Instituto Superior de Ciencias Médicas “Serafín Ruiz de Zárate”, Villa Clara

Comparación de técnicas para el serodiagnóstico de la leptospirosis humana

Lic. Lelys Navarro Aguirre, Dra. Olga L. González González, Dra. Ma. de Lourdes Sánchez Álvarez y Dr. Osmel Rodríguez García

RESUMEN

Se estudiaron 786 sueros pareados de pacientes con sospecha clínica, con evidencia epidemiológica de leptospirosis o sin esta, por las técnicas de hemaglutinación (HA) y microaglutinación (MAT), como técnica de referencia (gold standard), con el objetivo de comparar los resultados obtenidos por ambas pruebas serológicas. Se observó que 368 sueros (46,8 %) fueron positivos solo por la MAT, lo que mostró una diferencia altamente significativa entre las 2 técnicas utilizadas; se determinó así una menor sensibilidad de la prueba de hemaglutinación (HA), que resultó ser específica.

DeCS: TESTS SEROLOGICOS; LEPTOSPIROSIS/ diagnóstico; HEMAGLUTINACION.

 

 

La leptospirosis es una zoonosis transmitida por contacto de la piel y las mucosas escoriadas con aguas contaminadas con orina de roedores y otros animales domésticos y salvajes (reservorio). Es una enfermedad frecuente y de distribución mundial.¹

Cuba se encuentra entre los países del Caribe que más notifican la leptospirosis. La incidencia de la enfermedad ha mantenido un comportamiento endemo-epidémico, distribuyéndose en todo el país (Valdés L, Carbonell I, Delgado J, Santín M. Leptospirosis. En: Enfermedades emergentes y reemergentes. La Habana. Ministerio de Salud Pública, 1998.p.233-43). Dentro de las provincias más afectadas se incluye Villa Clara, que mantiene tasas altas con una tendencia creciente, por lo que constituye un problema de salud para la provincia.

El diagnóstico microbiológico de la leptospirosis se realiza por técnicas bacteriológicas y serológicas.

Las técnicas serológicas brindan un diagnóstico en corto período de tiempo y son capaces de detectar anticuerpos antileptospirales (que pueden ser de las clases IgM e IgG), por lo que constituyen técnicas de elección (República de Cuba. Ministerio de Salud Pública. Programa Nacional de Prevención y Control de la Leptospirosis Humana. 2 ed. La Habana, 1998).

El presente trabajo tiene como objetivo valorar comparativamente las técnicas de hemaglutinación (HA) y microaglutinación (MAT) utilizadas para el diagnóstico de la leptospirosis en la provincia.

MÉTODOS

Para la realización del presente trabajo, se efectuó una investigación analítica observacional, durante el período comprendido de agosto de 1998 a agosto de 1999.

El universo de trabajo estuvo constituido por un total de 786 pacientes con sospecha clínica, con evidencia epidemiológica de leptospirosis, o sin esta, que pertenecían a los municipios de la provincia Villa Clara considerados de mayor riesgo: Camajuaní, Cifuentes, Corralillo, Encrucijada, Quemado, Ranchuelo y Santo Domingo.

En todos los casos fueron tomadas en el área de salud, 2 muestras de sangre, siguiendo las normas para la toma de muestras de leptospirosis del Centro Nacional de Diagnóstico y Referencia. Fueron enviadas posteriormente al Centro Provincial de Higiene y Epidemiología de Villa Clara donde se conservaron a temperatura de refrigeración (4 ºC) hasta la realización de las pruebas serológicas.

A todas las muestras tomadas les efectuaron las pruebas serológicas siguientes:

–  Microaglutinación de serogrupos (MAT), utilizando cepas de los serogrupos icterohaemorragiae, canicola, pomona, australis, hebdomadis, tarassovi y sejroe.

– Hemaglutinación pasiva (HA).

En ambos casos se aplicaron las técnicas según lo establecido en las normas técnicas para el diagnóstico de la leptospirosis del Ministerio de Salud Pública.

Se realizaron pruebas de concordancia y de contingencia (kappa).

RESULTADOS

En la tabla 1 se muestran los resultados del estudio comparativo entre la prueba HA y la MAT. El resultado obtenido al realizar la prueba de concordancia (kappa) al estudio comparativo de ambas técnicas, kappa= 0,019 y p= 0,358.

Tabla 1. Resultados del estudio comparativo entre la MAT y la HA en los sueros estudiados, agosto 1998-agosto 1999

Resultados	Nº	%
MAT (+) HA (+)	43	5,47
MAT (-) HA (+)	32	4,07
MAT (+) HA (-)	368	46,80
MAT (-) HA (-)	343	43,70
Total	786	100,00

Fuente: Centro Provincial de Higiene y Epidemiología.

Teniendo en cuenta los resultados mostrados anteriormente, se decidió, considerando igual que en la literatura revisada, la MAT como técnica de referencia (gold standard), determinar la sensibilidad, especificidad y valor predictivo de la HA en el Laboratorio de Leptospiras del Centro Provincial de Higiene y Epidemiología de Villa Clara, obteniendo los resultados que se muestran en la tabla 2.

Tabla 2. Sensibilidad y especificidad en las técnicas utilizadas, agosto 1998-agosto 1999

	MAT	HA	MAT y HA
Positivos	411	75	43 (10,5 %)
Negativos	375	711	343 (91,5 %)

X²= 0,845; p= 0,358
Fuente: Centro Provincial de Higiene y Epidemiología.

De los 411 positivos por la MAT, la HA solo detectó 10,5 % y este es el valor de sensibilidad obtenido. De los 375 negativos por la MAT la HA detectó 91,5 %, siendo esta la especificidad.

La proporción de individuos clasificados como positivos por la HA que en realidad tienen la enfermedad, medida por la MAT, indican el valor predictivo positivo de la prueba que es de 57,3 %.

Al realizar la prueba de contingencia a estos resultados, se obtiene que X²= 0,845 y p= 0,358

DISCUSIÓN

El hecho de haber obtenido 368 sueros positivos solo por la MAT, se puede atribuir a la diferencia en el tipo de inmunoglobulina que detectan ambas pruebas, la HA detecta solo IgM, mientras que la MAT detecta IgM e IgG. La dinámica de anticuerpos en la leptospirosis, resulta importante en la interpretación de los resultados serológicos. La MAT es considerada al nivel mundial la prueba de oro (gold standard), para el diagnóstico de la leptospirosis;¹ pero el título límite para la positividad,^2,3 varía de acuerdo con las características de la población estudiada. Si se considera que la leptospirosis en Cuba es endémica, con un comportamiento epidémico en la actualidad, es decir que la población debe tener un determinado nivel de anticuerpos contra diferentes serovars de leptospira y la sensibilidad que se plantea para la MAT,⁴ el título utilizado puede estar afectando estos resultados. Otro factor importante que puede estar facilitando la aparición de positivos por MAT, es la antigenicidad cruzada, los antígenos compartidos entre diferentes agentes infecciosos dan lugar a la formación de anticuerpos contra estos. Esos anticuerpos complican el diagnóstico, y pueden inducir a una interpretación equivocada y más si se tiene en cuenta que el cuadro clínico de la leptospirosis es muy variado, por lo que es importante el diagnóstico diferencial con otras entidades.

Al realizar la prueba de concordancia (kappa) a los resultados del estudio comparativo de ambas técnicas, se puede observar en la figura que se reafirman los resultados mostrados en la tabla anterior, es decir, que no existe concordancia significativa entre los resultados obtenidos por ambas técnicas (kappa= 0,019; p= 0,358).

De los 411 (52,3 %) positivos por la MAT, la HA solo detectó 10,5 % y este fue el valor de sensibilidad obtenido. El resultado es sorprendente, si se tiene en cuenta que se ha planteado una sensibilidad para esta técnica de 90 %.⁵ De los 375 negativos por la MAT la HA detectó 91,5 %, demostrando ser específica, resultado que coincide con lo reportado por otros autores.⁶

Es importante señalar que estos valores pueden ser afectados por la variación del observador que realiza la prueba, y eso se reafirma por el hecho de que ambas pruebas, no se están realizando a la misma vez en el laboratorio; además, la microaglutinación no se aplicaba en este laboratorio desde hacía aproximadamente 10 años, por lo que al introducirla, hubo que estandardizarla y el personal técnico necesitó un mayor adiestramiento y capacitación para realizar el trabajo.

La MAT es de alta sensibilidad, además, facilita al utilizarse una batería de antígenos la aparición de mayor número de positivos, ayudando también por la variedad antigénica la aparición de reacciones cruzadas por superposición antigénica. En la HA por la utilización de un antígeno único,⁷ que no produce reactividad cruzada con anticuerpos debido a la estimulación antigénica de otros microorganismos, esta posibilidad no es tan frecuente.^8-10

El valor predictivo positivo de la HA, es de 57,3 %. Este valor indica los individuos que la HA clasifica como positivos y que son clasificados como enfermos por la MAT, este resultado sería necesario analizarlo comparativamente con el resultado del hemocultivo, que es el método de diagnóstico confirmativo de la leptospirosis, y daría realmente, enfermos y sanos.

Al realizar la prueba de contingencia a estos resultados, se obtiene como era esperado, que la asociación entre ambas pruebas es no significativa (X²= 0,845; p= 0,358)

Teniendo en cuenta estos resultados se debe perfeccionar el diagnóstico de la leptospirosis en la provincia, considerando que para un diagnóstico certero de esta enfermedad, se recomienda combinar la MAT con un test como la HA, que detecte IgM, usando un antígeno de amplio espectro.¹

Se puede concluir que en el estudio comparativo efectuado entre la microaglutinación de serogrupos (MAT) y la hemaglutinación (HA), se encontraron diferencias altamente significativas en los resultados obtenidos por ambas técnicas. No existió concordancia significativa en las observaciones realizadas por ambas técnicas.

Se obtuvieron para la HA, utilizando como prueba de oro (gold standard) la MAT, valores bajos de sensibilidad (10,5 %), una alta especificidad (91,5 %), y valor predictivo positivo de 57,3 %.

Summary

786 matched sera from patients with clinical suspicion with epidemiolopgical evidence of leptospirosis or without it were studied by the hemagglutination (HA) and microagglutination (MAT) techniques as a reference technique (gold standard) aimed at comparing the results obtained by both serologic tests. It was observed that 386 sera (46.8 %) tested positive only by MAT, which showed a highly signficant difference between the 2 techniques used. It was determined a lower sensitivity of the hemoagglutination test (HA) that proved to be specific.
.
Subject headings: SEROLOGIC TESTS; LEPTOSPIROSIS/ diagnosis; HEMAGGLUTINATION.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICASBarwick RG. Epidemiologic factors of equine leptospira interrogants of human significance. Pre Vet Med 1998;36(2):153-65.

Chappel RJ. Serological titres to leptospira fainei serovar hurstbridge in human sera in Australia. Epidemiol Infect 1998;121(2):473-5.

Regalado D, López C, Obregón AM. Estudio comparativo de técnicas serológicas para el diagnóstico de la leptospirosis humana. Rev Cubana Med Trop 1992;4(2):129-33.

Levett PN, Whittington CO. Evaluation of indirect hemagglutination assay for diagnosis of acute leptospirosis. J Clin Microbiol 1998;36(1):11-4.

Yersin C. Human Leptospirosis in the Seychelles (Indic Ocean): a population – base study. Am J Trop Med Hyg 1998;59(6):933-40.

Brooks G, Butel J, Morse S. Spirochetes & others spiral microorganisms. En: Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA. Medical Microbiology. 21ª. Ed. United States of America: Apletton And Lange; 1998.p.295-8.

Speelman P. Leptospirosis. En: Harrison TR. Principios de Medicina Interna. 14ª ed. Brasil. Mc Graw Hill Interamericana; 1998.p.1108-10.

Brandao AP. Macroscopic agglutination test for rapid diagnosis of human leptospirosis. J Clin Microbiol 1998;36(11):3138-42.

Recibido: 6 de agosto de 2003.  Aprobado: 9 de diciembre de 2003.

Lic. Lelys Navarro Aguirre. Instituto Superior de Ciencias Médicas “Serafín Ruiz de Zárate”, Villa Clara. Correo electrónico: [e-mail]