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Revista Cubana de Enfermería
versión On-line ISSN 1561-2961
Rev Cubana Enfermer v.11 n.3 Ciudad de la Habana oct.-dic. 1995
Evaluación de una tira reactiva biparamétrica para determinar pH y proteínas en orina
Ing. Yuria Bilbao Abraham,<1> Lic. Niurka Russeaux Guía,<2> Lic. Lilliam Valdés Diez<3> y Lic. María del Carmen Bueno Ruiz<4>RESUMEN
Las tiras reactivas como medio de diagnóstico constituyen un instrumento de gran utilidad, pues permiten la obtención rápida de datos confiables sobre diversas afecciones. Con el objetivo de estudiar el comportamiento de una tira reactiva para determinar pH y proteínas en orina, se realizó un trabajo experimental que consistió en ensayar ésta con soluciones de albúmina de concentraciones conocidas y a diferentes valores de pH. Se estudió el comportamiento de la tira reactiva en 70 muestras de orina de personas supuestamente sanas. Como resultado de este trabajo se determinó que dicha tira es apropiada para el diagnóstico semicuantitativo de proteinurias en el rango de 0,3 a 5,0 g/L y para valores de pH entre 5 y 9. Se presenta, además, un estudio de la respuesta de ésta en el tiempo.Palabras clave: TIRAS REACTIVAS/uso diagnóstico; pH; PROTEINAS; ORINA.
INTRODUCCION
La alteración de la concentración de los parámetros químicos en los fluidos biológicos indica la presencia de diversas afecciones, por lo que resulta de gran interés el desarrollo y perfeccionamiento de métodos que permiten obtener resul tados rápidos y confiables al médico clínico.Entre los parámetros estudiados se encuentran las proteínas y el pH.
En presencia de afecciones renales, los niveles de proteínas séricas disminuyen, pues éstas son excretadas por la orina, por lo que la determinación de proteínas, tanto en el suero como en orina, es de gran utilidad para el diagnóstico de este grupo de enfermedades.1
La proteinuria es un síntoma frecuente de una nefropatía, ya sea glomerulonefritis, pielonefritis o alguna otra. Por regla general en las nefropatías los valores de proteína en orina se encuentran por encima de 0,30 g/L.1,2
El valor del pH en la orina es una consecuencia del estado metabólico y de diversas enfermedades, también está influido por algunos medicamentos.
En personas sanas el valor de pH de la orina recién emitida se encuentra entre 5 y 6. Valores alcalinos persistentes indican una infección en las vías urinarias; orinas persistentemente ácidas caracterizan la presencia de cálculos de ácido úrico.1
En la actualidad el laboratorio clínico posee un medio de diagnóstico de fácil manipulación: las tiras reactivas. Estas han sido desarrolladas para el análisis de sangre, orina y otros fluidos biológicos.
Las tiras reactivas para el análisis de orina permiten evaluar los siguientes parámetros: leucocitos, nitritos, proteínas, pH, glucosa, cuerpos cetónicos, bilirrubina, urobilinógeno y sangre.
En nuestro país se está desarrollando este medio de diagnóstico, pues constituye un instrumento de gran utilidad para el nivel primario de atención médica, ya que para su empleo no se requiere de personal entrenado ni de equipos de laboratorio.3,4
Dada la importancia que reviste el uso de las tiras reactivas para el análisis de orina, en la Empresa de Productos Biológicas "Carlos J. Finlay" se desarrolló una tira biparamétrica para determinar pH y proteínas en este fluido biológico, y el estudio del comportamiento de ésta constituyó el objetivo de nuestro trabajo.
MATERIAL Y METODO
Se utilizaron tiras reactivas de 80 x 6 mm para determinar pH y proteínas en orina del lote 8001, con 2 zonas reactivas:
Zona de pH: impregnada en una solución de los indicadores rojo de metilo y bromotimol azul.
Zona de proteínas: impregnada en una solución regulada con bromofenol azul.
La determinación de proteínas con el empleo de las tiras reactivas está basada en la propiedad que éstas poseen de desplazar el máximo de absorción de algunos indicadores al unirse a ellas. El indicador bromofenol azul en presencia de proteínas y a valor de pH constante muestra un cambio de color que va de amarillo a azul al aumentar la concentración de proteínas.5,6
La determinación de pH con la utilización de la tira reactiva se basa en el cambio de color de los indicadores contenidos en el papel en el rango de pH de 5 a 9.7
Se emplearon soluciones reguladoras HCl-Na2HPO4 en el rango de pH de 4 a 8 y solución reguladora de ácido cítrico-tetraborato de sodio a pH 9.
Se prepararon soluciones de albúminas a concentraciones de: 0,17-0,20; 0,30-0,70; 0,90-1,30; 1,50-1,80 y mayor que 5,0 g/L en solución salina 8,5 g/L y en las soluciones reguladoras antes mencionadas. Se utilizó albúmina bovina al 96 % de pureza con coeficiente de extinción molar 6,5. En todos los casos se corroboró la concentración de albúmina de las soluciones con la utilización del coeficiente de extinción molar.8,9
La determinación de proteínas se efectuó por el método de Biuret modificado, en el cual las proteínas presentes en la orina son precipitadas con ácido tricloroacético y redisueltas con hidróxido de sodio, de manera que se forma un complejo coloreado con el reactivo Benedict cualitativo.10
La concentración de proteínas es proporcional a la intensidad de color.
MODO DE EMPLEO DE LA TIRA
Se toma la tira de ensayo y se sumerje en orina fresca aproximadamente 10 s, se deja escurrir el exceso de orina apoyando la tira en el borde del recipiente. Se comparan los colores de la tira con los de la escala para definir a qué valor corresponde.Las muestras de orina se analizaron comparativamente con la utilización de la tira reactiva y el método de Biuret modificado. El pH fue medido en un equipo Radiometer pH meter 26.
Se efectuó la evaluación de las tiras en función del tiempo.
RESULTADOS Y DISCUSION
El análisis del comportamiento de la tira reactiva con soluciones de albúmina de concentraciones conocidas y valores de pH en el rango de 4 a 9, se realizó para ambas zonas de la tira individualmente.En la tabla 1 se observa que el cambio cromático que se produce en la zona de pH es perfectamente diferenciable en valores entre 5 y 9, rango en el cual varía el pH de la orina, dicho cambio se mantiene constante para el número de tiras analizadas.
En la tabla 2 se observa que el cambio de color que se produce en la zona de proteínas permite diferenciar distintas concentraciones de albúmina; además se obtiene repetibilidad en dicho cambio.
COMPORTAMIENTO DE LA TIRA REACTIVA CON SOLUCIONES REGULADAS DE ALBUMINA
Los resultados obtenidos en este análisis nos muestran que tanto la zona de pH, como la zona de proteínas mantienen el mismo cambio cromático al ser analizadas cada una individualmente, lo que permite afirmar que la determinación de proteínas no está influida por el valor de pH, aspecto éste muy importante para el uso de la tira reactiva en el terreno.Según se refleja en la tabla 2, la zona de proteínas muestra un cambio de color definido a concentraciones alrededor de 0,3 g/L, lo que corresponde con el comportamiento deseado, pues valores superiores a éste se consideran patológicos.
El trabajo con las muestras de orina se efectuó con la tira reactiva y con los métodos analíticos descritos, con vistas a precisar la concordancia de ambos resultados.
Los resultados se muestran en las tablas 3 y 4.
Total de muestras analizadas: 70; rango de concentración de proteínas (g/L): 0,0024-14,65; rango de concentración de proteínas por tira (g/L): 0,3- > 5,0.
En la mayor parte de las muestras analizadas los valores de pH y concentración de proteínas por la tira, se corresponden con el de las determinaciones cuantitativas realizadas.
En la determinación de proteínas hubo 2 casos en los que los resultados de los análisis realizados por ambos métodos no están en correspondencia, y en la determinación de pH fueron tres los resultados no concordantes, lo cual representa el 2,86 y 4,28 %, respectivamente, del total de muestras analizadas.
Las diferencias encontradas entre ambos métodos están relacionadas con la conservación de las muestras.
Las tiras reactivas mantienen un comportamiento estable para los 2 pará-metros hasta 18 meses después de producidas.
CONCLUSIONES
- El cambio cromático que se produce en ambas zonas de la tira reactiva es claramente diferenciable para los rangos de valores analizados, por lo que ésta brinda una información semicuantitativa de los niveles de pH y proteínas en orina.
- La determinación de proteínas utilizando la tira reactiva no está influida por el valor de pH de la orina.
- Las tiras reactivas mantienen un comportamiento estable hasta 18 meses después de su producción, por lo que se recomienda su utilización como medio de diagnóstico.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
- Henry RJ. Química Clínica. Bases y técnicas. 2 Ed. Barcelona: Editorial JIMS, 1980;t 1 y 2.
- Kissner, PZ. Proteinuria and the nephrotic syndrome. En: Weller JM, ed. Fundamentals of nephrology. San Francisco: Harper and Row, 1979:226-34.
- Svoboda V. Diagnostic paper strip for testing and quantitative determination of proteins in biological fluids. CL.G01N 33/16. 1978 Mar 15.
- Tomida H, Iryo G, Cell Jr. Measurement of proteins in urine by test paper method. Kensato Gijutsu (Kyoto Univ, Kyoto Japan) 1982;10(8):721-5.
- Miyasaki T, Omoto K. Reagent for the detection of proteins in body fluids. 84/33, 785. 1985 Sept 12.
- Lampe J. Test strip for detecting proteins in urine. 253,226 1984 Dec 19.
- Miyasaki T, Omoto K. Reagent for measurement of the pH value. 84/33, 786. 1985 Sept 12.
- Gyre WL. Comparison of general methods of semiquantitative determination for urinary proteins. Clin Chem 1977;23(5):876-9.
- Bergnzi, LG, Ballocchi S, Fontana F, Poisetti PG, Scarpioni L. Determination of proteinuria. Comparison between methods based on indicator protein error and immunoassay of albumin. Minerva Nefrol 1981;28(3):191-3.
- Searcy RL, Gordon GF, Simms NM: Lancet 1963;2:1232.
Ing. Yuria Bilbao Abraham. Empresa de Productos Biológicos "Carlos J. Finlay". Infanta No. 1162, municipio Centro Habana, Ciudad de La Habana 10300, Cuba.
<1>Ingeniera Química. Aspirante a Investigadora.
<2>Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. Aspirante a Investigadora.
<3>Licenciada en Química. Investigadora Auxiliar.
<4>Licenciada en Ciencias Biológicas.