy bajos de proteínas y muy elevados de triglicéridos fundamentalmente en el extracto 2 de origen lipídico. En relación con la vascularización, ésta se logró con mayor intensidad en la córnea de los animales que se inocularon con el extracto 2.

Descriptores DeCS: OMENTUM; EXTRACTOS DE TEJIDOS/análisis; FACTOR DE ANGIOGENESIS/análisis; PROTEINAS/análisis; COLESTEROL/análisis; TRIGLICERIDOS/análisis; ESTROMA DE LA CORNEA/ /irrigación sanguínea; NEOVASCULARIZACION FISIOLOGICA; CONEJOS.

La angiogénesis no es más que el desarrollo de la formación de nuevos vasos sanguíneos en un tejido como respuesta a un factor angiogénico.¹ Este proceso resulta esencial en la cicatrización de las heridas y es activo en estados patológicos, incluyendo el crecimiento de tumores malignos.² Variados son los tejidos normales que contienen una actividad angiogénica potente, donde muchos factores angiogénicos se liberan lentamente debido a su corto tiempo de vida y elevada difusión.¹

Células no neoplásicas como los linfocitos y macrófagos liberan igualmente una sustancia con propiedades angiogénicas; lo mismo ocurre con el miocardio humano infartado.³

La aplicación del omentum en los pacientes diabéticos con enfermedades vasculares ha tenido muy buenos resultados⁴ que concuerdan con los obtenidos por otros investigadores.⁵ Estudios realizados en animales de experimentación han comprobado la efectividad de este material, cuya aplicación tópica en la superficie cerebral de perros ha favorecido la revascularización de las áreas afectadas.^6,7

En los últimos años el omentum se ha venido utilizando como fuente de células mesoteliales en el recubrimiento del interior de las prótesis artificiales para aumentar su efectividad.^8-10

A pesar de lo mucho que se ha trabajado con estos factores, son pocos los que han sido aislados y caracterizados, por lo que con el presente trabajo pretendemos comenzar el estudio bioquímico del omentum humano.

MÉTODOS

El omentum humano se obtuvo de cadáveres con menos de 6 horas de fallecidos, no diabéticos y cuya causa de muerte fuera conocida pero de origen no neoplásico, infeccioso, ni por enfermedades vasculares. El material se conserva a 4 °C en frascos limpios y tapados hasta su procesamiento, que no excedió a las 48 horas posteriores a su obtención.

Se utilizaron 4 g de cada uno de los 5 omentum, siguiendo la técnica descrita por Goldsmith y su grupo,¹ previa preparación de un homogenato con todos ellos. El material se centrifugó y se obtuvieron 2 fracciones según se muestra en la figura 1.

La fracción líquida inferior se desecha y la superior, bien compacta, se homogeniza con una mezcla de cloroformo-metanol (2:1) durante 10 min a temperatura ambiente; se centrifuga durante 10 min a 4 °C y 200 g, para obtener 2 fases que se aíslan y se someten por separado a una corriente de nitrógeno en baño termostatado a 60 °C. Al extracto 1 que se evaporó completamente, lo denominamos no lipídico y al extracto 2, con una escasa evaporación de menos de 0,5 mL del volumen total, lo denominamos lipídico.

FIGURA 1. Fracciones obtenidas después de la centrifugación del homogenato de los fragmentos de omentum utilizados para el estudio.

Para probar la actividad angiogénica de los extractos obtenidos fueron utilizados 15 conejos Nueva Zelanda sanos y bajo régimen de luz, temperatura y alimentación normal, con un peso promedio de 2,5 kg, cumpliendo con los principios básicos establecidos por la Oficina Sanitaria Panamericana para la investigación con animales. Los conejos fueron divididos en 3 grupos de 5 animales cada uno donde al primero, considerado como control, se le inoculó buffer salina fosfato (PBS), al segundo el extracto 1 y al tercero el extracto 2. En todos los casos se hizo la inoculación de una dosis única de 15 mL del material de forma intraestromal en la córnea, con observaciones macroscópicas a los 2, 4, 6, 8 y 10 días posteriores a la inoculación. Al finalizar la experiencia se realizó la enucleación del ojo, el cual se colocó en un frasco que contenía formol al 10 %, para su posterior estudio histológico.

Paralelamente se determinó en los extractos en estudio, la concentración de proteínas por el método de Lowry,¹¹ el colesterol por el conocido método del Abell¹² y los triglicéridos por el método de Grafnetter.¹³ Estas técnicas resultan de un amplio uso en los laboratorios por su sencillez y valor diagnóstico.

ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

El omentum es un material ampliamente utilizado en cirugía para la curación de las heridas por ser un material barato, asequible y que ha brindado buenos resultados en la clínica y al que se le ha sugerido una función inmunológica importante.¹⁴ Los valores de los parámetros bioquímicos estudiados pueden observarse en la tabla, donde encontramos niveles bajos de proteínas y muy elevados de lípidos fundamentalmente de los triglicéridos en el extracto 2, resultados éstos esperados por cuanto el omentum es un material muy rico en grasa.

TABLA. Valores de proteínas, colesterol y triglicéridos de los extractos estudiados. Valores de media y desviación estándar

	Proteínas	Colesterol	Triglicéridos
Extracto 1	0,194+/-0,68	36,29+/-0,004	473,34+/-0,14
Extracto 2	0,116+/-0,08^*	143,13+/-0,003^*	1 546 +/- 0,06^*

Proteínas (mg); Colesterol y triglicéridos (mg %); ^* p < 0,001

La córnea es la parte gruesa y transparente de la capa esclerocorneal que envuelve al ojo en su porción anterior y por ser totalmente avascular se utiliza mucho para demostrar la neovascularización. Aprovechando esta característica, es posible conocer las respuestas angiogénicas obtenidas por la inoculación de los extractos estudiados en relación con el control, observándose una vascularización mayor cuando se inoculó el extracto 2, resultado éste que concuerda con lo reportado por Goldsmith y su grupo¹ pero trabajando con omentum de gato.

Los estudios histológicos con el uso de la coloración de hematoxilina-eosina confirman los resultados planteados anteriormente y se puede observar en la figura 2 la córnea que se mantiene avascular aun después de la inoculación del PBS, lo que confirma el valor de éste como sustancia control que no tiene efectos angiogénicos.

Figura 2. Microfotografía de la córnea normalmente avascular después de la inyección de 15 mL de PBS. (Hematoxilina-eosina.)En la figura 3 se muestra la reacción obtenida al inocular el extracto 1 no lipídico, donde se observa una moderada vascularización, en tanto al inocular el extracto 2 lipídico, la vascularización que se obtiene en la córnea de los conejos es elevada, lo que prueba el marcado efecto angiogénico de este extracto (figura 4). Figura 3. Moderada vascularización corneal después de la inoculación del extracto 1. (Hematoxilina-eosina.) Figura 4. Elevada vascularización corneal después de la inoculación del extracto 2. (Hematoxilina-eosina.)Con este trabajo se logró obtener una información preliminar sobre la composición y la efectividad vasculogénica del omentum.

SUMMARY

It was studied the angiogenic effect and the composition of proteins and lipids of the human omemtum by the intrastromal inoculation into the rabbit's cornea of the extracts obtained after homogenizing the biological material. Extremely low values of proteins and very high values of triglycerides were found mainly in the extract 2 of lipidic origin. Regarding vascularization, it was attained with greater intensity in the cornea of those animals that were inoculated the extract 2.

Subject headings: OMENTUM; TISSUE EXTRACTS/analysis; ANGIOGENESIS FACTOR/analysis; PROTEINS/analysis; CHOLESTEROL/analysis; TRIGLYCERIDES/analysis; CORNEAL STROMA/blood supply; NEOVASCULARIZATION, PHYSIOLOGIC; RABBITS.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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Recibido: 27 de diciembre de 1996. Aprobado: 28 de febrero de 1997.

Dra. Ana María Quintela. Instituto Nacional de Angiología y Cirugía Vascular. Calzada del Cerro #1551, Ciudad de La Habana, Cuba.